本发明专利技术公开了一种高效液相串联质谱分析系统及其分析法，该系统包括：高效液相色谱仪、质谱仪、脉冲进样器、电子脉冲装置、数据自动处理模块；其分析方法，包括：(1)待测样品经体外的生物孵育实验后，生成体外的生物样品；(2)加入终止溶剂，终止反应；(3)终止后的生物样品经过离心，取上清，经稀释后进样，进行高效液相串联质谱分析。本发明专利技术能够大大地节约分析时间，提高仪器使用率，节约人力等方面的成本，从而也为在新药筛选阶段节约了大量的时间，加快了实验进程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种液相串联质谱分析(LC-MS/MS)系统及方法，特别是涉及一种用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱分析系统及其分析法。
技术介绍
高通量筛选(high throughput screening, HTS)技术是新药开发过程中不可缺少的一环。新药研发的长周期要求必须提高开发效率，因此，高通量筛选方法得到了大力推广。LC-MS/MS是液相色谱与质谱仪串联使用的一种分离分析检测仪，它主要利用液相色谱出色的分离效果以及质谱的高灵敏度，高选择性的特点来完成化合物在医药领域内的高通量筛选以及更进一步地研究。LC-MS/MS联用方法有很多种，目前使用较多的有普通HPLC(High Performance LiquidChromatography，高效液相色谱法)、CTC自动进样器(瑞士 CTC公司)与质谱串联使用，也有自带自动进样器的 HPLC 或者 UPLC(Ultra Performance Liquid chromatography, 超高效液相色谱)与质谱串联使用，这两者的缺点在于自动进样器的延迟时间太长导致整个样品分析的时间延长导致浪费，此外还有因为自带的自动进样器板位少，所以一次所能承载的样品数比较少不利于充分利用仪器。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱分析系统及其分析法。本专利技术可以减少进样体积、缩短进样时间，并且能根据不同项目的要求最大限度地减少分析物残留(Carry over)的影响，以及能更进一步地提高被分析物的检测灵敏度。为解决上述技术问题，本专利技术的用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱(HPLC-MS/MS)分析系统，包括高效液相色谱仪、质谱仪，还包括脉冲进样器，用于调整脉冲进样体积，确保样品分析的稳定性、准确度以及精密度；电子脉冲装置，用于反冲进样阀，辅助完成洗针过程；数据自动处理模块，用于经高效液相色谱仪和质谱仪分析得到的批量数据，通过运用宏来完成自动化处理。所述高效液相色谱仪中，色谱柱为2 3cm长的反相C18色谱柱。 所述脉冲进样器为杰尔森自动进样器。 所述电子脉冲装置为电子脉冲反冲阀，其组成部分包括220V电源、交流适配器、 中间继电器、时间继电器、计量泵和杰尔森限位开关六部分组成；其连接关系为Gilson(杰尔森)限位开关接中间继电器；中间继电器和时间继电器接220V电源；中间继电器和计量泵接24V直流电源；计量泵接中间继电器和时间继电器。电子脉冲反冲阀的运作原理是外部限位开关给中间继电器一个12V信号，中间继电器开始工作；利用中间继电器常开状态供给时间继电器220V电源，时间继电器开始工作；通过调节可使时间继电器在规定时间内闭合和断开其控制线路的频率；线路开闭控制计量泵工作。所述数据自动处理模块为以DiscoveryQuant 2. O和Microsoft Excel VBA(MicrosoftCorporation)为基础设计的数据处理模块；其中，DiscoveryQuant 2. O包括 DiscoveryQuant-Optimize 禾口 DiscoveryQuant—Analyze(Applied Biosystems Inc.)另外，本专利技术还公开了一种用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱的分析方法，包括步骤 (1)待测样品经体外的生物孵育实验后，生成体外的生物样品； (2)加入终止溶剂(包括乙腈和甲醇)，终止反应；(3)终止后的生物样品经过离心，取上清，经稀释后进样，进行高效液相串联质谱分析。其中，步骤(1)中的体外的生物孵育实验，包括肝微粒体代谢稳定性的孵育实验、血浆蛋白结合的孵育实验、细胞渗透性的孵育实验、肝细胞代谢稳定性的孵育实验、待测样品间相互作用的生物孵育实验。