本发明专利技术公开了从细毡毛忍冬中分离纯化5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮、β-谷甾醇或/和β-胡萝卜苷的方法。本发明专利技术从细毡毛忍冬中分离纯化5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮、β-胡萝卜苷、β-谷甾醇的分离纯化方法，得到的各化合物纯度较高，为细毡毛忍冬寻找到了新的使用价值，同时也为明确细毡毛忍冬的药效物质基础提供了可能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，主要涉及5-羟基-7，3'，4'-三甲氧基黄酮、β_谷甾醇、β_胡萝卜苷的分离纯化方法。
技术介绍
细租毛忍冬Lonicera similes Hemsl为川产金银花的主流品种,分布广，资源蕴藏量大，据调查，成都荷花池中药材专业市场经销的金银花，四川省内中药店及医疗单位使用的金银花多为南江产金银花(细毡毛忍冬)，并销往全国各地。目前四川南江县已建成了22个金银花专业示范村，全县金银花种植总面积达到26万亩，细毡毛忍冬占了 95%以上，现有10. 2万亩投产，年产干银花765万公斤，实现总产值2亿元，产区人均增收560元。金银花产业已成为南江县的主要经济支柱产业。近年来，不少研究表明细毡毛忍冬绿原酸含量高，药理作用与药典收载品种相当。但目前川银花优势品种细毡毛忍冬仍未入选中国药典，尤其是《中国药典》2010年版，加强了对中药材专属性成分的鉴别及含量测定，而细毡毛忍冬尚缺乏相关的基础研究。5-羟基-7，3'，4'-三甲氧基黄酮对金葡球菌等具有抗菌作用(邢俊波，等，忍冬花蕾化学成分研究.中国新药杂志，2002，11(11) :856-859)。β-谷留醇，有降低血清胆固醇的作用，可用于II型高脂血症及预防动脉粥样硬化；同时，该化合物还可以转化成药用维生素D3原料以及多种激素。β-胡萝卜苷，是神经鞘的主要成分之一，同时还具有抗氧化的药理活性。目前，还未见从细毡毛忍冬中分离纯化5-羟基-7，3'，4'-三甲氧基黄酮等化合物的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种5-羟基-7，3'，4'-三甲氧基黄酮的分离纯化方法；本专利技术的另一目的在于提供β_谷甾醇、β_胡萝卜苷的分离纯化方法。本专利技术提供了 5-羟基_7，3'，4'-三甲氧基黄酮的分离纯化方法，它包括如下步骤(I)取细租毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾,加入70_90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；(2)取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%v/v乙醇部位；(3)取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，依次用环己烷-乙酸乙酯=20 Γ0 1，乙酸乙酯-甲醇=5 Γ0 I系统进行梯度洗脱，每O. 16个柱体积的洗脱液为I流份，收集洗脱液，薄层监测，取39 59份，回收溶剂后，用甲醇复溶，再上凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，重结晶，即得5-羟基_7，3'，4'-三甲氧基黄酮。其中，步骤(I)中，所述乙醇提取的具体操作为依次用浓度为90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇提取；优选地，乙醇提取的具体方法为分别用90%V/V、80%V/V、70%V/V的乙醇回流提取，每个浓度的乙醇提取1-2次，每次1-3小时，物料比为I : 6-10。其中，步骤(2 )中，依次用水、80%/V乙醇、95%V/V乙醇洗脱，收集95%v/v乙醇部位；所述大孔吸附树脂为DlOl型大孔吸附树脂。其中，步骤(2)中，上柱液浓度以生药计为O. 02-0. 2g/ml,比上柱量小于2. 8g药材/g干树脂。进一步地，步骤(2)中，上柱液浓度以生药计为O. 10g/ml，比上柱量2. 74g药材/g干树脂。其中，步骤(3)中，梯度洗脱条件如下环己烷-乙酸乙酯=20 1，I. 07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10 11. 07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8 1，3. 3倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=6 I ;1. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=5 1，2. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=4:1，2. O倍柱体积。其中，步骤(3)中，所述凝胶柱为S印hadexLH-20型凝胶柱；重结晶溶剂为甲醇。本专利技术还提供了 β_谷甾醇的分离纯化方法，它包括如下步骤(I)取细租毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾,加入70_90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；(2)取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%乙醇部位；(3)取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯=20 Γ0 1，乙酸乙酯-甲醇=5 Γ0 I系统进行梯度洗脱，每O. 16个柱体积的洗脱液为I流份，收集洗脱液，薄层监测，取17 22份，回收溶剂后，重结晶，即得β-谷甾醇；步骤(3 )中，梯度洗脱条件如下环己烷-乙酸乙酯=20 1，I. 07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10 11. 07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8 1，3.3倍柱体积。本专利技术还提供了 β -胡萝卜苷的分离纯化方法，它包括如下步骤(I)取细租毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾,加入70_90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；(2)取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%乙醇部位；(3)取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯=20 Γ0 1，乙酸乙酯-甲醇=5 Γ0 I系统进行梯度洗脱，每O. 16个柱体积的洗脱液为I流份，收集洗脱液，薄层监测，取12(Γ124份，回收溶剂后，重结晶，即得β -胡萝卜苷;步骤(3 )中，梯度洗脱条件如下环己烷-乙酸乙酯=20 1，I. 07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10 I I. 07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8 1，3. 3倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=6 I ;1. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=5 1，2. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=4:1，2. O倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=3:1，4. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=2:1，I. 67倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=1:1，2. 12倍柱体积；乙酸乙酯I. 62倍柱体积。本专利技术还提供了从细毡毛忍冬中同时分离5-羟基-7，3'，4'-三甲氧基黄酮、β_谷甾醇和β_胡萝卜苷的方法，它包括如下步骤(I)取细租毛忍冬Lonicera similes Hemsl的干燥花蕾,加入70_90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；(2)取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90-95%V/V乙醇洗脱，收集90-95%v/v乙醇部位；(3)取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯=20 Γ0 1，乙酸乙酯-甲醇=5 Γ0 I系统进行梯度洗脱，每O. 16个柱体积的洗脱液为I流份，收集洗脱液，薄层监测，梯度洗脱条件如下环己烷-乙酸乙酯=20 1,1.07倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=10 I I. 07倍柱体积，环己烷-乙酸乙酯=8 1，3.3倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=6 I ;1. 05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=5 1，2.05倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=4:1，2. O倍柱体积；环己烷-乙酸乙酯=3本文档来自技高网...
【技术保护点】
5？羟基？7,3′,4′？三甲氧基黄酮的分离纯化方法，其特征在于：它包括如下步骤：（1）取细毡毛忍冬Lonicera？similes？Hemsl的干燥花蕾，加入70？90%V/V乙醇提取，合并提取液，回收溶剂，即得细毡毛忍冬总提取物浸膏；（2）取细毡毛忍冬总提取物浸膏，加水配制上柱液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、80%/V乙醇、90？95%V/V乙醇洗脱，收集90？95%v/v乙醇部位；（3）取所得乙醇部位，回收溶剂后，上硅胶柱层析，依次用环己烷？乙酸乙酯=20∶1~0∶1，乙酸乙酯？甲醇=5∶1~0∶1系统进行梯度洗脱，每0.16个柱体积的洗脱液为1流份，收集洗脱液，薄层监测，取39~59份，回收溶剂后，用甲醇复溶，再上凝胶柱，用甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，重结晶，即得5？羟基？7,3′,4′？三甲氧基黄酮。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：马逾英，郑光雅，卢晓琳，穆向荣，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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