通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法技术

本发明专利技术的名称是通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法。提供了使用质谱测定法测定样品中的反式T3的量的方法。该方法一般地包括电离样品中的反式T3并且检测和量化离子的量以测定样品中反式T3的量。子的量以测定样品中反式T3的量。子的量以测定样品中反式T3的量。

【技术实现步骤摘要】
通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法
[0001]本申请是分案申请，原申请的申请日为2012年11月30日、申请号为2012800596979、专利技术名称为“通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法”。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请根据35U.S.C.
§
120要求于2011年12月5日提交的美国申请系列号13/311,412的权益，该申请的全部内容通过引用并入本公开。


[0004]本专利技术涉及反式三碘甲状腺原氨酸的检测。在具体的方面，本专利技术涉及通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法。

技术介绍

[0005]下面对本专利技术背景的描述仅简单地提供以帮助理解本专利技术并且不是承认描述或构成本专利技术的现有技术。
[0006]反式三碘甲状腺原氨酸((2S)
‑2‑
氨基
‑3‑
[4
‑
(4
‑
羟基
‑
3,5
‑
二碘苯氧基)
‑3‑
碘苯基]丙酸)(rT3)是三碘甲状腺原氨酸(T3)的无活性异构体。T3和rT3两者都通过如下脱碘酶的作用来源于甲状腺素(四碘甲状腺原氨酸，T4)：
[0007][0008]T3和rT3两者都结合甲状腺激素受体。当T3结合时，受体被刺激，由此增加了代谢活性。不像T3，在结合时，rT3不刺激甲状腺激素受体。因此，rT3不刺激靶细胞的代谢活性，并且事实上，阻断T3激活受体位点。
[0009]过多的rT3可能导致T3结合的广泛停止，一种称为反式T3优势的状况。反式T3优势导致体温降低，其延缓了许多酶的作用，导致临床综合征，多酶功能障碍(Multiple Enzyme Dysfunction)，其产生甲状腺功能减退中所见的效应。
[0010]进一步，将T4转变成T3以及将rT3转变成二碘甲状腺原氨酸(DIT)的5
’
单脱碘过程在大量的状况下被抑制，所述状况包括禁食、营养不良、控制不佳的糖尿病、创伤、手术和全身疾病。因此，在这些情况下，血清T3水平典型地降低，并且rT3水平常常增加。因此，T3与rT3的比率是临床化学中甲状腺激素和相关化合物的代谢和功能的重要诊断标记物。
[0011]已经开发了用于T4、T3和相关化合物(包括rT3)的测定，并且这些测定用来评价甲
状腺状态或优化治疗剂量。测定形式包括放射免疫测定和质谱测定法。例如，Hantson等人报道了通过GC
‑
MS量化衍生化的甲状腺激素(Hansen等人,J.Chromatogr.B(2004),807:185
‑
192)；Zhang等人报道了通过SPE
‑
ESI
‑
MS/MS量化人血清中的T3和rT3(Zhang等人,J.Am.Soc.Mass Spectrom.(2005),16:1781
‑
86)；Tai等人报道了通过SPE
‑
HPLC
‑
MS/MS量化血清中的T3(Tai等人,Anal.Chem.(2004),76:5092:96)；Couldwell等人报道了通过ESI
‑
MS/MS进行的质谱测定分析，包括rT3在标准有机溶剂中的片段化谱(Couldwell等人,Rapid Comm.Mass Spectrom.(2005),19:2295
‑
2304)；Wang和Stapleton报道通过SPE
‑
LC
‑
ESI
‑
MS/MS量化加标牛血清样品中的rT3(Wang和Stapleton,Anal Bioanal Chem(2010),397:1831
‑
39)。

