【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测α-突触核蛋白寡聚体的simoa试剂盒及应用，属于免疫检测领域。
技术介绍
1、随着大多数国家的人口预期寿命的增长，神经退行性疾病的发病率也越来越高。有研究表明，目前全球有超过5000万人受到神经退行性(dementia)疾病的影响，而这一数值在2050年可能上升到1.3亿。常见的神经退行性疾病有阿尔兹海默症、帕金森病、亨廷顿病和多发性硬化。其中，阿尔兹海默症是最常见的神经退行性疾病，占所有痴呆病例的60-70％。其次是帕金森病，全球患病人数超过150万。
2、帕金森病是第二常见的神经退行性疾病，目前尚无有效的治疗方法。α-突触核蛋白(α-syn)是一种与帕金森病(pd)发病机制相关的蛋白质。近年来的研究表明，错误折叠的α-突触核蛋白寡聚体是路易小体的主要成分，可以通过多种方式产生细胞毒性，包括线粒体功能障碍、内质网(er)应激、蛋白质平衡丧失、突触损伤、细胞凋亡和神经炎症，进而导致pd的病理性改变。因此，检测血浆促进α-突触核蛋白形成能力或α-突触核蛋白在血浆中的寡聚体形成率有助于了解α-突触核蛋白在帕金森病人神经组织易于聚集的机体内在环境因素的改变。
3、现有对血液中α-突触核蛋白的测定方法主要是利用elisa方法直接检测血浆或血清中α-突触核蛋白及寡聚体的含量。但是血浆和血清中的α-突触核蛋白寡聚体浓度相当低，目前大部分检测方法的灵敏度都不超过10.0pg/ml，因此需要高灵敏度的检测平台。
4、单分子免疫阵列(single molecule array，simoa
5、然而，目前采用simoa技术的检测试剂盒都是针对α-突触核蛋白的，针对错误折叠的α-突触核蛋白寡聚体尚无基于simoa技术的检测试剂盒。因此，本领域迫切需要开发一种基于simoa技术的灵敏度高且准确性好的α-突触核蛋白寡聚体检测试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术中存在的上述缺陷，利用simoa技术，可以在外周血中检测到低丰度的α-突触核蛋白寡聚体，从而改变了脑损伤和神经退行性疾病的检测方式，可以应用于对神经退行性疾病的诊断。
2、为此，本专利技术一方面提供了一种α-突触核蛋白寡聚体的simoa试剂盒，其包含：
3、捕获抗体包被的磁珠；
4、偶联有第一标记物的检测抗体；
5、偶联有第二标记物的β-半乳糖苷酶(sbg)；和/或
6、酶反应发光底物；
7、其中，第一标记物用于与第二标记物连接。
8、在本专利技术优选的实施方案中，所述试剂盒进一步包含：
9、α-突触核蛋白寡聚体标准品。
10、在本专利技术更加优选的实施方案中，所述试剂盒进一步包含：
11、质控样品。
12、在本专利技术进一步优选的实施方案中，所述试剂盒进一步包含：
13、样品稀释液。
14、在本专利技术优选的实施方案中，捕获抗体为能与α-突触核蛋白特异性结合的抗体或能与α-突触核蛋白寡聚体特异性结合的抗体，检测抗体为能与α-突触核蛋白寡聚体特异性结合的抗体。
15、在本专利技术更加优选的实施方案中，捕获抗体和检测抗体为单克隆抗体。
16、在本专利技术进一步优选的实施方案中，捕获抗体为抗α-突触核蛋白单克隆抗体mjfr1或抗α-突触核蛋白寡聚体单克隆抗体a17183a，检测抗体为抗α-突触核蛋白寡聚体单克隆抗体a17183a、oligomer-specific syn33或mjfr-14-6-4-2。
17、在本专利技术最佳优选的实施方案中，捕获抗体为抗α-突触核蛋白单克隆抗体mjfr1，检测抗体为抗α-突触核蛋白寡聚体单克隆抗体a17183a。
18、在本专利技术优选的实施方案中，第一标记物为生物素或生物素衍生物。所述生物素衍生物为生物素与化学基团而结合形成，所述化学基团优选氨基(nh2)、活性酯(nhs)、二苯基环辛炔(dbco)、叠氮化物(azide)、炔烃(alkyne)或聚乙二醇(peg)中的任一种或多种。
19、在本专利技术更加优选的实施方案中，第一标记物为n-羟基琥珀酰亚胺生物素(nhs-biotin)或其衍生物。
20、在本专利技术进一步优选的实施方案中，第一标记物为nhs-peg4-biotin。
