一种AFG2的产毒培养基及寄生曲霉的AFG2产毒发酵方法技术

本发明专利技术涉及一种AFG2的产毒培养基及寄生曲霉的AFG2产毒发酵方法。该培养基的组份中含有占培养基总重量3-5%的酵母浸膏，发酵培养基为增菌培养基和固体发酵培养基。本发明专利技术AFG2的产毒培养基解决了目前自然感染霉菌的谷物中AFG2浓度低、不均匀、耗时长等问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于发酵工程
，具体涉及一种AFG2的产毒培养基及寄生曲霉的 AFG2产毒发酵方法。
技术介绍
黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFs)是由寄生曲霉、黄曲霉和集峰曲霉等其中的一 些产毒真菌产生的次生代谢产物，具有致癌、致畸和致突变等三致作用。据文献报道，已 鉴定出的AFs多达20余种，其中最为常见的是AFs是黄曲霉毒素Bl(AFBl)、黄曲霉毒素 B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1 (AFG2)、黄曲霉毒素G2(AFG2)。AFs可污染玉米、小麦、大豆和棉 籽等谷物及油料农产品，亦可残留在一些DDGS、小麦麸、大豆柏和棉籽柏等农副产品中。当 AFs污染的农产品作为人的食品时，会危害人的健康，轻度的可致亚健康状况，严重可引起 肝脏病变，导致死亡；而AFs污染的农副产品饲喂动物时，常引起动物生产性能下降、抗病 力降低，严重时会导致死亡等。因此，食品和饲料中AFs的污染问题引起了世界许多国家政 府和食品安全监测机构的重视，设定了食品和饲料中的AFs限量标准。AFs的科学研宄也备 受国内外学者的关注，在猪、奶牛和禽类等动物中开展了相应试验。 然而，国内报道的发酵培养基中AFG2最高浓度仅为46ppb(冯建蕾，2004)，因此在 开展AFG2相关科学研宄时，均需从国外进口价格昂贵（930RMB/mg)的AFG2样品，试验成本 高，或需要进行商品预订，给相关科学研宄带来不便。综上所述，开发出AFG2的发酵培养基 及应用方法，可为动物的AFG2毒理试验和AFs的食品安全研宄提供试验素材。
技术实现思路
本专利技术提供了一种AFG2的产毒培养基，用于解决目前自然感染霉菌的谷物中 AFG2浓度低、不均匀、耗时长等问题。 本专利技术还提供了一种寄生曲霉的AFG2产毒发酵方法。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是： -种AFG2的产毒培养基，该培养基的组份中含有占培养基总重量3-5%的酵母浸 膏，所述的发酵培养基为增菌培养基和固体发酵培养基。 作为优选，所述的增菌培养基各组分按重量百分比计包括：25-30 %马铃薯， 10-15 %葡萄糖，1-3 %琼脂，3-5%酵母浸膏，0. 4%复合矿物盐，0. 3g/L青霉素，0. 3g/L链 霉素，余量为水。专利技术人经大量的试验显示证明，利用本专利技术增菌培养基，在相同培养条件 下，寄生曲霉孢子复苏所需的时间仅需2天，比传统培养基的复苏时间缩短4天，且孢子密 度提高10倍。目前，在进行寄生曲霉增菌培养时，常规的培养基成分为：马铃薯、葡萄糖、琼 脂和水，该培养基促寄生曲霉生长效率低，耗时长，易受杂菌污染，而本专利技术提供的增菌培 养基效率明显提尚。 作为优选，所述的固体发酵培养基各组分按重量百分比计包括：40-70%早籼米， 20-45 %棉籽柏，6-12 %蔗糖，0. 2-0. 5 %复合矿物盐，3-5 %酵母浸膏，按比例配制完后，调 节固体发酵培养基含水量为15-20%。优选的方案是，41. 6-51. 6 %早籼米，37. 9-44 %棉籽 柏，6-10. 9%蔗糖，0.5%复合矿物盐，3-4%酵母浸膏。进一步的，所述的早籼米和棉籽柏经 粉碎，粒度达到20-40目标准。该固体发酵培养基所含碳水化合物（早籼米）、蛋白质（棉 籽柏）、矿物质（复合矿物盐）和促生长因子（酵母浸膏）等营养物质恰好满足寄生曲霉 高效产毒的条件，且比例适当，可实现寄生曲霉高效产AFG2。在进行固体发酵培养时，现 有技术所用的培养基仅为调节了水分的粉碎玉米，即普通的玉米，成分单一，营养成分不平 衡，所需的发酵培养时间较长，本专利技术人也曾尝试采用单一的粉碎玉米培养基进行培养，效 果也很差。