一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法，该方法采用扦插育苗法栽培忍冬，并且在扦插过程中对忍冬枝条进行真菌接种，以提高忍冬花蕾中木犀草苷的含量；所述真菌为茶藨子叶状层菌和米曲霉。本发明专利技术用真菌对忍冬植株进行处理，使忍冬生长过程中伴有真菌的生长，真菌生长在忍冬的茎基部位，真菌的生长能够促进忍冬花蕾中次生代谢产物的积累，提高金银花的质量。本发明专利技术方法原料来源广泛、操作方便，易于实施，对生产上提高金银花质量具有重要意义。

A new method to promote the accumulation of galuteolin flower buds of Lonicera by fungi

The invention discloses a method for promoting galuteolin accumulation of flower buds of Lonicera by fungi, the cuttage seedling cultivation method of honeysuckle and fungus inoculation in cutting process of honeysuckle branches, in order to improve the content of luteolin in flower buds of Lonicera japonica Thunb; the fungi Ribes leaflike layer fungus and Aspergillus oryzae. The invention of honeysuckle plant fungi, the honeysuckle growth process with fungal growth, the growth of fungi in the stem parts of honeysuckle, fungi can promote the growth of secondary metabolites in flower buds of Lonicera accumulation, improve the quality of Flos lonicerae. The method of the invention has wide source of raw materials, convenient operation and easy implementation, and is of great significance for improving the quality of honeysuckle in production.

【技术实现步骤摘要】
一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法
本专利技术涉及一种促进忍冬花蕾中次生代谢产物积累的方法，具体涉及一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法。
技术介绍
随着“回归自然”潮流的涌起，传统天然植物药越来越受到人们的青睐。金银花源于忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花，性寒，味甘，具有清热解毒、凉散风热之功效，是中医临床常用药，据统计约1/3的中药方剂中用到了金银花，而且在双黄连、银翘解毒丸、银黄口服液等中成药中广泛应用，特别在SARS和禽流感等重大疫情防治中发挥了巨大作用，被誉为“中药中的青霉素”。目前国内外市场对金银花的需求量日益增加，对药材质量的要求也越来越高。药用植物体内的次生代谢物质通常是中药材发挥临床疗效的重要物质基础，2015版《中国药典》中规定忍冬体内的木犀草苷含量被作为衡量金银花药材品质的重要指标之一，因此采取有效措施促进忍冬体内木犀草苷的积累对于提高金银花药材的质量越来越重要。茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden是来源于忍冬植株上的一种真菌，该菌主产于山东平邑，寄生于忍冬植株老干或裸露的根部，其子实体被称为“银花蛾子”。该真菌是一种药用真菌，在当地具有悠久的历史，2002年载入《山东省中药材标准》，其含有三萜类、甾醇类、多糖类和苯乙烯基吡喃酮类等有效成分，具有清热解毒、消肿利咽、降血糖和抗肿瘤等作用。目前，对茶藨子叶状层菌的研究较少，主要是将其制成食品或药用原料，其他方面的用途未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法，该方法是在忍冬植株上接种茶藨子叶状层菌和米曲霉，以提高忍冬花蕾中次生代谢产物——木犀草苷的含量，该方法对提高金银花药材的品质具有重要意义。茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden是生长于忍冬植株上的一种原始野生真菌，经过研究发现，原始野生状态下忍冬植株上生长的茶藨子叶状层菌对忍冬花蕾中次生代谢物质的积累未产生显著影响，这可能与忍冬和茶藨子叶状层菌长期共存维持在相对的物质与生态的平衡有关。专利技术人经过研究，将茶藨子叶状层菌与米曲霉一起共同接种在忍冬植株上，这两种菌共同接种能促进忍冬花蕾中次生代谢产物的积累，从而使忍冬花蕾中次生代谢物质的含量有了很大的提升。本专利技术具体技术方案如下：一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法，该方法是：采用扦插育苗法栽培忍冬，并且在扦插过程中对忍冬枝条进行真菌接种，以提高忍冬花蕾中木犀草苷的含量；所述真菌为茶藨子叶状层菌和米曲霉。本专利技术通过在扦插过程中对忍冬枝条进行真菌接种的方式来提高忍冬花蕾中次生代谢产物木犀草苷的积累，从而提高其含量。本专利技术扦插育苗的方法包括以下步骤：（1）扦插的前2天用质量浓度为1/3000的多菌灵水溶液对基质和插床进行浇灌，直至基质和插床全部湿透；（2）然后将基质和插床在太阳下暴晒2天，将基质放于插床内；（3）扦插前2小时用真菌菌液对基质和插床进行浇灌，直至基质和插床全部浇透，所述真菌菌液为茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液的混合液；（4）将忍冬扦插枝条灭菌消毒，置于真菌菌液中浸泡10-12h，取出后蘸取生根粉，然后进行扦插，扦插后浇一次透水；（5）扦插后，对忍冬扦插枝条进行扦插育苗管理，直至扦插苗长到符合移栽或出圃要求，然后将符合要求的扦插苗进行移栽和苗期管理（即田间管理），植株现蕾后15-20天即可采摘花蕾。本专利技术方法中，采用真菌菌液对忍冬植株进行接种，所述真菌菌液为茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液的混合液。其中，所述茶藨子叶状层菌菌液可以以野生状态下忍冬植株上生长的茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden子实体为菌种培养得到，也可以以保藏号为CGMCCNO1195的茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden为菌种培养得到；所述米曲霉菌液可以以米曲霉为菌种培养得到，所述米曲霉可以从市场中购买。进一步的，本专利技术所用的茶藨子叶状层菌菌液的制备方法为：A.将茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden接种到斜面培养基上，在29℃培养5-7天；所述斜面培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆20%、琼脂1.5%、葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.05%、维生素1×10-3%，水余量；B.将斜面培养后生长的较好的茶藨子叶状层菌菌丝团接种到液体培养基中，在29℃、150rpm的条件下培养5-6天，得茶藨子叶状层菌菌液，每1000ml液体培养基每瓶接种5-8个菌丝团；所述液体培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆30%、葡萄糖2%、琼脂1.4%、麦芽汁（10Bx）10%、蔗糖1.5%、蛋白胨0.2%、麸皮4%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.025%、水余量。进一步的，本专利技术所用的米曲霉菌液的制备方法为：（1）将米曲霉接种到斜面培养基上，在25-30℃恒温培养3-5天；所述斜面培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆20%、葡萄糖2%、琼脂1.6%、蛋白胨0.2%、磷酸二氢钾0.2%、七水硫酸镁0.1%；（2）将斜面培养所得的菌种按照5-10wt%的接种量接种到液体培养基中，在25-30℃、50-150r/min的摇床上培养3-5天，得米曲霉菌液；所述液体培养基由以下重量百分含量的组分组成：米糠0.8%、蔗糖0.5%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.6%、氯化亚铁0.015%、硫酸镁0.10%、磷酸氢二钾0.15%、水余量。本专利技术上述真菌菌液中，茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液的体积比为2-8:1，优选为5:1。所述茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液是按照上述方法得到的菌液，将这两者菌液按照规定的体积比混合，即可得到真菌菌液。上述扦插方法中，步骤（1）中所用基质为河砂、蛭石、腐殖土按质量比2∶1∶1混合所得。上述扦插方法中，忍冬扦插枝条的制备方法如下：选择阴天上午9:00左右采集扦插枝条，剪取两年生4mm粗的生长健壮、无病虫害的嫩枝或硬枝，剪成长30cm左右的插条，每个插条上有6-8个节，每个节位的叶片各自剪掉1/2叶子，扦插穗条下端切口要平整为斜口，50条扎成1捆，用喷雾器将枝条喷湿，待枝条全部湿润后，将其放进泡沫隔热箱子里，上面再盖一层湿毛巾保湿，盖上盖子，等待扦插。上述扦插方法中，步骤（4）中忍冬扦插枝条用0.06wt%的高锰酸钾水溶液浸泡10-12h，进行灭菌消毒。灭菌消毒后将忍冬扦插枝条在真菌菌液中浸泡，以使尽量多的真菌接种到扦插枝条中，浸泡后蘸取生根粉即可进行扦插。所述生根粉是本领域常用的促进枝条生根的处理剂，可以自行配置，也可以从市场上购买。上述扦插方法中，扦插时，将扦插枝条的斜口端垂直插入育苗床内，下端插进基质8-12cm，扦插密度为0.5×0.25cm。扦插后要踩紧压实，浇透1次水。之后及时进行浇水、施肥等常规管理，一般每隔5天浇1次水，7-15天能生根并萌芽开始生长，成活后即可进行移栽、常规田间管理。本专利技术方法中，扦插枝条满足移栽条件后，选择土质疏松、肥沃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法，采用扦插育苗法栽培忍冬，其特征在于：在扦插过程中对忍冬枝条进行真菌接种，以提高忍冬花蕾中木犀草苷的含量；所述真菌为茶藨子叶状层菌和米曲霉。