21、在本专利技术优选的实施方案中，第二标记物为亲和素。
22、在本专利技术更加优选的实施方案中，第二标记物选自卵白素、链霉素、卵黄素和类亲和素。
23、在本专利技术进一步优选的实施方案中，第二标记物为链霉素；
24、在本专利技术优选的实施方案中，酶反应发光底物包含邻-硝基苯-β-d-半乳吡喃糖苷(onpg)、氯酚红-β-d-半乳吡喃糖苷(cprg)、荧光素二半乳糖苷(fdg)和吩噁嗪酮-β-d-吡喃半乳糖苷(rgp)中的1种或多种。
25、在本专利技术更加优选的实施方案中，酶反应发光底物吩噁嗪酮-β-d-吡喃半乳糖苷(rgp)。
26、在本专利技术优选的实施方案中，α-突触核蛋白寡聚体标准品包含1000pg/ml、250pg/ml、62.5pg/ml、16.0pg/ml、8.00pg/ml、4.00pg/ml、2.00pg/ml和1.00pg/ml 8个浓度点。
27、本专利技术另一方面提供了制备本专利技术所述的simoa试剂盒的方法，其包括以下步骤：
28、1、捕获抗体包被的磁珠的制备；
29、2、偶联有第一标记物的检测抗体的制备；
30、3、偶联有第二标记物的β-半乳糖苷酶(sbg)溶液的配制；
31、其中，步骤1进一步包括：
32、a.清洗和置换捕获抗体溶液；
33、b.磁珠制备和活化；
34、c.捕获抗体与磁珠偶联；
35、d.封闭和清洗捕获抗体包被的磁珠；和/或，
36、步骤2进一步包括：
37、a.置换检测抗体的缓冲液；
38、b.偶联第一标记物与检测抗体；
39、c.纯化第一标记物偶联抗体。
40、在本专利技术优选的实施方案中，置换捕获抗体溶液前先测定捕获抗体的原液浓度，置换本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种α-突触核蛋白寡聚体的Simoa试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：
2.根据权利要求1所述的Simoa试剂盒，其中，
3.制备权利要求1或2所述的Simoa试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，
6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其还包括以下步骤：
7.权利要求1或2所述的Simoa试剂盒在制备神经退行性疾病检测产品中的应用，所述神经退行性疾病优选为阿尔兹海默症，帕金森病、亨廷顿病或多发性硬化，更加优选为帕金森病。
8.一种检测样品中α-突触核蛋白寡聚体的方法，其特征在于，采用权利要求1或2所述的Simoa试剂盒，所述样品优选为血浆、血清、脑脊液或者尿液，更加优选为血浆或血清。
9.根据权利要求8所述的方法，所述检测在单分子免疫阵列分析仪上进行，捕获抗体包被的磁珠、样品和生物素标记的检测抗体的反应时间为30-40分钟，优选为35分钟，SBG的反应时间为2-10分钟，优选为5分钟。
...【技术特征摘要】
1.一种α-突触核蛋白寡聚体的simoa试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：
2.根据权利要求1所述的simoa试剂盒，其中，
3.制备权利要求1或2所述的simoa试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，
6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其还包括以下步骤：
7.权利要求1或2所述的simoa试剂盒在制备神经退行性疾病检测产品中的应用，所述神经退行性疾病优选为阿尔兹海默症，帕金森病、亨廷顿病或多发性硬化，更加优选...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭玉萌，王雪芳，张辰浦，李兰，
申请(专利权)人：上海药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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