本发明专利技术公开了一株高产次生代谢产物的尾孢属内生真菌新种及其应用。该产生次生代谢产物的真菌是尾孢属(Cercospora sp.nov.)WDL2，在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014518。本发明专利技术提供的尾孢属WDL2(Cercospora sp.nov.WDL2)CCTCC NO：M 2014518菌丝体生长速率为0.22g/d，其菌丝体(干重)中多糖、黄酮、总三萜和总酚的含量分别为74.452mg/g、1.250mg/g、4.395mg/g和3.343mg/g，将尾孢属WDL2(Cercospora sp.nov.WDL2)CCTCC NO：M 2014518在最适摇瓶发酵条件下发酵培养10天其发酵液中黄酮、总三萜和总酚的含量分别为0.668mg/L、0.633mg/L和2.124mg/L。表明该菌株能产生多糖、黄酮、总三萜和总酚，在生产活性药用成分方面具有重要应用。
【技术实现步骤摘要】
一株尾孢属内生真菌菌株及其应用
本专利技术涉及微生物领域中一株尾孢属内生真菌菌株及其应用，所述次生代谢产物可为多糖、黄酮、三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种。
技术介绍
植物的代谢产物可分为两类，即初生代谢产物和次生代谢产物。初生代谢产物是指维持植物体正常生命活动所必需的物质和能量代谢，如脂类、氨基酸、核酸以及它们的多聚体等，这些物质的分子量一般很大，又称为大分子化合物。次生代谢产物是由次生代谢产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物(习惯上称为天然产物)，其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性，次生代谢产物可分为苯丙素类、醌类、黄酮类、单宁类、类萜、甾体及其甙、生物碱七大类。在植物的某个发育时期或某个器官中，次生代谢产物可能成为代谢库的主要成分，比如橡胶树产生大量橡胶和甜菊叶中甜菊甙的含量可达干重的10％以上。植物中直接或间接的提取是目前人们获得天然产物的主要手段，但随着人口的增多市场需求量的增加，直接从植物中提取次生代谢产物已经难以满足需求，所以发展新的高效生产这些重要的次生代谢产物方法迫在眉睫。内生真菌是在宿主体内生存并完成生活周期的真菌，长期寄生在某种植物上的内生真菌通常能与该宿主植物协同演化，宿主植物与其内生真菌之间可能存在基因重组的现象，从而使得宿主植物上的内生真菌能产生与宿主植物相同的代谢产物。近年来发现的天然产物中有51％来自植物内生真菌，38％来自土壤微生物，11％来自植物和动物，显然内生真菌己成为天然产物的重要资源。野生碗豆生存环境原始、复杂，种群多样性高，其内生真菌的丰富度及多样性较其它物种更为优越。通过对野生碗豆内生真菌的分离可得到一些较为原始及次生代谢产物多样的内生真菌。尾孢属(Cercospora)真菌可导致草坪叶斑病，常见的有4种类型：引起翦股颖叶斑病的翦股颖尾孢菌(C.agrostidis)、引起羊茅叶斑病的羊茅尾孢菌(C.festucae)、引起野牛草和狗牙根叶斑病的C.seminalis和引起钝叶草叶斑病的C.fusimaculans.。也有关于尾孢菌作为水葫芦生防菌的应用，但关于尾孢属内生真菌次生代谢产物分析报道甚少。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何利用微生物生产次生代谢产物，所述次生代谢产物为多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株可以产生次生代谢产物的内生真菌，所述次生代谢产物为多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种。本专利技术提供的内生真菌是尾孢属(Cercosporasp.nov.)WDL2，该菌株已于2014年10月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国武汉武汉大学)，保藏编号为CCTCCNO：M2014518。本专利技术的另一个目的是提供一种菌剂，该菌剂的活性成分为所述的尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518。上述菌剂可为产生次生代谢产物多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种的菌剂。所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。所述尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518在生产次生代谢产物多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种的应用也属于本专利技术的保护范围。所述以尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518为活性成分的菌剂在生产次生代谢产物多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、三种、两种或一种的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的再一个目的是提供一种培养尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518的方法。本专利技术所提供的培养尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518的方法，包括将尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518在用于培养尾孢菌的培养基中培养的步骤。本专利技术的又一个目的是提供一种以尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518为活性成分的菌剂的制备方法。本专利技术所提供上述菌剂的制备方法，包括如下步骤：将所述的尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518作为活性成分，得到所述菌剂。对中国黑龙江省阿城区林场采集野生豌豆叶片内生真菌的分离，可能得到一些较为原始以及次生代谢产物功能多样的内生真菌。本专利技术分离筛选得到产生次生代谢产物的尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518。实验证明，尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518菌丝体(干重)生长速率为0.22g/d，其菌丝体(干重)中多糖、黄酮、总三萜和总酚的含量分别为74.452mg/g、1.250mg/g、4.395mg/g和3.343mg/g，在最适摇瓶发酵条件下发酵培养10天其发酵液中黄酮、总三萜和总酚的含量分别为0.668mg/L、0.633mg/L和2.124mg/L。这表明该菌株能产生多糖、黄酮、总三萜和总酚，在生产次生代谢产物方面具有重要应用。保藏说明菌种名称：尾孢属拉丁名：Cercosporasp.nov.菌株编号：WDL2保藏机构：中国典型培养物保藏中心保藏机构简称：CCTCC地址：中国武汉武汉大学保藏日期：2014年10月27日保藏中心登记入册编号：CCTCCNO：M2014518附图说明图1为生长4天的尾孢属(Cercosporasp.nov.)WDL2在10倍光学显微镜下的菌丝形态。图2为生长7天的尾孢属(Cercosporasp.nov.)WDL2在40倍光学显微镜下的菌丝形态。图3为生长15天的尾孢属(Cercosporasp.nov.)WDL2的菌落形态。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、尾孢属WDL2(Cercosporasp.nov.WDL2)CCTCCNO：M2014518的分离、鉴定与保藏1、内生真菌WDL2的分离将野生豌豆叶片(采自中国黑龙江省阿城区亚沟林场)进行消毒。将氯霉素加入2％麦芽粉琼脂培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
尾孢属(Cercospora sp.nov.)WDL2，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014518。
【技术特征摘要】
2015.01.05 CN 20151000304971.尾孢属（Cercosporasp.nov.）WDL2菌株，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCCNO：M2014518。2.一种菌剂，其特征在于：所述菌剂的活性成分为权利要求1所述的尾孢属WDL2（Cercosporasp.nov.WDL2）CCTCCNO：M2014518菌株。3.权利要求1所述的尾孢属WDL2（Cercosporasp.nov.WDL2）CCTCCNO：M2014518菌株在生产次生代谢产物中的应用；所述次生代谢产物为多糖、黄酮、总三萜和总酚中的四种、...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹静，肖佳雷，詹亚光，周欣，孙建广，王鹤鸣，
申请(专利权)人：东北林业大学，尹静，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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