肠炎沙门氏菌核酸标准样品、其建立方法及应用技术

本发明专利技术公开一种肠炎沙门氏菌(Salmonella?Enteritidis)核酸标准样品、其建立方法及应用，其通过菌株培养、鉴定、核酸标准样品的制备、核酸标准样品的干燥、均匀性和稳定性检查、定性检定、核酸标准样品定值等项工作,获得一种肠炎沙门氏菌(Salmonella?Enteritidis)核酸标准样品。本发明专利技术解决了国内食品中致病菌核酸标准样品紧缺的状况，对解决食品中致病菌核酸标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国食品中致病菌分子生物学检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义，并对开展食品中致病菌分子生物学检测工作，食品致病菌核酸标准样品具有广阔的市场，有较大的经济效益和社会效益。

Salmonella enteritidis nucleic acid standard sample, its establishment method and Application

The invention discloses a Salmonella enteritidis (Salmonella? Enteritidis) nucleic acid standard samples, its establishment method and application, through the culture of bacterial strain, identification, nucleic acid and nucleic acid standard sample preparation of standard sample drying, homogeneity and stability test, qualitative check, nucleic acid standard sample settings work, get a for Salmonella enteritidis (Salmonella? Enteritidis) nucleic acid standard samples. The invention solves the shortage of pathogen nucleic acid samples caused by the domestic food, to solve the technical preparation technology and stability of pathogen nucleic acid in food standard sample, actively carry out the development of molecular biology to pathogen detection standard sample of food in China, to fill the blank in the field of measurement, has very important practical significance. And to carry out pathogen molecular detection work in food, food borne pathogen nucleic acid standard sample has a broad market, has great economic and social benefits.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品检测
，具体涉及肠炎沙门氏菌核酸标准样品制备、其建立方法及其在检测肠炎沙门氏菌中的应用。
技术介绍
食品安全是重大公共卫生问题，是制约我国经济发展的重要因素。而微生物污染造成的食源性疾病，是我国食品安全中最突出的问题。近年来，随着食品产业结构的调整、经济全球化与国际贸易的迅速发展，我国食源性疾病的防控面临一系列新问题和挑战。食品中微生物引起食源性疾病的预防与控制已引起了世界各国关注，食品中微生物的检测技术是预防与控制的关健的技术环节。目前我国食品中微生物的检测仍以传统的 病原菌培养、血清抗体检测、和生化特征比较水平为主，不能满足日益发展的检验检疫工作的需要。常规分离培养耗时长，灵敏度低，某些微生物的培养极为困难。随着2007年《食品中致病菌检测方法——实时PCR法》(SN/T1870-2007)和《食品中多种致病菌快速检测方法一PCR法》(SN/T1869-2007)两项检验检疫行业标准的发布实施，以及即将发布实施的《食品中致病菌检测方法一DHPLC法》等系列分子生物学检测国家标准和行业标准。简单快速，灵敏度高的PCR、实时荧光PCR技术，正在食品致病菌检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种肠炎沙门氏菌标准样品，其特征在于通过以下方法制备 1.基因组核酸的提取 ①肠炎沙门氏菌(SalmonellaEnteritidis) ATCC :13076，经菌株活化、增菌培养； ②将步骤①获得的增菌培养液于4000g，4°C离心15min； ③吸弃上清，取沉淀I 3mL，加pH8.O的TE溶液IOmL悬浮，加O. 5mL浓度为100g/L SDS和50 μ L浓度为20mg/mL的蛋白酶K，混匀，37°C温浴Ih ； ④加2mL浓度为5mol/LNaCl，混匀，加I. 5mL CTAB-NaCl混合溶液，混匀，65°C温浴20min ;其中，CTAB-NaCl 混合溶液为 100g/L CTAB 和 O. 7mol/L NaCl ； ⑤取上清，加与上清等体积的酹-氯仿-异戍醇混合液，混勻，6000g离心IOmin;其中，酚-氯仿-异戊醇混合液中酚氯仿异戊醇的体积比为25 24 I ； ⑥取上清，加与上清等体积的氯仿-异戍醇混合液，混勻，6000g离心IOmin;其中，氯仿-异戊醇混合液中氯仿异戊醇的体积比为24 : I ; ⑦取上清，加上清O.6倍体积的异丙醇，混匀，13000g离心IOmin ； ⑧取沉淀，用70%乙醇清洗2次，干燥，加4mLpH8. O的TE溶液溶解，获得肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)ATCC :13076 基因组核酸溶液; ⑨紫外分光光度计测步骤⑧所得产物的260nm和280nm处的光密度值，当0D26(l/0D28(l比值在I. 7 I. 9之间时，分装核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹际娟，于兵，徐杨，徐君怡，
申请(专利权)人：曹际娟，于兵，徐杨，徐君怡，
类型：发明
国别省市：