从忍冬茎中提取和纯化活性成分的方法、其在抗炎和止痛药中的应用技术

本发明专利技术公开了从忍冬（忍冬）中提取和纯化活性成分的方法及其应用。更具体的说，本发明专利技术涉及从忍冬茎（除去了叶的忍冬茎）中提取和纯化包括当药甙在内的活性成分的方法，通过除去单宁、难溶性类黄酮、皂草苷等来进行。由此获得的活性成分比从忍冬花或忍冬叶中获得的常用活性成分具有更好的抗炎和止痛作用、更为安全且更为稳定且包括为抗炎和止痛药的有效活性组分的当药甙。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从忍冬(忍冬)中提取和纯化活性成分的方法及其应用。更具体的说，本专利技术涉及从忍冬茎(除去了叶的忍冬茎)中提取和纯化包括当药甙在内的活性成分的方法，通过除去单宁、难溶性类黄酮、皂草苷等来进行。由此获得的活性成分比从忍冬花或忍冬叶中获得的常用活性成分具有更好的抗炎和止痛作用、更为安全且更为稳定，且包括为抗炎和止痛药的有效活性组分的当药甙。
技术介绍
忍冬(忍冬)是半常绿配体藤状灌木，它天然生长在日本、中国和韩国海拔50-600米范围的山或大堤脚下。其花蕾(金银花)和茎(忍冬茎)用作促进排尿、解毒、止血、血液纯化、治疗肿瘤、治疗水肿、感冒、腹泻、呕吐等的草药。。此外，许多传统的中药书籍，包括Sasang ConstitutionalMedicine和Gwangje Bigeup中教导了它可以很好地治疗各种人体内外的炎性脓肿。因其抗炎止痛活性长期用作治疗诸如感冒、扁桃体炎和神经痛这类上呼吸道感染的民间药。近来，已经通过各种实验动物模型证实了忍冬的抗炎和止痛活性且已经在学术范围内分离和报导了其有效的生理活性成分。相关领域的描述迄今为止，诸如绿原酸、咖啡酸甲酯、绿原酸和异绿原酸这类可水解的单宁和诸如番木鳖苷、当药甙、vogeloside和epi-vogeloside这类环烯醚萜苷类称作忍冬茎中含有的有效活性成分。大部分常规研究集中在忍冬花和忍冬叶上。应注意忍冬茎具有不同于忍冬叶或忍冬花的成分分布。即不同于忍冬茎，忍冬叶或忍冬花的主要成分为类黄酮，诸如忍冬苷、野漆树苷和链木黄酮；带有常春配基或齐墩果酸作为非糖成分的三萜皂草苷；和各种可水解的单宁。难以将这些成分制成注射剂。如果注射剂富含聚合物单宁，那么它们可以与其它成分结合而产生共沉淀且可以结合血液中的血清蛋白而形成难溶性沉淀，这可能是血管狭窄的原因。此外，由于忍冬中包括的类黄酮一般不溶于水，所以必不可少的是以作为溶解介体的相当大量的有机溶剂或其它试剂将它们溶解至高于有效浓度的水平。此外，富含类黄酮的活性成分极难溶于注射用生理盐水溶液且如果在碱性缓冲溶液中长期储存，那么可能会变得不稳定。最后，已知获自忍冬的皂草苷、特别是单皂苷(monodesmosides)具有强溶血作用。因此，不能将它们不经纯化而直接注入静脉。忍冬叶和忍冬花的单宁和难溶性类黄酮含量高于忍冬茎。在注射用急性毒性试验中，它们在低含量下也会产生更多的毒性且提供的止痛和抗炎作用较差。忍冬、日本当药、龙胆、三花龙胆、条叶龙胆、坚龙胆、点花滇龙胆用于减轻发热或解毒已经有许多年。然而，并未清楚地理解哪些成分可提供这类作用且大部分研究集中于鉴定忍冬茎的主要药用成分番木鳖苷的活性。此外，认为当药甙仅有效地保肝并抑制细菌活性，而迄今为止尚未报导其抗炎和止痛作用。
技术实现思路
本专利技术者确定除去了单宁、难溶性类黄酮、皂草苷等的忍冬茎的活性成分(除去了叶的忍冬茎)和所述活性组分中的有效活性成分当药甙具有优良的抗炎和止痛作用。因此，本专利技术的一个目的是提供从忍冬茎中制备具有优良抗炎和止痛活性、安全性和稳定性的活性成分的方法。本专利技术的另一个目的是提供包括所述活性成分的抗炎和止痛药。本专利技术的另一个目的是提供包括当药甙的抗炎和止痛药。附图简述附附图说明图1是表示随含量改变的活性成分药物作用的示意图。优选实施方案的详细描述本专利技术提供了从忍冬茎中制备具有优良抗炎和止痛活性、安全性和稳定性的活性成分的方法。本专利技术还提供了包括所述活性成分的抗炎和止痛药。本专利技术还提供了包括所述当药甙的抗炎和止痛药。下文给出了本专利技术的详细描述。本专利技术涉及从忍冬中提取和纯化活性成分和当药甙的方法，通过除去单宁、难溶性类黄酮、皂草苷等来进行。