本发明专利技术涉及天然药物领域，具体涉及忍冬属植物红腺忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｈｙｐｏｇｌａｕｃａ Ｍｉｑ）有效部位提取物，即红腺忍冬的茎叶提取物，可以用以下方法制备得到：取红腺忍冬茎叶为原料，用低极性有机溶剂进行脱脂；脱脂后的茎叶，用乙醇提取，得乙醇提取液；浓缩；浓缩液上大孔树脂柱，用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液浓缩，离心除去沉淀，取上清液；用正丁醇萃取，浓缩萃取液，干燥，即得。本发明专利技术的提取物具有很强的保肝活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然药物领域，具体涉及忍冬属植物红腺忍冬(Lonicera hypoglauca Miq)有效部位提取物，即从红腺忍冬的茎叶提取物，该提取物具有很强的保肝活性。
技术介绍
红腺忍冬，拉丁学名Lonicera hypoglauca Miq，英文名称Honeysuckle，为常绿缠绕灌木，长可达8米，茎常中空；分枝多，嫩部被微柔毛。叶对生，纸质，卵形至卵状矩圆形，长4～11厘米，宽1.5～5厘米，顶端短尖至渐尖，基部圆或近心形，上面近无毛，下面被肉毛，密布紫红色或褐红色的腺点，叶柄长约5～8毫米。花夏初开放，白色，后变黄色。花蕾长2.5～4.5cm。无毛或疏被毛，开放者下唇反转。生于路旁、沟边、林缘等处的灌丛中。主产浙江、江西、福建、湖南、广东、广西、四川等省区。山银花系05版《中国药典》收载品种，红腺忍冬(L.hypoglauca Miq)即山银花基源植物之一。山银花具清热解毒，凉散风热作用。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病。至今未见红腺忍冬的其它有效部位的报道。
技术实现思路
本专利技术公开了一种红腺忍冬的有效部位提取物，即红腺忍冬的茎叶提取物，通过以下方法制备得到取红腺忍冬茎叶为原料，用低极性有机溶剂进行脱脂；脱脂后的茎叶，用水或乙醇提取，得提取液；提取液浓缩；浓缩液上大孔树脂柱，用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液浓缩，离心除去沉淀，取上清液；用正丁醇萃取，浓缩萃取液，干燥，即得。上述红腺忍冬茎叶提取物提取方法中，低极性有机溶剂优选石油醚。其中脱脂时间优选2～10小时。用水或乙醇提取均可，优选用乙醇提取。乙醇的浓度优选50～100％。更优选60～80％。本专利技术的乙醇的浓度均为体积百分比。洗脱时，乙醇的浓度优选10-30％，更优选的浓度是25％。用水洗脱的目的主要是去掉部分溶于水的杂质。其中大孔树脂优选自D101、AB-8、HPD100、HPD300、D1或D2。萃取时优选用水饱和的正丁醇。洗脱剂的用量和浓度直接关系到产品得率和生产成本，本专利技术优选10-30％乙醇作为洗脱剂，在保证样品完全洗脱完的基础上有效地控制了乙醇的用量。下面是洗脱用乙醇浓度变化对提取物的影响试验含量测定方法仪器与试剂 高效液相色谱仪Aglient1100系列，二元泵G1312A，自动进样器，二极管阵列检测器，Chemstation A.06.01化学工作站，色谱柱Aglient Zorbax 80A，Extend-C18(4.6mm×250mm，5cm)，纯水(自制)，甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯。色谱条件 流动相0.1％磷酸溶液-甲醇(80∶20)，维持0-5min；在5-10min流动相比例线性改变至(75∶25)，10-30min维持比例(75∶25)；在30-35min线性改变至(67∶33)；流速为1.0mL·min-1，检测波长为250nm，柱温30℃。分离纯化工艺提取液适当浓缩后，大孔树脂分段，依次分别用水，10％，25％，35％，45％，55％的乙醇洗脱，收集每部分洗脱液，定容至100ml容量瓶，高效液相检测分析结果显示獐牙菜苷和马钱子苷主要集中在水、10％和25％乙醇(即0～25％乙醇)洗脱液中，直至35％乙醇洗脱液中未能检测出獐牙菜苷和马钱子苷，说明25％醇已能将两者洗脱完全。而用水洗脱部分杂质较多，獐牙菜苷和马钱子苷含量相对较小，因此，用水洗脱部分弃去，收集乙醇部分的洗脱液能保证提取物含量高、纯度高。为工业化生产操作简便，可以优选直接用25％乙醇洗脱，浓缩洗脱液后离心，用水饱和正丁醇萃取，得总环烯醚萜苷。具体试验图谱见图1～5。经检测发现，本专利技术的红腺忍冬茎叶提取物富含总环烯醚萜苷类化合物。从经济效益来说，茎叶的原料价格远远低于花蕾的价格，本专利技术显著降低了生产成本。总环烯醚萜苷中主要含獐牙菜苷和马钱子苷，因此，本专利技术可以以獐牙菜苷、马钱子苷为指标成分研究本专利技术提取物的制备工艺，并可将獐牙菜苷、马钱子苷作为中间体进行质量控制。