一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法，涉及抗整合素的抗体检测技术领域。其包括抗体捕获器件和抗体检测器件，抗体捕获器件包括固相载体，抗体检测器件为纤维素膜或带有可被检测的标记物的功能性片段；且在固相载体上包被有整合素生物制剂，在纤维素膜上固定有不带标记物的功能性片段；功能性片段为整合素生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区。该试剂盒同时克服了假阳性和假阴性的缺陷。具有捕获效率高和检测灵敏度高的优点。高的优点。高的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法


[0001]本专利技术涉及抗整合素的抗体检测
，具体而言，涉及一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法。

技术介绍

[0002]整合素是一类细胞膜表面受体，是由α亚基和β亚基组成的一种异二聚体跨膜糖蛋白，是介导细胞与细胞外间质相互作用的主要因子，在免疫调节中起到重要的作用。整合素参与了多种生理与病理过程如炎症、血栓形成、恶性肿瘤生长浸润及转移等。
[0003]目前，以整合素为靶点而设计的单抗药物或生物制剂，包括α4β7整合素的单抗(Vedolizumab维多珠单抗，人源化单抗)和整合素α4的单抗(Natalizumab那他珠单抗)，被FDA批准用于治疗溃疡性结肠炎、克罗恩病、多发性硬化症等。
[0004]尽管临床实践证明此类生物制剂在治疗上述疾病时获得良好的疗效，但不是所有的患者均有效，有些患者一开始就无效(原发性无效)，更多的患者是开始时有效，但在使用多次后产生耐药而无效(继发无效)。进一步的研发发现，继发无效者跟体内产生抗生物制剂药物的抗体有关，因此，检测血液中抗生物制剂的抗体是一项重要的伴随诊断。
[0005]抗整合素的生物制剂抗体的检测方法主要是通过免疫学反应而进行，包括间接法或双抗原夹心法。对于ELISA、管式化学发光等有洗涤步骤的检测方案中，间接法是高效有效的检测方法。但对于像层析检测缺乏洗涤步骤的检测方案中，间接法由于受样本中大量的无关抗体干扰，导致假阳性等检测失真。双抗原夹心法虽能有效避免样本中无关抗体的干扰，但在所公布的双抗原夹心法技术方案中，然而假阴性较为严重。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法以解决上述技术问题。
[0008]本专利技术是这样实现的：
[0009]本专利技术提供了一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，其包括抗体捕获器件和抗体检测器件，抗体捕获器件包括固相载体，抗体检测器件为纤维素膜或带有可被检测的标记物的功能性片段；且在固相载体上包被有整合素生物制剂，在纤维素膜上固定有不带标记物的功能性片段；功能性片段为整合素生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区。
[0010]专利技术人提供了一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，该试剂盒同时克服了假阳性和假阴性的缺陷。针对假阳性的缺陷，专利技术人采用整合素生物制剂作为抗体捕获器件，由于整合素生物制剂具有空间接触面大，更容易捕获到样本中的抗抗体，具有捕获效率高的优点。
[0011]针对假阴性的缺陷，专利技术人在检测器件上固定整合素生物制剂的Fv(可变区)、Hv(重链可变区)或CDRs(互补决定区)，通过减小检测器件上包被物的分子量，从而减小包被
物的空间位阻，使得检测器件上固定物更容易与抗抗体的Fab片段结合，使得样本中更低浓度的抗抗体也能实现与检测器件上的固定物特异性结合，提升了检测的灵敏度，达到了整合素生物制剂的伴随诊断的目的。
[0012]上述试剂盒进行抗抗体检测原理为：以整合素生物制剂作为捕获抗原，与样本中的抗整合素生物制剂的抗体结合，然后用标记的整合素单抗的可变区、重链可变区或互补决定区或固定于膜上的整合素单抗的可变区、重链可变区或互补决定区对抗抗体进行定性或定量。
[0013]采用上述试剂盒进行抗抗体检测的方法为：待检样本作用于抗体捕获器件，形成抗原抗体复合物，然后让抗原抗体复合物作用于抗体检测器件，形成抗原
‑
抗体
‑
抗原复合物。利用公知的显色方法进行定量或定性检测。
[0014]在一种可选的实施方式中，上述功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。Fv(可变区)是由重链可变区和轻链可变区通过连接肽或二硫键连接以保持Fv的稳定性。CDRs(互补决定区)包含重链可变区和轻链可变区中的CDR1、CDR2及CDR3部分。本领域技术人员根据本专利技术记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原分裂二硫键的方法获得。在本专利技术公开了完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。
[0015]包括不限于选自上述整合素生物制剂的HV、F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、CDRs和scFv中的任意一种。
[0016]上述抗体的功能性片段还可以通过本领域技术人员所知的重组遗传学技术(如基因重组的方法重组表达)或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。
