狂犬病毒均质荧光复合微球的制备方法及其检测方法技术

本发明专利技术公开了狂犬病毒均质荧光复合微球的制备方法及其检测方法。本发明专利技术以聚苯乙烯纳米微球为功能化内核，标记荧光物质Eu3+，并采用络合剂BHHCT标记重组狂犬病毒抗原，制得狂犬病毒均质荧光复合微球。将本发明专利技术方法制备的狂犬病毒均质荧光复合微球用于检测狂犬病毒抗体，不需要进行解离和增强，并且，均质荧光复合微球表面覆有氨基硅烷形成的保护层，荧光信号受外界环境影响降低，荧光寿命长，可很好的满足时间分辨荧光免疫分析的需要。本发明专利技术建立的狂犬病毒均质荧光复合微球检测方法灵敏度高，检测成本低，减少了操作步骤和反应时间，更容易实现自动化操作，仪器读数线性范围更宽。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
狂犬病毒均质荧光复合微球的制备方法，包括以下步骤：1）制备聚苯乙烯纳米微球； 2）Eu3+的标记：将聚苯乙烯纳米微球悬浮于无水乙醇，加入络合剂BHHCT，避光反应15～25min，用无水乙醇洗涤，Tris‑HCl缓冲液重悬后，加入EuCl3，避光反应16～25min；离心，再用无水乙醇重悬沉淀，加入氨基硅烷，避光反应1.5～2.5小时，洗涤，得均质荧光复合微球； 3）抗原的标记：a、取均质荧光复合微球，重悬于无水乙醇，加入碳化二亚胺，避光反应23～35min；b、离心，磷酸盐缓冲液重悬，加入狂犬病毒抗原，避光反应12～20h；c、加入20%BSA溶液，反应22～35min；d、离心，洗涤，得到用于检测狂犬病毒的标记狂犬病毒抗原的均质荧光复合微球。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱绍智，薄清如，罗宝正，邵建宏，徐海聂，沙才华，黄新民，廖秀云，
申请(专利权)人：珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东;44