通过质谱法的C肽检测制造技术

本发明专利技术的发明专利技术名称为通过质谱法的C肽检测。描述了用于测量样品中C肽的量的方法。更具体地，描述了利用与串联质谱技术或高分辨率/高准确度质谱技术结合的线上萃取方法检测和定量样品中C肽的质谱方法。本发明专利技术提供通过质谱法检测C肽的存在或量的方法。谱法检测C肽的存在或量的方法。谱法检测C肽的存在或量的方法。

【技术实现步骤摘要】
通过质谱法的C肽检测
[0001]本申请是分案申请，原申请的申请日是2013年12月23日，申请号为201380073416.X(PCT/US2013/077575)，专利技术名称为“通过质谱法的C肽检测”。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请根据美国法典第35卷第102条(e)款规定要求于2012年12月26日提交的美国临时申请序列号61/745,976的权益，其内容通过引用整体并入本文。
专利

[0004]本专利技术涉及定量测量C肽。在具体方面，本专利技术涉及通过质谱法定量测量C肽的方法。
[0005]专利技术背景
[0006]以下对本专利技术背景的描述被提供仅仅是作为帮助理解本专利技术，并不意在描述或构成本专利技术的现有技术。
[0007]C肽是在从胰腺内胞吞小泡释放之前，作为胰岛素原(通过裂解)转化成胰岛素的过程的部分而形成的肽。人C肽的摩尔质量约为3020.3amu。
[0008]C肽与细胞表面的受体结合，并将引起刺激Na+、K+ATP酶和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的信号传导途径激活。这些酶在2型糖尿病中都具有降低的活性。C肽也起着修复动脉肌层的作用。
[0009]C肽水平而非胰岛素通常在新诊断出患糖尿病的患者中测量，因为门静脉中的胰岛素浓度会比外周循环高2至10倍的范围。肝脏从血浆中提取约一半的胰岛素，但这会随着受试者的营养状况而变化。因此，C肽可以是比胰岛素直接测量更加全面的胰岛素状态的指标。1型糖尿病患者无法有效产生胰岛素，因而将有下降的C肽水平，而2型糖尿病患者的C肽水平通常是正常的或甚至升高的。因此，C肽测量用于将1型糖尿病与2型糖尿病区分开。另外，当在天然胰岛素产生过程中形成C肽时，在经受胰岛素治疗的患者中测量C肽可有助于确定患者正产生多少天然胰岛素。
[0010]C肽测量还可用于确定患者是否可能具有与多发性内分泌肿瘤综合征相关的胃泌素瘤。存在胃泌素瘤的大量多发性内分泌肿瘤综合症还包括胰腺腺瘤、甲状旁腺腺瘤和垂体腺瘤。更高水平的C肽与胃泌素瘤的存在一起提示，除了胃之外的器官可携带肿瘤。C肽还可在疑似有胰岛素滥用的患者和患多囊卵巢综合征的妇女中进行评估，以评估胰岛素抗性的程度。
[0011]专利技术概述
[0012]本专利技术提供通过质谱法测定样品中C肽的存在或含量的方法。
[0013]本文呈现的一些实施方式利用串联质谱法。在这些实施方式的一些中，方法包括：(a)将疑似含C肽的样品经历高效液相色谱法(HPLC)以得到C肽富集的部分；(b)将富集的C肽在适合产生质谱法可检测的一种或多种C肽离子的条件下经历电离源；(c)通过串联质谱法测定一种或多种C肽离子的量，其中所测定的离子包括具有质荷比为1007.5
±
0.5的前体离子和选自具有由927.6
±
0.5、785.4
±
0.5和646.1
±
0.5组成的质荷比的离子组的一种或
多种碎片离子。在这些实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子的量与样品中C肽的量相关，例如，用于测定样品中C肽的量。在一些实施方式中，HPLC是1
‑
D HPLC。在一些实施方式中，选自927.6
±
0.5、785.4
±
0.5和646.1
±
0.5的两种或多种碎片离子的量在步骤(c)中被测定。
[0014]在利用串联质谱法的其它实施方式中，方法包括：(a)将样品经历1
‑
D高效液相色谱法(1
‑
D HPLC)以得到C肽富集的部分；(b)将C肽富集的部分在适合产生质谱法可检测的一种或多种C肽离子的条件下经历电离源；和(c)通过串联质谱法测定一种或多种C肽离子的量。在这些实施方式中，步骤(c)中所测定的离子的量与样品中C肽的量相关。在一些实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子包括质荷比(m/z)为约1007.5
±