[0017]在本专利技术应用较佳的实施方式中，整合素生物制剂选自整合素的单抗药物。
[0018]在一种可选的实施方式中，整合素的单抗药物为特异性识别α1β1、α2β1、α4β1、α5β1、αLβ2、αMβ2、αⅡbβ3、αvβ3、α6β4、α4β7、α4、α6整合素的单抗药物。
[0019]只要能针对上述整合素特异性识别的单抗药物均在本专利技术的保护范围内。在一种可选的实施方式中，α4单抗药物选自那他珠单抗(Natalizumab)；α4β7单抗药物选自维多珠单抗(Vedolizumab)。
[0020]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述固相载体选自荧光微球、乳胶微球、树脂微球、磁性微球、胶体金颗粒、量子点、微孔板或微孔膜。上述胶体金即四氯金酸经还原剂还原后得到的胶体溶液。在其他实施方式中，上述胶体金也可以是其他的胶体物质，例如胶体碳、胶体银或胶体硒。
[0021]在一种可选的实施方式中，上述量子点为核壳型量子点，如ZnS/CdSe或ZnS/CdTe形成的量子点。根据需要，上述量子点可以调整为单一化合物形成的量子点，如硒化镉(CdSe)、硫化锌(ZnS)、碲化镉(CdTe)、硫化镉(CdS)、硒化锌(ZnSe)、磷化铟(InP)或砷化铟(InAs)，或是CdSe核上包裹一层ZnS或CdS组成的纳米晶或半导体纳米晶等物质中的一种。
[0022]在一种可选的实施方式中，固相载体上包被的整合素生物制剂上修饰有亲和素或生物素。
[0023]在一种可选的实施方式中，荧光微球选自时间分辨荧光微球，磁性微球选自磁珠。在一种可选的实施方式中，时间分辨荧光微球选自时间分辨荧光物质与乳胶或纳米颗粒的
结合物，时间分辨荧光物质为镧系元素、镧系元素与乳胶的结合物、镧系元素的螯合物中的一种；镧系元素可以为铕，铽，钐或镝中的任意一种。
[0024]固相载体上包被有整合素生物制剂的全长，包被全长具有空间接触面大，更容易捕获到样本中的抗抗体，具有捕获效率高的优点。
[0025]可被检测的标记物是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述可被检测的标记物选自荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，其特征在于，其包括抗体捕获器件和抗体检测器件，所述抗体捕获器件包括固相载体，所述抗体检测器件为纤维素膜或带有可被检测的标记物的功能性片段；且在所述固相载体上包被有整合素生物制剂，在所述纤维素膜上固定有不带标记物的所述功能性片段；所述功能性片段为整合素生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区。2.根据权利要求1所述的整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述整合素生物制剂选自整合素的单抗药物；优选地，所述整合素的单抗药物为特异性识别α1β1、α2β1、α4β1、α5β1、αLβ2、αMβ2、αⅡbβ3、αvβ3、α6β4、α4β7、α4或α6整合素的单抗药物；优选地，所述α4单抗药物选自那他珠单抗(Natalizumab)；所述α4β7单抗药物选自维多珠单抗(Vedolizumab)。3.根据权利要求1或2所述的整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体选自荧光微球、乳胶微球、树脂微球、磁性微球、胶体金颗粒、量子点、微孔板或微孔膜；优选地，所述固相载体上包被的整合素生物制剂上修饰有亲和素或生物素；优选地，所述荧光微球选自时间分辨荧光微球，所述磁性微球选自磁珠；优选地，所述固相载体上包被有整合素生物制剂的全长。4.根据权利要求1或2所述的整合素生物制剂的抗体检测试剂盒，其特征在于，所述可被检测的标记物选自荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试剂或纳米颗粒类标记物；优选地，所述荧光染料选自荧光素类染料及其衍生物、罗丹明类染料及其衍生物、Cy系列染料及其衍生物、Alexa系列染料及其衍生物和蛋白类染料及其衍生物；优选地，所述催化底物显色的酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β
‑
半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6
‑
磷酸葡萄糖脱氧酶；优选地，所述放射性同位素选自
212
Bi、
131
I、
111
In、
90
Y、
186
Re、
211
At、
125
I、
188
Re、
153
Sm、
213
Bi、
32
P、
94
mTc、
99
mTc、
203
Pb、
67
Ga、
68
Ga、
43
Sc、
47
Sc、
110
mIn、
97
Ru、
62
Cu、
64
Cu、
67
Cu、
68
Cu、
86
Y、
88
Y、
121
Sn、
161
Tb、
166
Ho、
105
Rh、
177
Lu、
172
Lu和
18
F；优选地，所述化学发光试剂选自鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物或过氧草酸盐及其衍生物；优选地，所述纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈菲，王莹，霍如松，
申请(专利权)人：苏州和锐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：