通过质谱法定量甲状腺球蛋白制造技术

提供利用各种纯化步骤和随后的质谱法确定样品中甲状腺球蛋白的量的方法。该方法总体上涉及纯化试样中的甲状腺球蛋白、消化甲状腺球蛋白以形成肽T129、纯化肽T129、电离肽T129、检测生成的肽T129离子的量、和将肽T129离子的量与原始存在于样品中的甲状腺球蛋白的量相关联。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请根据《美国法典》第35卷第119节第五款(35U.S.C.§119(e))的规定要求2012年9月20日提交的美国临时申请序列号：61/703,721的权益，其全部内容通过引用并入本专利技术。专利
本专利技术涉及甲状腺球蛋白的定量。在特定方面，本专利技术涉及通过质谱法定量甲状腺球蛋白的方法。专利技术背景本公开背景的以下描述仅仅作为理解本专利技术的辅助而提供，且不认为对本专利技术描述或构成现有技术。甲状腺球蛋白或Tg是分子量为660kDa的大二聚体分泌性糖蛋白，其由非共价结合的同型二聚体组成。Tg分子以几种形式存在。在UniProt Knowledgebase(Swiss-Prot+TrEMBL)找到的三种主要的Tg分子序列是P01266(人甲状腺球蛋白前体)、P01266-2(P01266的同种型2)和Q59GF02(人甲状腺球蛋白变体)(分别参见图1、2和3)。P01266是P01266的主要变体，其长度为2768个AA；P01266-本文档来自技高网...

【技术保护点】
确定试样中甲状腺球蛋白的量的方法，包括：(a)消化所述试样中的甲状腺球蛋白和添加的同位素标记的甲状腺球蛋白肽标准品，以形成Tg肽和Tg肽标准产物；(b)纯化来自步骤(a)的所述Tg肽和Tg肽标准产物；(c)电离来自步骤(b)的所述Tg肽和Tg肽标准产物，以产生一种或多种可通过质谱法检测的Tg肽离子和Tg肽标准产物离子；(d)通过质谱法检测来自步骤(c)的一种或多种离子的量；其中步骤(d)中检测的一种或多种离子的量与所述试样中甲状腺球蛋白的量和在步骤(a)中消化的甲状腺球蛋白肽标准品的量相关；和(e)确定所述试样中甲状腺球蛋白的量，考虑步骤(d)中检测的Tg肽标准产物的离子的量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.09.20 US 61/703,7211.确定试样中甲状腺球蛋白的量的方法，包括：
(a)消化所述试样中的甲状腺球蛋白和添加的同位素标记的甲状腺球蛋白肽标
准品，以形成Tg肽和Tg肽标准产物；
(b)纯化来自步骤(a)的所述Tg肽和Tg肽标准产物；
(c)电离来自步骤(b)的所述Tg肽和Tg肽标准产物，以产生一种或多种可
通过质谱法检测的Tg肽离子和Tg肽标准产物离子；
(d)通过质谱法检测来自步骤(c)的一种或多种离子的量；其中步骤(d)中
检测的一种或多种离子的量与所述试样中甲状腺球蛋白的量和在步骤(a)中消化的
甲状腺球蛋白肽标准品的量相关；和
(e)确定所述试样中甲状腺球蛋白的量，考虑步骤(d)中检测的Tg肽标准产
物的离子的量。
2.权利要求1所述的方法，其中所述甲状腺球蛋白肽标准品长度小于50个氨基
酸残基。
3.权利要求2所述的方法，其中Tg肽和Tg肽标准产物均包括T129肽(SEQ 
ID NO：1，VIFDANAPVAVR)。
4.权利要求3所述的方法，其中所述甲状腺球蛋白肽标准品包括SEQ ID NO：2
的氨基酸序列(KVPESKVIFDANAPVAVRSKVPDS)。
5.权利要求3所述的方法，其中所述甲状腺球蛋白肽标准品包括与SEQ ID 
NO：2具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列，并可在步骤(a)的消化之后形
成T129肽。
6.权利要求3所述的方法，其中所述甲状腺球蛋白肽标准品的一个或多个残基
用13C、15N或二者进行同位素标记。
7.权利要求6所述的方法，其中所述甲状腺球蛋白肽标准品的一个或多个缬氨
酸残基是同位素标记的。
8.权利要求1所述的方法，其中添加至所述试样的所述同位素标记的甲状腺球
蛋白肽标准品的量是已知的。
9.权利要求1所述的方法，其中考虑在步骤(a)的消化效率而调整所述试样中
甲状腺球蛋白的量，所述的消化效率由Tg肽标准品的量和添加至所述试样的所述同
位素标记的甲状腺球蛋白肽标准品的量之间的比率来测量。
10.权利要求1所述的方法，其中在步骤(c)中产生的所述Tg肽离子包括选自
具有541.3±0.5、612.3±0.5、636.4±0.5、726.4±0.5、797.4±0.5、912.4±0.5、或
1059.5±...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·张，N·J·克拉克，R·E·赖茨，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：美国;US