荧光编码微球的解码方法及系统技术方案

本发明专利技术公开了荧光编码微球的解码方法及系统，该荧光编码微球的解码方法包括如下步骤：激发步骤，用激光对某个荧光微球进行照射；接收步骤，接收所述某个荧光微球被激光激发后发出的光谱波形；判定步骤，在参考光谱波形库中的多个参考光谱波形中，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形，判定所述某个荧光微球为所述某个参考光谱波形对应的参考荧光微球。本发明专利技术可以利用更多的荧光物质对微球进行编码；提高了判别荧光微球的准确度；制备、运输和保存荧光微球更加简单；可以采用更多的波形码，即是说增加了微球编码的数目。

【技术实现步骤摘要】
荧光编码微球的解码方法及系统【
】本专利技术涉及检测领域，尤其涉及荧光编码微球的解码方法及系统。【
技术介绍
】生物芯片(biochip)技术是融微电子学、生命科学、计算机科学和光电化学为一体的高通量生物分子检测技术，是生命科学领域的一场重大革命。传统形式的生物芯片技术又称为微阵列(microarray)技术,其原理是将已知序列的生物分子(DNA、RNA、多肽、蛋白质等)集成于固体表面形成探针阵列，用被标记的待检测生物分子与上述探针阵列进行杂交反应，通过检测相应位置的杂交探针，实现生物分子检测的目的。传统生物芯片杂交属于固-液相杂交，其分立的固-液反应环境及洗涤因素使其在检测灵敏度及稀有样品的检测中显现出不足之处。随着人类基因组计划的进行及人类对自身健康发展的需要，更快速、更高效、更高通量的生物分子检测技术显得尤为重要。因此在传统生物芯片技术的基础上发展出了液相生物芯片(Liquid biochip)技术。液相生物芯片技术是集流式技术、荧光微球化学合成技术、生物分子杂交技术、高效数字信号处理技术为一体的尖端生物分子检测技术。液相生物芯片技术的核心是荧光编码标记的功能性高分子微球。目前，荧光微球的编码和解码思想是:以LuminexlOO为例，系统采用红色和橙色两种荧光染料对直径为5.5~5.6um大小的聚苯乙烯微球进行编码，将每种染料以荧光强度分成10等分，形成10X10的100种不同荧光编码，分别偶联上100种不同的探针分子用于生物检测。检测时用激光逐个激发荧光微球，使激发出的荧光信号通过一系列二向色镜和滤光片，再用光电倍增管(PMT)进行收集，最终将信号送入处理器进行处理。与传统固基芯片相比，液相生物芯片技术具有如下优点:(1)通量高:可同时对100或500种目的分子进行定性、定量分析，实现多成分检测的目的；(2)样本用量少:实现单样本的多成分检测，大量节省了样本用量，能够实现对稀有样品的检测分析，弥补了传统生物芯片技术的不足；(3)灵敏度高:杂交反应在接近生物体系统内部环境的液相环境下进行，能够保持蛋白质和DNA的天然构象和活性，而具有较大表面积的微球上可偶联成千上万的探针分子，如此高密度的探针分子能够最大程度的捕获被检测分子，保证杂交反应的充分进行，从而提高了检测的灵敏度；(4)速度快:基于液相反应动力学使杂交反应快速高效，大大缩短了孵育时间，而且流式细胞术使检测分析时间大大缩短；(5)成本低:单样本的多成分检测可有效节约样本、时间和劳动，芯片技术核心的微球制备工艺简单成熟，可实现大规模生产，使检测成本降低；(6)另外，还有检测范围广、准确性高、操作简单灵活、可重复性强等优点。尽管有如此多的优点，但随着新技术的不断出现以及社会发展对检测技术的进一步要求，液相生物芯片技术仍面临一些困难。【
技术实现思路
】经过研究发现，目前在临床和实验中，对微球荧光信号的处理方法是先将激发出的微球荧光信号通过一系列二向色镜和滤光片，再用光电倍增管(PMT)进行收集。这种方法具有其局限性，(I)当系统的二向色镜和滤光片确定之后，系统所能接收的荧光波段也就确定了，使得应用中只能选择一些特定波段的荧光物质进行编码；(2)由于相邻波段的荧光光谱有重叠区域，因此在解调时需要采用经验补偿的方法对重叠区荧光强度进行补偿，这样就影响了系统的检测精度；(3)根据检测的需要，同一批次制备的每个微球荧光发光强度必须十分均一，而且需要考虑在储存过程中微球荧光物质的漂白、猝灭等问题，使得荧光微球的制备与储存具有较高的难度，否则由于同一批次规格的荧光微球的荧光强度不一致，在计算机进行分析时，可能会出现解码错误。为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种荧光编码微球的解码方法及系统。荧光编码微球的解码方法，包括如下步骤:激发步骤，用激光对某个荧光微球进行照射；接收步骤，接收所述某个荧光微球被激光激发后发出的光谱波形；判定步骤，在参考光谱波形库中的多个参考光谱波形中，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形，判定所述某个荧光微球为所述某个参考光谱波形对应的参考突光微球。 在一个实施例中，还包括如下步骤:将所述光谱波形分别与参考光谱波形库中的多个参考光谱波形进行相关运算，将与所述光谱波形相关程度最高的参考光谱波形判定为最为接近的某个参考光谱波形。在一个实施例中，将所述光谱波形进行归一化后进行所述判定步骤。在一个实施例中，还包括如下步骤:分别用激光对同一批次的多个荧光微球进行照射；分别接收所述同一批次的多个荧光微球被激光激发后发出的对应光谱波形；将多个所述对应光谱波形进行平均后作为所述参考光谱波形库中的参考光谱波形。在一个实施例中，还包括如下步骤:将多个所述对应光谱波形进行平均后的波形进行归一化作为所述参考光谱波形库中的参考光谱波形。在一个实施例中，所述参考光谱波形库中的任意两个参考光谱波形之间的相关系数小于设定相关系数。本专利技术还提供了一种荧光编码微球的解码系统，包括:激光源、第一透镜、处理器、线阵光电探测器、色散装置、第二透镜、二向色镜和第三透镜；所述激光源发出的激光经过所述第一透镜准直后，被所述二向色镜反射，然后经过所述第三透镜的聚焦后照射到某个荧光微球；所述某个荧光微球被激光激发发出的荧光经过所述第三透镜的准直后，透过所述二向色镜，然后经过所述第二透镜的聚焦，并经过色散装置的作用被所述线阵光电探测器接收而得到荧光的光谱波形；所述处理器用于，在参考光谱波形库中的多个参考光谱波形中，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形，判定所述某个荧光微球为所述某个参考光谱波形对应的参考突光微球。在一个实施例中，还包括扫描装置，所述扫描装置用于，对经过所述二向色镜反射的激光进行移动，使得经过所述第三透镜聚焦的激光依次照射到不同的荧光微球上。在一个实施例中，所述处理器还用于，将所述光谱波形分别与参考光谱波形库中的多个参考光谱波形进行相关运算，将与所述光谱波形相关程度最高的参考光谱波形判定为最为接近的某个参考光谱波形。在一个实施例中，所述处理器还用于，将所述光谱波形进行归一化后，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形。在一个实施例中，所述处理器还用于，将多个荧光微球对应的光谱波形进行平均后的波形进行归一化作为所述参考光谱波形库中的参考光谱波形。[0031 ] 在一个实施例中，所述参考光谱波形库中的任意两个参考光谱波形之间的相关系数小于设定相关系数。一些实施例的荧光编码微球的解码方法及系统，由于线阵光电探测器接收的是整个可见光波段的光谱信息，对荧光物质的中心波长没有限制，因此可以利用更多的荧光物质对微球进行编码；从另一个方面讲，采用光谱波形对微球进行编码和解码提高了判别荧光微球的准确度；由于不需要利用精确的光强来判别解码突光微球，所以同一批次突光微球的发光强度不需要严格一致，使得制备、运输和保存荧光微球更加简单；另外，采用相关运算可以区分出差别很小的光谱波形，因而可以采用更多的波形码，即是说增加了微球编码的数目。【【附图说明】】图1是本专利技术一种实施例的同一批次的多个荧光微球受激发得到的光谱波形曲线图；图2是对图1的光谱波形进行归一化处理得到的归一化光谱波形曲线图；图3是4种归一化参考光谱波形图；图4是第一批次的荧光微球受激发后的光谱波本文档来自技高网...

