本发明专利技术公开了一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，该方法采用砷对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，采用氢化物发生器-电感耦合等离子体离子发射光谱法测定大鼠UAs、KAs，ELISA法测定尿Uβ2-MG、UAlB，对-硝基苯酚比色法、碱性苦味酸法、脲酶比色法分别测定UNAG、SCr、BUN；以UAs、KAs作为暴露指标，计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值，为砷中毒人群肾损伤生物接触限值的探索提供了实验依据。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该方法采用砷对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，采用氢化物发生器-电感耦合等离子体离子发射光谱法测定大鼠UAs、KAs，ELISA法测定尿Uβ2-MG、UAlB，对-硝基苯酚比色法、碱性苦味酸法、脲酶比色法分别测定UNAG、SCr、BUN；以UAs、KAs作为暴露指标，计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值，为砷中毒人群肾损伤生物接触限值的探索提供了实验依据。【专利说明】-种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接 触限值的方法
本专利技术涉及一种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的 方法，属于卫生检测
。
技术介绍
燃用高神煤引起的神中毒为中国特有的一种病型，贵州省于1976年被确定为其 首个病区巧]。相关研究显示神中毒可导致多系统、多器官病变，鉴于肾脏为主要排毒器官， 当其受损时可影响体内神及其代谢产物的排泄，还可促进其蓄积，导致肾脏在内的多器官 受损。目前，临床上常选用尿素氮（BUN)、血肌酢（S化)等作为检测肾功能的指标，W判断肾 损伤情况；本课题组前期对神中毒人群研究结果发现，监测尿目2-微球蛋白扣目2-MG)、尿 N-己醜-目-D-氨基葡萄糖巧酶扣NAG)、尿白蛋白扣A1B)对判断早期肾损伤具有重要意 义。本实验W神中毒大鼠肾脏毒性效应及其剂量一效应关系为基础，计算各肾损伤效应指 标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95%可信区间下限值，W其值筛选神中毒大鼠肾损伤 的敏感生物学标志及估测其接触限值，W达到快速、灵敏、早期发现肾损伤。
技术实现思路
本专利技术的目的是；提供一种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接 触限值的方法，能直观的发现肝脏的损害情况。 本专利技术的技术方案 一种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，该方法采用 神对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，采用氨化物发生器-电感禪合等离子体离子发射光谱 法测定大鼠尿神（UAs)、肾神（KAs)，ELISA法测定尿目2-微球蛋白扣目2-MG)、尿白蛋白 扣A1B)，对-硝基苯酷比色法、碱性苦味酸法、脈酶比色法分别测定尿N-己醜-目-D-氨基 葡萄糖巧酶扣NAG)、血肌酢（S化）、血尿素氮炬UN);WUAs、KAs作为暴露指标，其余指标为 肾损伤效应指标，分析两者间的剂量一效应关系；计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs 的基准剂量及其95%可信区间下限值，W其值筛选神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及 估测其接触限值。 前述的一种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法 中，SD大鼠40只，雌雄各半，体重80?lOOg左右，染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水， 染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水。 前述的一种初步探讨神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法 中，将大鼠分为4组；正常对照组、神低剂量组、神中剂量组、神高剂量组，染神剂量分别为 Omg/kg、2. 5mg/kg、5. Omg/kg、和10. Omg/kg，每组10只，分笼喂养；其中正常对照组大鼠 喂饲标准饲料；各染神组大鼠喂饲高神煤烘烤的玉米粉与标准饲料按比例配制的饲料，喂 养90天。 