技术实现思路

[0012]本专利技术提供通过质谱测定法——包括串联质谱测定法——检测样品中的反式T3(rT3)的量的方法。
[0013]在一个方面，提供了通过质谱测定法测定体液样品中的rT3的量的方法。此方面的方法包括：(a)电离来自体液样品的rT3以产生可通过质谱测定法检测到的一种或多种rT3离子；和(b)通过质谱测定法检测rT3离子(一种或多种)的量。一旦测量了一种或多种rT3离子的量，已测定的rT3离子(一种或多种)的量与体液样品中rT3的量相关联。在本专利技术的一些方法中，来自体液样品的rT3在电离前不经历固相提取。
[0014]在一些实施方式中，来自体液样品的rT3在被电离前经历液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。
[0015]在一些实施方式中，来自体液样品的rT3在被电离前通过蛋白沉淀富集。在一些实施方式中，在液相色谱法前进行蛋白沉淀。在一些实施方式中，通过使体液样品与足以使可能存在于体液样品中的蛋白的至少一部分沉淀的量的有机溶剂接触来进行蛋白沉淀。在一些相关实施方式中，有机溶剂包括甲醇。
[0016]在一些实施方式中，提供了通过质谱测定法测定体液样品中的反式T3(rT3)的量的方法，其包括处理体液样品以生成经处理的样品，所述经处理的样品包含来自体液样品的rT3。在相关方法中，所述处理包括：i)通过添加有机溶剂沉淀来自体液样品的蛋白，使得得到的上清液包含所述有机溶剂和来自所述体液样品的rT3；ii)通过使所述上清液经历反相高效液相色谱(RP
‑
HPLC)柱来纯化所述上清液中的rT3，其中所述纯化包括在引入所述上清液前将水性溶液引入至所述柱，优选地就在之前引入；和iii)从所述RP
‑
HPLC柱洗脱rT3以生成包含rT3的经处理的样品。此经处理的样品然后可以如上所述进行分析；即，通过电离经处理的样品中的rT3以生成可通过质谱测定法检测到的一种或多种反式T3离子；通过质谱测定法测定一种或多种rT3离子的量；以及使用已测定的rT3离子的量来测定体液样品中的rT3的量。在一些实施方式中，有机溶剂包括甲醇。在一些相关实施方式中，步骤ii)中生成的上清液包含至少10％的甲醇。在一些方面，来自体液样品的rT3在电离前不经历固相提取。
[0017]在其中在引入含rT3样品前将水性填塞物引入至RP
‑
HPLC柱中的实施方式中，样品体积与水性填塞物体积的比率可以在约10:1至约1:10的范围内；诸如在约5:1至约1:5的范围内；诸如约1:1。
[0018]在一些实施方式中，可通过质谱测定法测定到的一种或多种rT3离子选自质/荷比为649.9
±
0.5、605.2
±
0.5和127.1
±
0.5的离子。在一些实施方式中，所述离子选自质/荷比为649.9
±
0.5和605.2
±
0.5的离子。
[0019]在一些实施方式中，质谱测定法包括串联质谱测定法。在一些相关实施方式中，可通过质谱测定法测定到的一种或多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过串联质谱测定法测定样品中的反式三碘甲状腺原氨酸(rT3)的量的方法，所述方法包括：a.添加内标准至所述样品；b.使所述样品经历蛋白沉淀；c.电离rT3和所述内标准以生成至少一种rT3离子和至少一种内标准离子；d.通过串联质谱测定法测定所述至少一种rT3离子的量和所述至少一种内标准离子的量；其中所述样品中的rT3的量由所述至少一种rT3离子的量和所述至少一种内标准离子的量测定。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括使所述样品经历液相色谱法。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)、反相液相色谱法(RPLC)、反相高效液相色谱法(RP
‑
HPLC)或高湍流液相色谱法(HTLC)。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括有机溶剂沉淀。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括甲醇沉淀。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离是通过电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离处于正离子模式。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述离子使用多反应监测(MRM)进行检测。9.根据权利要求1所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括选自质/荷比为649.9
±
0.5、605.2
±
0.5和127.1
±
0.5的离子的一种或多种。10.根据权利要求1所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括选自质/荷比为649.9
±
0.5和605.2
±
0.5的离子的一种或多种。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述内标准是同位素标记的。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述内标准是
13
C
‑
标记的rT3。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包括血浆或血清。14.一种通过串联质谱测定法测定样品中的反式三碘甲状腺原氨酸(rT3)的量的方法，所述方法包括：a.添加
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【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：