本专利技术中的关于分析方法的建立过程中，涉及多个方面，包括1)挑选内标，对多个稳定的化合物进行方法考察优化其质谱参数并建立方法优化的模板，将选定的内标化合物参数增加到数据库中备用；2)根据需要建立不同的LC-MS/MS的方法模板；3)化合物质谱参数的优化，应用自动化软件完成批量化合物的方法优化；4)质谱方法的建立，从数据库中选择目标化合物的名称并同时选择一个或多个内标按照一定的模板批次导出化合物完整的LC-MS/MS的方法；5)用已经生成的方法对低浓度的标准品进行灵敏度考察同时进行方法的进一步优化，包括流动相的优化，液相条件的优化；6)电子脉冲装置的应用帮助改善残留对化合物分析的影响。本专利技术具有高灵敏、高选择性、高通量等优点，因此，能广泛应用于药物的高通量筛选及生物样品的分析。通过利用本专利技术的方法能够大大地节约分析时间，提高仪器使用率，节约人力等方面的成本，从而也为在新药筛选阶段节约了大量的时间，加快了实验进程。附图说明下面结合附图与具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明图1是杰尔森_高效液相色谱_质谱串联系统连接示意图；图2是洗阀装置结构示意图。具体实施例方式本实施例中的用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱(HPLC-MS/MS) 分析系统，其系统连接图如图1所示，具体包括日本岛津高效液相色谱仪LC 20 AD (Shimadzu Inc)，本实施例中色谱柱为3cm长的型号为Synergi Hydro-RP(Phenomenex. Inc)的C18反相色谱柱；日本岛津高效液相色谱仪，该系统为二元泵色谱，它的特点在于与质谱兼容性好，操作简便并且液相泵速度比较快，主要作用为快速提供梯度的液相变化；API 4000质谱仪(Applied Biosystems Inc)，该质谱仪设备是分析器，其扫描速度快，能够与本实施例中的自动进样器的快速进样匹配，灵敏度高，选择性强；Gilson(杰尔森)自动进样器，用于调整脉冲进样体积，优化脉冲进样方式，确保样品分析的稳定性、准确度以及精密度；而Gilson自动进样器的特点是进样速度快，延迟时间短，可容纳12块384或96孔板；本实施例中选用Gilson 235自动进样器；电子脉冲装置，用于反冲进样阀，辅助完成洗针过程，从而降低分析物残留；本实施例中选用电子脉冲反冲阀(即洗阀装置，如图2所示)，其组成部分有220V电源、交流适配器、中间继电器、时间继电器、计量泵和杰尔森限位开关六部分组成；其连接关系为 Gilson限位开关接中间继电器；中间继电器和时间继电器接220V电源；中间继电器和计量泵接24V直流电源；计量泵接中间继电器和时间继电器；电子脉冲反冲阀的运作原理是外部限位开关给中间继电器一个12V信号，中间继电器开始工作；利用中间继电器常开状态供给时间继电器220V电源，时间继电器开始工作；通过调节可使时间继电器在规定时间内闭合和断开其控制线路的频率；线路开闭控制计量泵工作；数据自动处理模块，是以DiscoveryQuant 2. O 和 Microsoft Excel VBA (MicrosoftCorporati on)为基础设计的数据处理模块，用于经高效液相色谱仪和质谱仪分析得到的批量数据，通过运用宏来完成自动化处理，提供工作效率；其 ψ, DiscoveryQuant 2. O 包括 DiscoveryQuant-Optimize 禾口 Discove本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种用于药物筛选及生物样品分析的高效液相串联质谱分析系统，包括：高效液相色谱仪、质谱仪，其特征在于：还包括：脉冲进样器，用于调整脉冲进样体积，确保样品分析的稳定性、准确度以及精密度；电子脉冲装置，用于反冲进样阀，辅助完成洗针过程；数据自动处理模块，用于经高效液相色谱仪和质谱仪分析得到的批量数据，通过运用宏来完成自动化处理。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，冯万勇，
申请(专利权)人：上海药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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