【技术特征摘要】
1.一种利用真菌促进忍冬花蕾中木犀草苷积累的方法，采用扦插育苗法栽培忍冬，其特征在于：在扦插过程中对忍冬枝条进行真菌接种，以提高忍冬花蕾中木犀草苷的含量；所述真菌为茶藨子叶状层菌和米曲霉。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：包括以下步骤：（1）扦插前2天用质量浓度为1/3000的多菌灵水溶液对基质和插床进行浇灌，直至基质和插床全部湿透；（2）然后将基质和插床在太阳下暴晒2天，将基质放于插床内；（3）扦插前2小时用真菌菌液对基质和插床进行浇灌，直至基质和插床全部浇透，所述真菌菌液为茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液的混合液；（4）将忍冬扦插枝条灭菌消毒，置于真菌菌液中浸泡10-12h，取出后蘸取生根粉，然后进行扦插，扦插后浇一次透水；（5）扦插后，对忍冬扦插枝条进行扦插育苗管理，直至扦插苗长到符合移栽或出圃要求，然后将符合要求的扦插苗进行移栽和苗期管理，植株现蕾后15-20天即可采摘花蕾。3.根据权利要求2所述的方法，其特征是：真菌菌液为茶藨子叶状层菌菌液和米曲霉菌液的混合液；茶藨子叶状层菌菌液的制备方法为：A.将茶藨子叶状层菌Phylloporiaribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden接种到斜面培养基上，在29℃培养5-7天；所述斜面培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆20%、琼脂1.5%、葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.05%、维生素1×10-3%，水余量；B.将斜面培养后生长的较好的茶藨子叶状层菌菌丝团接种到液体培养基中，在29℃、150rpm的条件下培养5-6天，得茶藨子叶状层菌菌液，每1000ml液体培养基接种7-8个菌丝团；所述液体培养基由以下重量百分含量的组分组成：土豆30%、葡萄糖2%、琼脂1.4%、麦芽汁（10Bx）10%、蔗糖1.5%、蛋白胨0.2%、麸皮4%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.025%、水余量；米曲霉菌液的制备方法为：（1）将米曲霉接种到斜面培养基上，在25-30℃恒温培养2-3天；所述斜面...

【专利技术属性】
技术研发人员：方磊，周洁，张华，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37