现有技术采用的培养基中AFG2浓度显著低于本专利技术的固体发酵培养基AFG2浓 度。 作为优选，复合矿物盐的制备方法如下：所述复合矿物盐的组分以质量百分比计 为：42-48%硝酸钠，10-16%硫酸镁，10-15%氯化钾，18-24%磷酸氢二钾，2. 7-5. 7%硫酸 锌，2-5 %硫酸锰，0. 2-0. 8 %五水硫酸亚铁；将上述各矿物盐原料混合均匀，粉碎过80目分 样筛后再次混合，得到复合矿物盐。 培养基的灭菌要求：所述的增菌培养基和固体发酵培养基，分别按比例配制好 (其中，增菌培养基中的青霉素和链霉素成分在灭菌结束后，待增菌培养基冷却至40°C左 右加入混匀），用盐酸或氢氧化钠调节pH值为5. 5-7. 0后，置于2L锥形瓶中，盖上棉塞，在 121-123°C，0. 12MPa，灭菌20min，各培养基配制工作结束。 增菌培养基平板制作：在生物安全柜中，将灭菌好的增菌培养基倒置在经过灭菌 的直径l〇cm培养皿中，自然冷却。然后，将增菌培养基放在37°C恒温箱中培养24h，无菌生 长者方可使用。 一种AFG2发酵培养基应用方法，包括菌种复活增殖和固体发酵培养两个步骤，采 用寄生曲霉菌种进行发酵，采用本专利技术提供的发酵培养基进行菌种复活增殖和固体发酵培 养。该方法采用上述固体发酵培养基，发酵选用的菌种为寄生曲霉菌（来自中国普通微生 物菌种保藏管理中心，CGMCCNO. 3. 0124)，发酵工艺采用常规的固体发酵工艺。按照本专利技术 提供的培养基和培养方法，AFG2在产毒培养基的固体风干物中浓度可达914ppb，相比现有 技术的发酵效价，具有显著的进步。而且该方法发酵效率高，生产费用低，填补了我国AFG2 的生产领域的空白，并可极大降低AFG2的毒理研宄领域的研宄成本。 本专利技术的有益效果是：本专利技术研制的增菌培养基，无细菌污染干扰，霉菌复活增殖 快，孢子活力高，提高了工作效率。本专利技术研制的固体发酵培养基，营养均衡，霉菌生长旺 盛，培养周期短，仅需12-13天，相对普通大米培养基，培养时间缩短5-7天，且AFG2浓度显 著提高。本专利技术提供的固体发酵培养基，主要采用早籼米、棉籽柏、蔗糖、复合矿物盐和酵母 浸膏，原料易得、廉价。相对从国外进口的AFG2,本专利技术提供的培养基生产出的AFG2价格可 降低80%以上。本专利技术提供的发酵方法，简单易行，可操作性强。【具体实施方式】 下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发 明的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落 入本专利技术保护范围。 在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均 可从市场购得或是本行业常用的。 本专利技术的各实施例，以中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC)提供的寄生曲 霉菌（Aspergillusparasiticus)CGMCCNO. :3. 0124,进行阐述。 实施例1-4增菌培养基的配制 一种用于寄生曲霉菌菌种的增菌培养基，将表1所示的各组份混合后，用盐酸和 氢氧化钠溶液调节增菌培养基pH值为5. 5-7. 0。 表 1【主权项】1. 一种AFG2的产毒培养基，其特征在于：该培养基的组份中含有占培养基总重量3-5% 的酵母浸膏，所述的发酵培养基为增菌培养基或固体发酵培养基。2. 根据权利要求1所述的AFG2的产毒培养基，其特征在于：所述的增菌培养基各组分 按重量百分比计包括：25-30%马铃薯，10-15%葡萄糖，1-3%琼脂，3-5%酵母浸膏，0. 4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种AFG2的产毒培养基，其特征在于：该培养基的组份中含有占培养基总重量3‑5%的酵母浸膏，所述的发酵培养基为增菌培养基或固体发酵培养基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：熊江林，侯永清，丁斌鹰，刘玉兰，邱银生，吴灵英，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42