一种CTGF、THP肾损伤联合检测卡制造技术

本实用新型专利技术是一种CTGF、THP肾损伤联合检测卡，检测卡基于胶体金原理检测人尿液中结缔组织生长因子和Tamm-Horsfall蛋白。本实用新型专利技术由检测卡壳和胶体金试纸条两部分组成。检测卡壳内有两个凹槽用于放置结缔组织生长因子和Tamm-Horsfall蛋白检测试纸条。本试纸条可以实现一步定性检测人尿液中结缔组织生长因子和Tamm-Horsfall蛋白的含量，具有成本低，小巧简便，操作简单，无需专业操作人员等特点。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于免疫检测分析
，涉及肾损伤标志物结蹄组织生长因子(CTGF)、Tamm-Horsfall蛋白(THP)的胶体金检测卡。
技术介绍
目前世界上有超过5亿的人口患有不同程度肾脏疾病，每年超过百万人口死于与慢性肾脏病相关联的心脑血管疾病。慢性肾脏病已成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之后又一个威胁人类健康的重要疾病，成为全球性公共卫生问题。肾脏疾病患者在我国在逐年增加，在我国成年人群中的患病率高达10.8%，18岁以上人群中约有1.2亿慢性肾病患者。早期诊断并及时干预是改善肾病患者预后的关键措施，发现损伤标志物有助于肾损伤病程判断。目前临床对肾损伤疾病进行诊断和分期主要依据血清肌酐和尿量，但此二者往往在分期之前其“危险”期即已发生变化，无法对肾损伤的发展作出及时判断。结缔组织生长因子(Connectivetissue growth factor,CTGF)是由 TGF-β 诱导产生，是TGF-β致纤维化的重要的下游介质，属CNN生长因子家族。研宄证实，在实验动物及人的肾纤维化过程中，CTGF的表达与肾小管间质纤维化呈正相关，而肾小管间质纤维化程度与肾功能减退密切相关。各种进展性肾脏疾病，无论其原发病如何，将最终导致肾小球硬化及肾小管间质纤维化，进展为终末期肾功能衰竭。在肾小球硬化及肾小管间质纤维化进展过程中，CTGF是肾小球、肾小管内皮细胞改变为肌成纤维表型细胞的重要介质，临床上已成为早期判断肾脏疾病纤维化的可靠生物学标志物。Tamm-Horsfall蛋白(THP)为尿中粘蛋白的一种，分子量为8_27万，由远曲小管的上皮细胞内高尔基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。正常人有少量排入尿中，当各种原因(如梗阻、炎症、自身免疫性疾患等)引起肾损伤时尿中排出量增多，并与肾受损程度相一致。THP为管型的主要基质成分，其聚集物也是形成肾结石基质的物质。联合检测尿CTGF和THP可在慢性肾小球肾炎发生急性病变时，或在非慢性肾小球肾炎的肾损伤指标发生变化时，作为肾损伤原因的鉴别手段之一。本技术开发了一种同时检测CTGF、THP两种肾损伤标志物的胶体金检测卡。胶体金方法具有简单快速准确的特点，本技术利用胶体金方法检测人尿液中CTGF、THP两种标志物，避免了常规液相色谱法、免疫比浊法、化学发光法具有的操作时间长，需要专门仪器的缺点，只需一步简单操作，即可在10分钟内获得检测结果。
技术实现思路
本技术提供了一种同时检测肾损伤标志物CTGF、THP联合检测卡。用于辅助临床肾损伤诊断。本技术采用以下技术方案:一种同时检测肾损伤标志物CTGF、THP的联合检测卡，由检测卡身和卡槽两部分组成。卡身由上卡壳、下卡壳和CTGF、THP两种肾损伤标志物胶体金检测试纸条组成。下卡壳内侧有两个凹槽用于放置胶体金试纸。上卡壳，有两个长条形观察窗，外侧有样品信息。两种肾损伤标志物胶体金检测试纸条均由背衬、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫四部分组成。吸水垫和样品垫分别位于背衬的两段，硝酸纤维素膜在背衬中部一段与吸水垫交叠连接在一起，另一端与样品垫交叠连接在一起。硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。两种肾损伤标志物胶体金检测试纸条分别放入下卡壳的两个凹槽中，两种试纸条的样品垫一部分露出卡壳，硝酸纤维素膜与观察窗一一对应。卡槽的槽身有两个孔，分别对应两种胶体金试纸条，孔的底部含有胶体金标记的抗体，分别与两种标志物对应。