0.5的前体离子。在一些相关的实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子进一步包括选自具有质荷比(m/z)为约927.6
±
0.5、785.4
±
0.5和646.1
±
0.5的离子组的一种或多种碎片离子。在一些相关的实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子包括选自具有质荷比(m/z)为约927.6
±
0.5、785.4
±
0.5和646.1
±
0.5的离子组的两种或多种碎片离子。
[0015]在利用串联质谱法的实施方式中，串联质谱法可通过任何本领域已知的方法进行，包括例如多反应离子监测、前体离子扫描或产物离子扫描。
[0016]在一些实施方式中，串联质谱法包括将具有质荷比为1007.5
±
0.50的前体离子裂解成一种或多种碎片离子。在某些相关的实施方式中，一种或多种碎片离子包括选自具有质荷比为927.6
±
0.5、785.4
±
0.5、646.1
±
0.5、147.0
±
0.5和260.3
±
0.5的离子的一种或多种离子。在其它相关的实施方式中，一种或多种碎片离子包括选自具有质荷比为927.6
±
0.5、785.4
±
0.5、646.1
±
0.5的离子的一种或多种离子。在两种或多种碎片离子的量被测定的实施方式中，所述量可经历本领域已知的任何数学处理以便使所测量的离子量与样品中C肽的量相关。例如，两种或多种碎片离子的量可以作为测定样品中C肽量的部分而被求和。
[0017]本文呈现的一些实施方式利用高分辨率/高准确度质谱法。在这些实施方式中，方法包括：(a)将疑似含C肽的样品经历高效液相色谱法(HPLC)以得到C肽富集的部分；(b)将C肽富集的部分在适合产生质谱法可检测的一种或多种C肽离子的条件下经历电离源；和(c)通过高分辨率/高准确度质谱法测定一种或多种C肽离子的量。在这些实施方式中，步骤(c)中所测定的离子的量与样品中C肽的量相关。
[0018]在一些实施方式中，高分辨率/高准确度质谱法是在分辨率或FWHM(极大值半处的全宽度)为10,000和质量准确度为50ppm下进行的。在一些实施方式中，高分辨率/高准确度质谱仪是高分辨率/高准确度飞行时间(TOF)质谱仪。在一些实施方式中，HPLC是1
‑
D HPLC。在一些实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子包括具有电荷为2+或3+的离子。在一些实施方式中，步骤(c)中所测定的一种或多种离子包括选自具有质荷比(m/z)在约1007.5
±
1和1510.3
±
1范围内的离子组的离子。
[0019]在一些实施方式中，高分辨率/高准确度质谱法在大于或等于约10,000的分辨率(FWHM)进行，如大于或等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.通过串联质谱法测定样品中C肽的量的方法，所述方法包括：(a).将疑似含有C肽的样品经历高效液相色谱法(HPLC)以得到C肽富集的部分；和(b).将所述富集的C肽在适合产生质谱法可检测的一种或多种C肽离子的条件下经历电离源；(c).通过串联质谱法测定一种或多种C肽离子的量，所述一种或多种C肽离子包括785.4
±
0.5或646.1
±
0.5的质荷比；其中步骤(c)中测定的离子的量与所述样品中C肽的量相关，其中其中所述样品在HPLC之前经历固相萃取(SPE)，并且其中所述SPE和HPLC用线上处理进行。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述HPLC是1
‑
D HPLC。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离源是电喷雾(ESI)电离源。4.通过串联质谱法测定样品中C肽的量的方法，所述方法包括：(a).将疑似含有C肽的样品经历1
‑
D高效液相色谱法(1
‑
D HPLC)以得到C肽富集的部分；(b).将所述C肽富集的部分在适合产生质谱法可检测的一种或多种C肽离子的条件下经历电离源；(c).通过串联质谱法测定一种或多种C肽离子的量，所述一种或多种C肽离子包括785.4
±
0.5或646.1
±
0.5的质荷比；其中步骤(c)中测定的离子的量与所述样品中C肽的量相关，其中所述样品在1
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：