由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于神中毒大鼠肾脏毒性效应及其 剂量一效应关系为基础，计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95%可 信区间下限值，W其值筛选神中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值，其对 早期发现神中毒肾损伤与原始检测方法对比更具价值，并为神中毒人群肾损伤生物接触限 值的探索提供了实验依据。 【具体实施方式】下面对本专利技术进一步的详细说明，但不作为对本专利技术的任何限制。 [000引本专利技术的实施例： 1材料与试剂 1. 1实验对象 健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重80?lOOg左右。 1.2主要试剂 盐酸，尿素，楓化钟，氨氧化轴，测氨化轴，硫酸，高氯酸，草酸馈，硝酸上试剂均为分 析纯）;血清BUN、S化检测试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司；UNAG、U目2-MG、 UA1B、U化检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 1.3主要仪器 MPX型电感禪合等离子体离子发射光谱仪（ICP-0ES) ;VGA-77型氨化物发生器（HG); AG285型电子天平；Milli-Q Synthesis纯水仪。 2 方法 2.1实验动物分组及染神 将大鼠分为4组；正常对照组、神低剂量组、神中剂量组、神高剂量组，染神剂量分别为 Omg/kg、2. 5mg/kg、5. Omg/kg、和10. Omg/kg，每组10只，分笼喂养；其中正常对照组大鼠 喂饲标准饲料；各染神组大鼠喂饲高神煤烘烤的玉米粉与标准饲料按比例配制的饲料，喂 养90天，期间自由饮用自来水；饲养环境；温度22-24C ;湿度60-70%。 2.2观察内容和方法 2. 2. 1收集尿液 在处死大鼠前禁食2化，收集2化尿液，保存于-2(TC冰箱，待测。 2. 2. 2处死大鼠 0.9%戊己比妥麻醉大鼠后处死大鼠，取出一侧肾脏，轻除去表面的凝血及结蒂组织等 附属物，再经冰冷生理盐水洗涂几次，用滤纸吸干水份，保存于-2(TC冰箱，待测。 2. 2. 3尿神（UAs)和肾神（KAs)的检测 2. 2. 3. 1 采用 HG-ICP-0ES 检测 UAs、KAs 含量 ① 取尿（0. 5ml)或肾脏（0. 5g)于干净H角烧瓶； ② 取硝酸1. 8ml、硫酸1.2ml (尿液）或硝酸3ml、硫酸2ml (肾组织）于H角烧瓶中，置 于电热板上加热至液体清透； ③ 待室温冷却后，用去离子水将液体转移至25ml踪色容量瓶并定容； ④ 采用HG-ICP-0ES分别测定UAs、KAs含量。 2.2.4肾损伤效应指标检测 2. 2. 4. 1采用对-硝基苯酷比色法测定UNAG含量； 2. 2. 4. 2采用ELISA法测定U目2-MG含量； 2. 2.4. 3采用ELISA法测定UAIB含量； 2. 2. 4. 4采用碱性苦味酸法测定S化含量； 2. 2. 4. 5采用脈酶比色法测定BUN含量。 2.2.5 BMD 和 BMDL 的计算 2. 2. 5. 1 应用可信区间衡量变异因素，W正常对照组各效应指标的95%上限作为正 常参考值上限。当大鼠各肾损伤效应指标小于该值时，判为正常（-)，反之为异常（+)，据此 将数据进行二分变量处理作为效应终点。通过卡方（X2)检验，选择异常发生率具有统计学 意义的肾损伤效应指标进行BMD及BMDL计算。 [001引 2. 2. 5. 2 因10%反应率接近大多数非癌症生物鉴定的敏感限值，则本次W 10% 反应率计算神中毒大鼠UAs、KAs的BMD和BMDL。 2. 2. 5. 3计算BMD及BMDL选择AIC值最小的模型为最适合的剂量一反应模型。 2. 2. 5. 4 依据BMDL大小判断肾功能指标敏感性，BMDL越小该指标相对越敏感； BMDL最小值作为神中毒大鼠肾本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，其特征在于：该方法采用砷对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，采用氢化物发生器‑电感耦合等离子体离子发射光谱法测定大鼠尿砷（UAs）、肾砷（KAs），ELISA法测定尿β2‑微球蛋白(Uβ2‑MG）、尿白蛋白(UAlB)，对‑硝基苯酚比色法、碱性苦味酸法、脲酶比色法分别测定尿N‑乙酰‑β‑ D‑氨基葡萄糖苷酶(UNAG)、血肌酐（SCr）、血尿素氮 (BUN）；以UAs、KAs作为暴露指标，其余指标为肾损伤效应指标，分析两者间的剂量—效应关系；计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：敖云霞，
申请(专利权)人：敖云霞，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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