由此获得的活性成分比从忍冬花或忍冬叶中获得的常用活性成分具有更好的抗炎和止痛作用、更为安全且更为稳定且包括为抗炎和止痛药的有效活性组分的当药甙。从忍冬茎中提取活性成分和当药甙并通过下列方法纯化。用约7-10个体积的蒸馏水将忍冬茎样品回流提取2-3小时且然后过滤。收集残余物并用约5-7个体积的蒸馏水回流提取2-3小时。过滤由此获得的液体并与上述滤液合并、在减压条件下浓缩并再次过滤，使得其体积约为草药重量的1-3倍(v/w)。在用蒸馏水提取的过程中，如果使用的蒸馏水过少，那么搅拌就会变得困难且提取效率就会降低，因为提取物的溶解性变差。相反，如果使用过量蒸馏水，那么需要的时间和成本就会过高。因此，加入等量水饱和的低级醇并在30-50rpm下搅拌约10-20分钟。层分离后，过滤水饱和的低级醇层并在减压条件下浓缩而得到初级活性成分。在本文中通过将蒸馏水加入到诸如丙醇和丁醇这类低级醇中并搅拌、随后沉降来制备水饱和的低级醇。使层分离过程进行2-3次。在获得低级醇溶剂级分的过程中，如果使用的低级醇过少，那么纯化效率就会降低，由此提取产率和有效成分含量降低。相反，如果使用过多的低级醇，那么会使成本增加。因此，建议使用体积(v/w)为1-3倍草药重量的低级醇。使用聚酰胺树脂、聚乙烯吡咯烷酮树脂等对初级活性成分进行柱色谱以除去不需要的物质并检测有效组分。在1-10个体积(w/w)的水饱和的低级醇层中使用填料。洗脱2-3个体积的50％(v/v)甲醇和甲醇与填料体积且然后通过分步梯度法洗脱蒸馏水溶剂。通过用蒸馏水洗脱活性成分得到的二次活性成分含有更少的芳族有机酸、单宁和类黄酮且表现出较好的药物作用、显著降低的毒性、增加的溶解性和改善的血液稳定性。使用(十八烷基硅烷)树脂对二次活性成分再进行柱色谱。从10％(v/v)甲醇开始，通过分步梯度法洗脱2-3个体积的溶剂树脂体积，同时将甲醇含量增加10％(v/v)。使用为纯化的初级活性成分重量20-50倍体积的聚酰胺或聚乙烯吡咯烷酮树脂。通过洗脱20-30％(v/v)甲醇得到的活性成分表现出最佳抗炎和止痛活性。对这些活性成分的分析揭示出环烯醚萜类物质、诸如当药甙和番木鳖苷为主要活性组分。当药甙含量为15.1-72.1wt％且番木鳖苷含量为13.9-41.4wt％。通过洗脱20-30％(v/v)甲醇得到的活性成分具有最高当药甙含量。再对这些活性成分进行柱色谱以分离由下列化学通式1表示的当药甙 对由此得到的活性成分和当药甙进行花生四烯酸诱发的耳水肿试验和巴豆油诱发的耳水肿试验以测定抗炎作用。并进行乙酸诱发的扭体试验以测定止痛作用。结果发现它们具有远优于获自忍冬花或忍冬叶的常用活性成分的抗炎和止痛活性。可以通过制药领域中公知的方法将通过本专利技术获得的当药甙制备成治疗药。还可以将其单独或与药物上可接受的载体、成形剂、稀释剂等一起经口服或非肠道给药。特别可以将其制成粉剂、颗粒、片剂、胶囊、糖浆剂、皮肤软膏或注射药物形式。可以根据活性组分在体内的吸收性、失活率和排泄率、受试者的年龄、性别和身体状况、所治疗疾病的严重程度等选择本专利技术活性成分或当药甙的人体剂量。优选对成年人给予1-200mg的活性成分或当药甙。按照指定方法给药，如果需要，根据专家的建议来决定。可以将药物每天在固定间隔给药几次，优选每天1-3次。可以通过口服或非口服的方式给予所述的药物组合物。当经非肠道给药时，可以将其通过静脉、肌肉、直肠或皮肤给药。因为忍冬茎的活性成分具有优良的抗炎和止痛作用以及理想的溶解性、急性毒性和血液稳定性，所以它们非本文档来自技高网...

【技术保护点】
忍冬茎活性成分的制备方法，包括：（ａ）步骤：用水回流提取忍冬茎，将其过滤，通过向所述滤液中加入等量水饱和的低级醇进行层分离并将该体系在减压条件下浓缩而得到初级活性成分；和（ｂ）步骤：用聚酰胺树脂或聚乙烯吡咯烷酮树脂纯化所述的 初级活性成分而得到二次活性成分且再用十八烷基硅烷树脂纯化而得到最终的活性成分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭义宗，赵龙白，韩昌均，慎希縡，柳根镐，柳宪升，李海仁，
申请(专利权)人：SK化学株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]