以獐牙菜苷与马钱子苷的含量之和计为总环烯醚萜苷含量，本专利技术提取物的獐牙菜苷与马钱子苷含量比例在1∶3～1∶7，两者之和占总提取物60％以上。用水提取的提取物含量稍低。本专利技术提取物制备工艺操作，方便，成本低，无有害溶剂，生产安全性高，适合工业化生产。药理学试验表明，本专利技术的提取物具有保肝作用。本专利技术提取物的保肝活性研究试验材料药物按本专利技术方法制备的红腺忍冬提取物(HG-4，实施例1制备)低、中、高剂量组；马钱子苷(HG-1)；獐牙菜苷(HG-2)；secologanin(HG-3)。动物昆明种小鼠，体重18-22克。试剂及仪器CCL4；羧甲基纤维素钠；联苯双酯；方法急性肝损伤模型与给药昆明种小鼠100只，按体重随即分为9组，即HG-1组、HG-2组、HG-3组、HG-4低剂量组、HG-4中剂量组、HG-4高剂量组、阳性药(联苯双酯)组、模型组、正常组，每组10只。除正常组及模型组外，各组小鼠分别用HG-1(12mg/kg)、HG-2(12mg/kg)、HG-3(12mg/kg)、HG-4低(10mg/kg)、HG-4中(20mg/kg)、HG-4高(40mg/kg)、联苯双酯(200mg/kg)灌胃，0.ml/10g，正常组和模型组给予相同量之CMC-Na 0.1ml/10g，灌胃一周。一周后除正常组外均给予0.1％的CCl4(CCl4∶花生油＝1∶99)，腹腔注射20ml/kg。试验样品制备及测定给予CCl4二十四小时后小鼠摘眼球取血，离心分离血清，血清零下20℃保存，备肝功能检测。剪取肝右叶，10％福尔马林固定，标本做病理切片。另取新鲜肝脏0.5g剪碎，加生理盐水4.5ml，手动匀浆，4000rpm离心10min，取上清即为10％肝匀浆，测丙二醛(MDA)，匀浆稀释后测超氧化物歧化酶(SOD)的含量。将10％的匀浆稀释为2％的匀浆后，考马斯亮兰法测组织蛋白含量。按试剂盒方法测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)。统计学处理设计资料以x±s表示，数据取均值进行组间t检验，P＜0.05有统计学意义。实验结果表1环烯醚萜苷类化合物保肝活性的比较 *正常与模型组P＜0.05，说明造模成功。n＝10从表1可以看出，本专利技术的提取物药理作用优于马钱子苷和獐牙菜苷，而马钱子苷和獐牙菜苷属天然药物有效成分，制备工艺复杂，成本高。本专利技术的提取物制备工艺简单，成本低，提取物中含有一定量的马钱子苷和獐牙菜苷，但药理作用比马钱子苷和獐牙菜苷强。说明本专利技术的提取物中还含有其它对保肝药理活性良好的成分，并且有可能这些成分之间有协同作用。试验证明，本专利技术的红腺忍冬茎叶提取物对四氯化碳所致小鼠肝损伤有很强的保护作用，并且呈一定的剂量依赖性。本专利技术的红腺忍冬茎叶提取物可以用于临床，一般的用量为成人每日20～500mg。也可根据不同的疾病严重程度及不同的剂型偏离该范围。本专利技术的红腺忍冬茎叶提取物可单独或与其它中药及中药提取物组配制成药物。本专利技术的红腺忍冬茎叶提取物可与药学上可接受的载体混合，用于制备治疗用药物组合物。可制备成药剂学上通用的剂型，如胶囊、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂、酊剂、缓释剂等胃肠道给药剂型及注射剂、外用制剂等胃肠外本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种红腺忍冬茎叶提取物，其特征是由下列方法制备得到：取红腺忍冬茎叶为原料，用低极性有机溶剂进行脱脂；脱脂后的茎叶，用水或乙醇提取，提取液浓缩；浓缩液上大孔树脂柱，用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，离心除去沉淀，取上清液；用正丁醇萃取，浓缩萃取液，干燥，即得。
【技术特征摘要】
1.一种红腺忍冬茎叶提取物，其特征是由下列方法制备得到取红腺忍冬茎叶为原料，用低极性有机溶剂进行脱脂；脱脂后的茎叶，用水或乙醇提取，提取液浓缩；浓缩液上大孔树脂柱，用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，离心除去沉淀，取上清液；用正丁醇萃取，浓缩萃取液，干燥，即得。2.权利要求1的提取物，其中低极性有机溶剂是石油醚。3.权利要求1的提取物，其中脱脂时间为2～10小时。4.权利要求1的提取物，其中提取用的乙醇浓度为50-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：李萍，贺清辉，李会军，毕志明，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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