通过质谱分析法检测双氢睾酮的方法技术

提供的是使用质谱分析法测定样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法。一般而言，该方法包括离子化样品中的DHT，并且检测和定量所述离子的量以测定样品中DHT的量。

The method of detection of DHT by mass spectrometry

Provide is the determination of DHT analysis using mass spectrometry (DHT) method, the amount of. In general, the method includes the ionization of DHT in the sample and the detection and quantification of the amount of the ion to determine the amount of DHT in the sample.

【技术实现步骤摘要】
通过质谱分析法检测双氢睾酮的方法本申请为分案申请，原申请的申请日是2009年9月30日，申请号是200980148812.8(PCT/US2009/059090)，专利技术名称为“通过质谱分析法检测双氢睾酮的方法”。相关专利申请的交叉参考本申请要求2008年11月17日提交的美国申请号12/272,663的优先权，并且要求2008年10月6日提交的美国临时申请号No.61/103,202的权益，每一篇申请以其全部通过引用并入本文。
本申请涉及双氢睾酮(DHT)的检测。在具体方面中，本申请涉及通过质谱分析法检测双氢睾酮(DHT)的方法。
技术介绍
提供下列的
技术介绍
描述仅仅作为帮助理解本专利技术，并不承认其描述或构成本专利技术的现有技术。双氢睾酮(DHT)[(17β-羟基-5a-雄烷-3-酮)]是分子量为290.4道尔顿的类固醇激素。DHT是由睾酮外周组织合成的有效雄激素。过量的DHT分泌经由转化为睾酮可以产生痤疮、多毛症和男性化。DHT是前列腺增生的病因(causalagent)，并且血液中的测量可用于评估对睾酮到DHT转化的抑制剂的顺应性和应答。测量样品中DHT的质谱分析法已被报导。参见，例如Chang，Y.，等人，Analyst2003，128：363-8；Caruso，D.，等人，NeurochemInt2008，52：560-8；Wang，C.，等人，Steroids2008，XXX：XXX-XXX(doi：10.1016ij.steroids.2008.05.004)；Zhao，M.，等人，Steroids2004，69：721-6；Janzen，N.，等人，JChromaB2008，861：117-22；Licea-Perez，H.，等人，Steroids2008，73：601-10；Kashiwagi，B.，等人，JAndrology2005，26：586-91；Kashiwagi，B.，等人，Urology2005，66：218-23；Umera，M.，等人，CancerSci2007，99：81-86；和Mohler，等人，美国专利中请号11/973，127(2007年10月8日提交)。
技术实现思路
本专利技术提供通过包括串联质谱分析法在内的质谱分析法检测样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法。优选地，本专利技术的方法不包括在质谱分析法分析之前衍生样品中的DHT。在一个方面，提供测定体液样品中未衍生的双氢睾酮(DHT)的量的方法。该方面的方法包括：(a)通过固相萃取(solidphaseextraction)纯化体液样品中的DHT；(b)离子化来自体液样品的DHT以产生一种或多种通过质谱分析法可检测的DHT离子，其中所产生的离子选自质荷比为291.10±0.50的DHT先驱离子，和选自255.20±0.50和79.20±0.50的一种或多种DHT碎片离子；和(c)通过质谱分析法测定一种或多种DHT离子的量。在测量一种或多种DHT离子的量之后，DHT离子(一种或多种)的量被用于计算测试样品中的未衍生的DHT的量。在一些实施方式中，质谱分析法是串联质谱分析法。在一些实施方式中，固相萃取和质谱分析以联机方式进行。在一些实施方式中，作为高紊度液相色谱(highturbulenceliquidchromatography，HTLC)进行固相萃取。在一些实施方式中，方法进一步包括在质谱分析法之前使用高效液相色谱(HPLC)纯化体液样品中的DHT；优选使用联机处理。在一些实施方式中，体液样品是血浆或血清。在一些实施方式中，方法具有在5ng/dL到200ng/dL——包括5ng/dL和200ng/dL——的范围内的定量限制。在一些实施方式中，通过质谱分析法检测的一种或多种DHT离子(一种或多种)的量通过与内标比较被用于计算测试样品中未衍生的DHT的量；内标优选地为16，16，17-d3双氢睾酮。上面列出的实施方式的特征在本专利技术的方法中可以没有限制地进行组合使用。在第二方面，提供通过质谱分析法测定测试样品中未衍生的双氢睾酮(DHT)的量的方法。该方面的方法包括：(a)使用高紊度液相色谱(HTLC)纯化测试样品中的DHT；(b)离子化来自测试样品的DHT以产生一种或多种通过质谱分析法可检测的DHT离子；和(c)通过质谱分析法测定一种或多种DHT离子的量。在这些方法中，测量的DHT离子(一种或多种)的量被用于计算测试样品中的DHT的量。在一些实施方式中，质谱分析法是串联质谱分析法。在一些实施方式中，纯化测试样品中的DHT包括用高效液相色谱(HPLC)纯化；优选地配置用于联机处理。在一些实施方式中，测试样品是体液样品；优选地是血浆或血清。在一些实施方式中，通过质谱分析法可检测的DHT离子包括选自质/荷比为291.10±0.50、255.20±0.50和79.20±0.50的离子的一种或多种离子。在一些实施方式中，离子化DHT的步骤包括生成质/荷比为291.10±0.50的先驱离子，和生成选自质/荷比为255.20±0.50和79.20±0.50的离子的一种或多种碎片离子。在一些实施方式中，方法具有在5ng/dL到200ng/dL——包括5ng/dL和200ng/dL——的范围内的定量限制。在一些实施方式中，通过质谱分析法检测的一种或多种DHT离子(一种或多种)的量通过与内标比较被用于确定测试样品中未衍生的DHT的量；内标优选地为16，16，17-d3双氢睾酮。上面列出的实施方式的特征在本专利技术的方法中可以没有限制地进行组合使用。在第三方面，提供通过串联质谱分析法测定体液样品中未衍生的双氢睾酮(DHT)的量的方法。该方面的方法包括：(a)通过高紊度液相色谱(HTLC)从体液样品纯化DHT；(b)生成具有291.10±0.50的质/荷比的所述DHT的先驱离子；(c)生成先驱离子的一种或多种碎片离子，其中所述的一种或多种碎片离子的至少一种包括选自具有255.20±0.50和79.20±0.50的质/荷比的碎片离子的碎片离子；和(d)检测在步骤(b)或(c)或两者中生成的所述离子的一种或多种的量。检测的离子的量被用于计算体液样品中未衍生的DHT的量。在一些实施方式中，从测试样品纯化DHT进一步包括用高效液相色谱(HPLC)；优选地配置进行联机处理。在一些实施方式中，体液样品是血浆或血清。在一些实施方式中，方法具有在5ng/dL到200ng/dL——包括5ng/dL和200ng/dL——的范围内的定量限制。在一些实施方式中，通过质谱分析法检测的一种或多种DHT离子(一种或多种)的量通过与内标比较被用于计算测试样品中未衍生的DHT的量；内标优选地为16，16，17-d3双氢睾酮。上面列出的实施方式的特征在本专利技术的方法中可以没有限制地进行组合使用。本专利技术的方法包括液相色谱与质谱分析法的组合。在优选的实施方式中，液相色谱是HPLC。一个优选的实施方式只使用HPLC或者与一种或多种纯化方法例如诸如HTLC和/或蛋白质沉淀和过滤组合使用HPLC，以纯化样品中的DHT。在另一优选的实施方式中，质谱分析法是串联质谱分析法(MS/MS)。在本文公开的方法的某些优选实施方式中，质谱分析法以正离子模式进行。可选地，质谱分析法以负离子模式进行。多种离子本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过质谱分析法测定测试样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法，所述方法包括：a.在适合于产生一种或多种质谱分析法可检测的离子的条件下，离子化通过固相萃取(SPE)从所述测试样品纯化的DHT；b.通过串联质谱分析法测定一种或多种离子的量，其中所述串联质谱分析法包括碎片化先驱离子生成具有79.20±0.50的质/荷比的碎片离子；和c.使用所述测定量的一种或多种离子计算体液样品中DHT的量。