【技术保护点】
荧光编码微球的解码方法，其特征是，包括如下步骤：激发步骤，用激光对某个荧光微球进行照射；接收步骤，接收所述某个荧光微球被激光激发后发出的光谱波形；判定步骤，在参考光谱波形库中的多个参考光谱波形中，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形，判定所述某个荧光微球为所述某个参考光谱波形对应的参考荧光微球。

【技术特征摘要】
1.荧光编码微球的解码方法，其特征是，包括如下步骤: 激发步骤，用激光对某个荧光微球进行照射； 接收步骤，接收所述某个荧光微球被激光激发后发出的光谱波形； 判定步骤，在参考光谱波形库中的多个参考光谱波形中，选择与所述光谱波形最为接近的某个参考光谱波形，判定所述某个荧光微球为所述某个参考光谱波形对应的参考荧光微球。2.如权利要求1所述的荧光编码微球的解码方法，其特征是，还包括如下步骤:将所述光谱波形分别与参考光谱波形库中的多个参考光谱波形进行相关运算，将与所述光谱波形相关程度最高的参考光谱波形判定为最为接近的某个参考光谱波形。3.如权利要求1所述的荧光编码微球的解码方法，其特征是，将所述光谱波形进行归一化后进行所述判定步骤。4.如权利要求1所述的荧光编码微球的解码方法，其特征是，还包括如下步骤: 分别用激光对同一批次的多个荧光微球进行照射； 分别接收所述同一批次的多个荧光微球被激光激发后发出的对应光谱波形； 将多个所述对应光谱波形进行平均后作为所述参考光谱波形库中的参考光谱波形。5.如权利要求4所述的荧光编码微球的解码方法，其特征是，还包括如下步骤: 将多个所述对应光谱波形进行平均后的波形进行归一化作为所述参考光谱波形库中的参考光谱波形。6.如权利要求1、4或5所述的荧光编码微球的解码方法，其特征是: 所述参考光谱波形库中的任意两个参考光谱波形之间的相关系数小于设定相关系数。7.一种荧光编码微球的解码系统，其特征是，包括:激光源、第一透镜、处理器、线阵光电探测器、色散装置、第二透镜、二向色镜和第三透...

【专利技术属性】
技术研发人员：王东风，何永红，朱亮，李国花，孙树清，马辉，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东;44