本技术所用的胶体金试纸条均采用双抗体夹心法原理检测相应的标志物，卡槽的胶体金标记抗体为鼠源性肾损伤标志物单克隆抗体和胶体金复合物，硝酸纤维素膜上检测线包被与结合垫上抗体配对的鼠源性肾损伤标志物单克隆抗体，质控线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。检测时，尿液样本滴加到卡槽的样品孔中，样品孔中的胶体金溶解到样本中，然后将卡身和卡槽盖紧，在毛细管作用下尿液向吸水垫方向层析。如果尿液中含有相应的肾损伤标志物，样本中的标志物与相应的金标抗体结合，然后层析到硝酸纤维素膜上检测线时，与包被的抗体结合，形成“包被抗体-抗原-金标抗体复合物”的夹心结构，并在检测线区域出现红色条带，这样得到阳性结果。当样本中不含肾损伤标志物时，样本与金标抗体和包被抗体均不能发生反应，当层析到硝酸纤维素膜上时红色的金颗粒就不能被检测线捕捉到，从而不会在该区域显示出红色条带，这样得到阴性结果。无论阴性还是阳性样本金结合垫上的金标抗体都会与硝酸纤维素膜上质控线的羊抗鼠多抗结合产生红色条带，如果质控线不显示说明检测结果无效。采用上述方案的肾损伤标志物CTGF、THP联合检测卡具有以下有益效果，包括成本低、小巧方便、操作简单，无需专业人员即可检测，且可以一步同时检测两种肾损伤标志物。【附图说明】图1本技术的主视图图2本技术的剖视图图3肾损伤标志物检测试纸条的剖视图图4卡槽的剖视图图5肾损伤标志物检测试纸条的检测结果示意图1.上卡壳2.下卡壳3.样品孔4.试纸名称5.结果显不窗口 6.试纸条7.背衬8.吸水垫9.硝酸纤维素膜10.胶体金标记抗体复合物11.样品垫12.检测线13.质控线14.凹槽15.卡身16.卡槽【具体实施方式】如图1和图2所示，本技术由检测卡身15和卡槽16组成。卡身由上卡壳1、下卡壳2和肾损伤标志物检测试纸条6组成。上卡壳I内侧和下卡壳2内侧可以紧密的结合，形成牢固的整体。上卡壳I外侧有试纸名称4、结果显示窗口 5。试纸名称4用于说明检测试纸的种类，结果显示窗口 5则与凹槽14中的试纸条6的硝酸纤维素膜9相对应。下卡壳2有2个凹槽14，用于放置肾损伤标志物检测试纸条6，试纸条6的摆放顺序与试纸名称4的顺序相同。如图3，胶体金试纸由背衬7、吸水垫8、硝酸纤维素膜9、样品垫11组成，吸水垫8和样品垫11分别位于背衬7的两段，硝酸纤维素膜9在背衬7中部一段与吸水垫8交叠连接在一起，另一端与样品垫11交叠连接在一起。硝酸纤维素膜9上包被有检测线12和质控线13。两种检测试纸的检测线分别包被CTGF和THP抗体，质控线包被羊抗鼠IgG多抗，金结合垫分别包被金标CTGF和THP单克隆抗体。如图4，卡槽16含有两个样品孔3，样品孔3的底部放有胶体金标记的抗体复合物10，抗体的种类与肾损伤标志物检测试纸条6--对应。如图5，如果为阳性样本则显示出红色的T线和C线。如果为阴性样本，则只出现红色的C线。如果不出现红色的C线，则表示产品失效或操作失败，需重新检测。【主权项】1.一种CTGF、THP肾损伤联合检测卡，由检测卡身和卡槽两部分组成，卡身由上卡壳、下卡壳和两种CTGF、THP肾损伤标志物胶体金检测试纸条组成，其特征在于:卡槽的槽身有两个孔，分别对应CTGF、THP两种胶体金试纸条，孔的底部含有胶体金标记的抗体，分别与CTGF, THP两种标志物对应。2.如权利要求1所述的CTGF、THP肾损伤联合检测卡，其特征在于:检测卡卡身的下卡壳内侧有两个凹槽用于放置胶体金试纸，检测卡的上卡壳，有两个长条形观察窗，外侧有样品信息；CTGF、THP两种肾损伤标志物胶体金检测试纸条均由背衬、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫四部分组成，吸水垫和样品垫分别位于背衬的两段，硝酸纤维素膜在背衬中部一段与吸水垫交叠连接在一起，另一端与样品垫交本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CTGF、THP肾损伤联合检测卡，由检测卡身和卡槽两部分组成，卡身由上卡壳、下卡壳和两种CTGF、THP肾损伤标志物胶体金检测试纸条组成，其特征在于：卡槽的槽身有两个孔，分别对应CTGF、THP两种胶体金试纸条，孔的底部含有胶体金标记的抗体，分别与CTGF、THP两种标志物对应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周宇璠，李峰，刘晓雷，博格·孙扬，赵柏松，
申请(专利权)人：霍普金斯医药研究院北京有限责任公司，霍普金斯北京医学诊断科技有限公司，
类型：新型
国别省市：北京;11