【技术特征摘要】
2008.10.06 US 61/103,202;2008.11.17 US 12/272,6631.通过质谱分析法测定测试样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法，所述方法包括：a.在适合于产生一种或多种质谱分析法可检测的离子的条件下，离子化通过固相萃取(SPE)从所述测试样品纯化的DHT；b.通过串联质谱分析法测定一种或多种离子的量，其中所述串联质谱分析法包括碎片化先驱离子生成具有79.20±0.50的质/荷比的碎片离子；和c.使用所述测定量的一种或多种离子计算体液样品中DHT的量。2.权利要求1所述的方法，其中通过大气压化学电离(APCI)进行所述离子化。3.权利要求1所述的方法，其中所述SPE是高紊度液相色谱(HTLC)。4.权利要求1所述的方法，其中在离子化之前用高效液相色谱(HPLC)从所述测试样品进一步纯化所述DHT。5.权利要求4所述的方法，其中所述HTLC和所述HPLC被配置用于联机处理。6.权利要求1所述的方法，其中所述测试样品是体液样品。7.权利要求1所述的方法，其中所述测试样品是血浆或血清。8.权利要求1所述的方法，其中先驱离子具有291.10±0.50的质/荷比。9.权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种碎片离子进一步包括具有255.20±0.50的质/荷比的离子。10.权利要求1所述的方法，其中所述方法能够测定所述样品中浓度在5.0ng/dL至200ng/dL范围内的DHT的量。11.测定体液样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法，所述方法包括：a.在适合于产生一种或多种通过质谱分析法可检测的离子的条件下，通过大气压化学电离(APCI)...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·戈沙尔，N·J·克拉克，R·瑞茨，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：美国,US