本发明专利技术提供了一种从灰毡毛忍冬的叶中提取总黄酮提取的方法及其应用，本发明专利技术采用水提醇沉工艺，实现对灰毡毛忍冬叶的总黄酮对大程度的提取，再通过大孔树脂实现对黄酮化合物的选择性分离，并经过浓缩、干燥等处理，即可获得高纯度的黄酮化合物；本发明专利技术工艺简单，适合大规模工业化生产，从灰毡毛忍冬叶制备得到的总黄酮提取物总黄酮含量高于50%，本发明专利技术得到总黄酮提取物在治疗自身免疫性肝炎、高血糖和高血脂病症中具有良好的活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药材活性成分的提取方法，更具体的说涉及一种灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物、其制备方法及其应用。技术背景灰毡毛忍冬是忍冬科忍冬属植物，具有清热解毒，凉散风热的功效，常用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热等。灰毡毛忍冬不仅是常用中药，而且是一种 “药食同源”的绿色天然产物，而它的副产物一叶片，却一直被视为非药用部位而长期未得到良好的利用而废弃。现有文献表明，灰毡毛忍冬老叶中黄酮含量约为药用金银花的2. 78 倍、忍冬藤的6. 98倍。灰毡毛忍冬叶可能是较好的药用部位，而且其粗黄酮的抑菌效果和抗氧活性均高于金银花中的绿原酸粗品。黄酮类化合物有明显的抗溃疡、解痉、抗炎及降血脂等系列的生物活性，其制备的制剂，对心脑血管、动脉硬化、高血压等疾病有治疗的价值且长期服用无毒副作用。同时在卫生保健品及化妆品行业方面也有广阔的应用前景。在医药和食品上应用广泛，为合理开发利用这一废弃资源，所以从灰毡毛忍冬叶中提取黄酮化合物有很重要的意义。现有提取纯化灰毡毛忍冬叶中总黄酮的方法，如《西南大学学报》2009年I月第31 卷第I期的“重庆主产地灰毡毛忍冬枝叶中总黄酮的含量测定”一文，公开的方法是以干燥粉碎后的灰毡毛忍冬叶或枝粉末为原料，用60%的乙醇在室温下浸泡12h.然后在50°C 超声提取30min后，过滤得到黄酮提取液。该方法的主要缺点是①不能有效除去无机盐、 氨基酸等小分子杂质，产品质量差；②不能进一步除去乙醇有机溶剂，纯化不彻底，“三废排放”污染环境；③产品的纯度不高，色泽不好等。另如《中国食品添加剂》2012年第4期的 “金银花总黄酮的提取工艺优化及其抑菌作用研究” 一文，公开的方法是采用索氏提取，条件为以乙醇体积浓度为70%的水溶液为提取液，m(金银花)m(提取液)=1:50，提取温度 220°C，提取时间2h，金银花总黄酮的提取率为8. 43%。该方法的主要缺点是①用乙醇溶液作为提取液，提取后的溶液杂质多，不利于后续的纯化，直接造成产品的纯度低和产品的质量色泽差；②提取所用的温度过高，对产品的质量有所影响，对生产仪器的要求较高，提高了生产成本，浪费能源不环保；③提取后的溶液并未做进一步纯化，产品质量较低。
技术实现思路
本专利技术提供了一种从灰毡毛忍冬的叶中提取总黄酮提取的方法及其应用，本专利技术采用水提醇沉工艺，实现对灰毡毛忍冬叶的总黄酮对大程度的提取，再通过大孔树脂实现对黄酮化合物的选择性分离，并经过浓缩、干燥等处理，即可获得高纯度的黄酮化合物；具体的工艺步骤为一种灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物的制备方法，包括以下步骤I)将灰毡毛忍冬叶，采用水提工艺提取，分别收集水提液和药物残渣； 2)将步骤I)所述的水提液浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，分别收集沉淀和过滤液；所述加入乙醇沉淀为收集的浓缩液中加入95%的乙醇溶液，搅拌均匀，进行第一次沉淀，直至浓缩液中的乙醇含量为60% 85%(v/v)，静置24小时。然后再泵入离心机中，在转速为3000 6000转/分下，进行第一次离心10 20分钟，收集第一次离心的上层清液。对于收集的上层清液，同法进行第二次沉淀、离心，收集第二次离心的上层清液。对于收集的第二次离心的上层清液，回收乙醇直至无乙醇味为止，收集浓缩液用于下一步的处理；分别收集沉淀和过滤液。3)将步骤2)所述的过滤液调pH值至4-6，上DlOl或AB-8大孔吸附柱，洗脱液为40%-80%浓度的乙醇，洗脱液体积为柱体积的3-10倍；4)收集步骤3)所述的洗脱液，浓缩洗脱液，冻干得到总黄酮提取物。步骤I)所述的水提工艺提取为粉碎灰毡毛忍冬叶，用药材3-8倍重量的水回流提取 30-50min。 步骤3)所述上DlOl或AB-8大孔树脂柱为浓缩过滤液至原体积的1/6-1/8，上柱，大孔树脂的用量为原药材重量的1-2. 5倍。