一种靶向lncRNAs的用于抗AR相关肿瘤去势复发的修饰性LNA寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向lncRNAs的用于抗AR相关肿瘤去势复发的修饰性LNA寡核苷酸。本发明专利技术研究发现PCGEM1的表达与前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，且与AR异构体(如AR3(AR-V7)的表达呈高度正相关，并证明了PCGEM1通过选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3的表达，基于上述发现，设计了直接靶向目标基因PCGEM1的LNA寡核苷酸，其能够高效、准确的阻断PCGEM1的表达，联合靶向阻断PCGEM1所介导的雄激素受体异构体AR3，进而有效的降低AR相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移情况。其特异性好，稳定性高，动物实验表明能抑制肿瘤生长，效果十分显著。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向lncRNAs的用于抗AR相关肿瘤去势复发的修饰性LNA寡核苷酸
本专利技术涉及分子生物学
，具体地说，涉及一种靶向lncRNAs的用于抗AR相关肿瘤去势复发的修饰性LNA寡核苷酸。
技术介绍
癌症占人类死亡病因的近1/4。在过去的几十年里肿瘤复发和转移仍是改善整体存活率的主要障碍，这可能主要归因于人们对于癌症生物学仍然缺乏全面的了解。例如，功能基因组学研究的最新进展表明，参与人类基因转录的绝大多数是非编码RNA，然而，对于长非编码RNA(lncRNA)在调控癌症基因表达及机制等方面人类仍然所知甚少(XieC,YuanJ,LiH,LiM,ZhaoG,BuD,etal.NONCODEv4:exploringtheworldoflongnon-codingRNAgenes.Nucleicacidsresearch.2013；doi:10.1093/nar/gkt1222.)。新近有研究表明lncRNAPCGEM1可以与雄激素受体(AR)结合作用(YangL,LinC,JinC,YangJC,TanasaB,LiW,etal.lncRNA-dependentmechanismsofandrogen-receptor-regulatedgeneactivationprograms.Nature.2013；29:598-602.)。PCGEM1在前列腺癌上调(SrikantanV,ZouZ,PetrovicsG,XuL,AugustusM,DavisL,etal.PCGEM1,aprostate-specificgene,isoverexpressedinprostatecancer.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica.2000；97:12216-21.)，可促进细胞增殖(PetrovicsG,ZhangW,MakaremM,StreetJP,ConnellyR,SunL,etal.ElevatedexpressionofPCGEM1,aprostate-specificgenewithcellgrowth-promotingfunction,isassociatedwithhigh-riskprostatecancerpatients.Oncogene.2004；23:605-11.)。AR3(AR-V7)是AR异构体，有研究表明AR3(AR-V7)在很大程度上诱导形成相关肿瘤如前列腺癌的激素去势抵抗(AntonarakisES,etal.AR-V7andresistancetoenzalutamideandabirateroneinprostatecancer.TheNewEnglandjournalofmedicine.2014；371,1028-1038.)。目前关于通过靶向lncRNAPCGEM1，以阻断该特异性目标基因的表达，进一步抑制AR相关肿瘤的激素去势抵抗和复发转移还未见报道。LNA(LockedNucleicAcids，锁核酸)是一种类寡核苷酸衍生物，结构中β-D-呋喃核糖的2′-O、4’-C位通过缩水作用形成刚性的结构。LNA降低了核糖结构的柔韧性，增加了磷酸盐骨架局部结构的稳定性。由于与DNA/RNA在结构上具有相同的磷酸盐骨架，故其对DNA、RNA有很好的识别能力和强大的亲和力。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种LNA寡核苷酸。本专利技术的再一的目的是，提供所述的LNA寡核苷酸的用途。本专利技术的另一的目的是，提供一种缀合物。本专利技术的第四个目的是，提供一种药物组合物。本专利技术的第五个目的是，提供所述的缀合物或药物组合物的用途。本专利技术的第六个目的是，提供一种试剂盒。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：LNA寡核苷酸，所述的LNA寡核苷酸选自下述序列：a)T+T+T+TCCAAAGGG+T+CCGCTGTCCCTG+G+A+G，或b)A+T+T+CCCCTCAGA+A+ATCTCAGGGCTT+G+T+C，其中+选自β-D-氧-LNA核苷酸类似物中的任一种。优选地，所述的LNA寡核苷酸选自下述序列的一种：a)TGTGTATCCAAAGGGTTACCGCTGTCCCTGTGTAAG；b)TGTGTATCCAAAGGGATTCCGCTGTCCCTGTGTAAG；c)AGTCTACCCCTCAGACAGATCTCAGGGCTTAGATCC；d)AGTCTACCCCTCAGAGAGATCTCAGGGCTTAGCTCC，其中，G为G-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，C为C-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，A为A-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，T为T-β-D-氧-LNA核苷酸类似物。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：所述的LNA寡核苷酸在制备药物中的应用，所述的药物用于治疗或诊断肿瘤。所述的肿瘤前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌和结肠癌。所述的LNA寡核苷酸在制备药物中的应用，所述的药物用于降低雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种缀合物，所述的缀合物包含如上所述的LNA寡核苷酸，和至少一个共价结合到所述LNA寡核苷酸上的非核苷酸或非多核苷酸部分。为实现上述第四个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种药物组合物，所述的药物组合物含有如上所述的LNA寡核苷酸，以及可药用的稀释剂、载体或辅剂。优选地，所述的药物组合物包含水性载体，所述的水性载体包含用于将pH维持在7.35-7.45范围内的缓冲剂。为实现上述第五个目的，本专利技术采取的技术方案是：所述的缀合物或所述的药物组合物在制备药物中的应用，所述的药物用于治疗或诊断肿瘤。为实现上述第六个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种试剂盒，所述的试剂盒含有如上所述的LNA寡核苷酸，以及适合重配所述LNA寡核苷酸的盐水或缓冲溶液。本专利技术优点在于：本专利技术通过临床标本研究发现PCGEM1的基因表达与前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，PCGEM1不但可以与AR直接作用，更重要的是PCGEM1与AR异构体(如AR3(AR-V7))的表达呈高度正相关，并证明了PCGEM1通过选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3(AR-V7)的表达，由此发现lncRNAs如PCGEM1可能通过调控AR基因转录的表观遗传机制参与AR相关肿瘤的增殖、恶性侵袭复发及转移驱动，因为在一定程度上是由于AR的异构体如AR3(AR-V7)介导了该类肿瘤的激素去势抵抗，而并非野生型全长AR。基于上述AR相关肿瘤的特异性调节lncRNAs如PCGEM1参与调控了与该类肿瘤的激素去势抵抗相关AR异构体(如AR3(AR-V7))的表达，本专利技术设计了修饰性LNA寡核苷酸，直接靶向目标基因lncRNAPCGEM1，其能够高效、准确的阻断该特异性目标基因的表达，联合靶向阻断PCGEM1所介导的雄激素受体异构体AR3(AR-V7)，进而有效的降低AR相关肿瘤(如前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌和结肠癌)的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移情况。本专利技术的LNA寡核苷酸特异性好，稳定性高本文档来自技高网...

【技术保护点】
LNA寡核苷酸，其特征在于，所述的LNA寡核苷酸选自下述序列：a)T+T+T+TCCAAAGGG+T+CCGCTGTCCCTG+G+A+G，或b)A+T+T+CCCCTCAGA+A+ATCTCAGGGCTT+G+T+C，其中+选自β‑D‑氧‑LNA核苷酸类似物中的任一种。

【技术特征摘要】
1.LNA寡核苷酸，其特征在于，所述的LNA寡核苷酸选自下述序列的一种：a)TGTGTATCCAAAGGGTTACCGCTGTCCCTGTGTAAG；b)TGTGTATCCAAAGGGATTCCGCTGTCCCTGTGTAAG；c)AGTCTACCCCTCAGACAGATCTCAGGGCTTAGATCC；d)AGTCTACCCCTCAGAGAGATCTCAGGGCTTAGCTCC，其中，G为G-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，C为C-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，A为A-β-D-氧-LNA核苷酸类似物，T为T-β-D-氧-LNA核苷酸类似物。2.权利要求1所述的LNA寡核苷酸在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于治疗或诊断肿瘤，所述的肿瘤选自前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌和结肠癌。3.权利要求1所述的LNA寡核苷酸在制备药物中的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱忠民，张子强，Y·莫，吕寒静，朱竹先，
申请(专利权)人：上海市同济医院，
类型：发明
国别省市：上海;31