步骤4)所述的冻干为收集的黄酮浓缩液，先在_18°C的冰箱中预冻5 6小时，然后再置于冷冻干燥机中，在温度为-50 _60°C、真空度为25 50Pa的条件下，干燥24 30小时，制备得到总黄酮高于50%的黄酮冻干粉，，作为总黄酮提取物。一种灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物，所述总黄酮提取物为采用权利要求1-4所述的方法从灰毡毛忍冬的叶中提取制备得到。所述灰毡毛忍冬的叶为灰毡毛忍冬上端生长期在2个月以内的嫩叶。所述的灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物在制备治疗自身免疫性肝炎药物中的应用。所述的灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物在制备治疗高血糖药物中的应用。所述的灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物在制备治疗高血脂药物中的应用。本专利技术的有益技术效果是本专利技术工艺简单，适合大规模工业化生产，从灰毡毛忍冬叶制备得到的总黄酮提取物总黄酮含量高于50%，本专利技术得到总黄酮提取物在治疗自身免疫性肝炎、高血糖和高血脂病症中具有良好的活性。具体实施例方式实施例1灰毡毛忍冬叶中总黄酮提取物的制备称取取灰毡毛忍冬叶10kg，烘干粉碎，用药材与纯净水重量比为1:3的比例回流提取30-50min，提取液真空过滤，滤液收集备用，沉淀添加药材后再次提取利用；将上述收集的滤液水浴浓缩至原体积的1/3，收集浓缩液I ;在浓缩液I中加入95%的乙醇至浓缩液中的乙醇浓度为60%，静置24小时，然后在3000转/分的转速下，离心20分钟，取上层清液同法进行第二次醇沉、离心，收集第二次离心的上层清液，回收乙醇直至无醇味，得到浓缩液II ；将浓缩液II用6倍体积的纯净水溶解，然后再用稀盐酸调节pH值为4-6，得到上柱液；将已活化适宜的DlOl大孔树脂装柱，先用与大孔树脂柱等体积的纯净水进行反冲，排出柱中的气泡，再泵入步骤得到的上柱液吸附。将吸附黄酮的大孔树脂柱中泵入浓度为40%_80%的乙醇溶液进行洗脱，最优化的浓度为40% ;直至洗脱液中无黄酮时为止，乙醇洗脱液的用量为为大孔树脂柱体积的3-8 倍，收集流出液III，大孔树脂用蒸馏水洗涤后可再次使用；将流出液III，在真空度为_0.9Mpa、温度为75°C的条件下浓缩至无醇味，对于回收得到的乙醇，调节浓度后可再次使用；对于得到的黄酮浓缩液，先在_18°C的冰箱中预冻 5小时，然后再置于冷冻干燥机中，在温度为-50 _60°C、真空度为25Pa的条件下，干燥 24小时，HPLC检测确定总黄酮含量超过50% ;即制备出纯度为50%的黄酮冻干粉；得到总黄酮提取物。称取取灰毡毛忍冬的枝条10kg，采用上述方法制备得到提取对照组。实施例2灰毡毛忍冬叶中总黄酮提取物对免疫性肝损伤小鼠的保护作用KM种小鼠70只，雄性，重量18 22g，随机分为正常组、模型组、灰毡毛忍冬叶总黄酮提取物低剂量组(100mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)、高剂量组(400mg/kg)组、提取对照组(400mg/kg)和联苯双酯150mg/kg,每组10只,造模第I天除正常组外，其余各组每只小鼠尾部静脉注射卡介苗(BCG) 12. 5mg/mL (约含5X IO7个活菌数)，各治疗组ig给予相应药物；正常组和模型组ig给予等容积溶媒，连续10d。第10天，除正常组iv给予等容积溶媒外，其余各组每只小鼠静脉注射细菌脂多糖 (LPS) 37. 5μ g/mL。注射后禁食16h，自小鼠后眼眶静脉丛采血，3000r/min离心lOmi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种灰毡毛忍冬叶的总黄酮提取物的制备方法，特征在于：包括以下步骤：1）将灰毡毛忍冬叶，采用水提工艺提取，分别收集水提液和药物残渣；2）将步骤1）所述的水提液浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，分别收集沉淀和过滤液；3）将步骤2）所述的过滤液调pH值至4?6，上D101或AB?8大孔吸附柱，洗脱液为40%?80%浓度的乙醇，洗脱液体积为柱体积的3?10倍；4）收集步骤3）所述的洗脱液，浓缩洗脱液，冻干得到总黄酮提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李卿，李隆云，秦剑，罗先钦，周兴，胡荣，
申请(专利权)人：重庆市中药研究院，
类型：发明
国别省市：
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