一种梨果皮中木质素单体含量的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种梨果皮中木质素单体含量的测定方法，该方法包括以下步骤：取样品用液氮研磨，经有机相和热水提取后，烘干，然后采用三氟化硼和乙硫醇提取，再加入内标正二十二烷，再烘干后用嘧啶和N,O-双三甲基硅基乙酰胺衍生化，用气相色谱-质谱联用仪分析。然后根据分子离子峰来定性，其中质荷比(m/z)269为G木质素单体，m/z 299为S木质素单体。根据正二十二烷的浓度，峰面积，气相响应因子k来定量，从而计算出样品中两种木质素单体的含量。本发明专利技术提供的测定梨果皮中木质素单体含量的方法操作简单，可为研究果皮中木质素单体对果皮色泽的影响提供依据，进而为进一步调控梨果皮色泽奠定理论基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及。
技术介绍
木质素分为由紫丁香基丙烷结构单体聚合而成的紫丁香基木质素(S-木质素)、由愈创木基丙烷结构单体聚合而成的愈创木基木质素(G-木质素)及由对一羟基苄基丙烷结构单体聚合而成的对一羟基苯基木质素(H-木质素)等三种类型。包含梨在内的被子植物中多为物种中仅存在S-木质素和G-木质素。梨果皮色泽是果品经济价值的重要指标。研宄表明，梨果皮褐色形成与木质素合成关系密切，随着相关酶PPO和POD活性的降低，木质素合成量减少而明显降低，并且在木质素生物合成途径中S-和G-木质素单体的形成分别受不同基因的调控。因此，为了深入研宄褐皮梨果皮中S-和G-木质素单体形成机理，需要建立一种准确、快速的方法来测定果皮中木质素单体的含量，为进一步调控梨果皮色泽奠定理论基础。目前，对于木质素含量的测定方法主要有酸解法、巯基乙酸法和乙酰溴法等，但这些方法都是针对测定总木质素含量，不能对木质素单体进行分离、测定。而对于木质素单体，目前仅有中药丹参根中木质素单体含量的测定见于报道，在梨果皮中木质素单体含量测定方面，缺少一种行之有效，简便准确的测定方法。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种适用测定梨果皮中木质素单体含量的方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案:本专利技术提供了一种测定梨果皮中木质素单体含量的方法，该方法包括如下步骤:取样品用液氮研磨，经有机相和热水提取后，烘干，然后采用三氟化硼和乙硫醇提取，再加入内标正二十二烷，再烘干后用嘧啶和N，O-双三甲基硅基乙酰胺衍生化，用气相色谱-质谱联用仪分析。上述测定梨果皮中木质素单体含量的方法的步骤，可优化为:I)液氮研磨样品，有机溶剂初提，热水提取，烘干；2)置于反应液中反应；3)离心取上清，加入正二十二烷、水和二氯甲烷涡旋静置分层；4)有机相提取后烘干；5)得到的烘干物质重新溶于二氯甲烷，加入嘧啶和N，O-双三甲基硅基乙酰胺，静置后用气相色谱-质谱联用仪分析。进一步，测定梨果皮中木质素单体含量的方法的步骤优化为:1)液氮研磨样品，分别用丙酮、甲醇各提取，再用热水提取，烘干；2)按照一定的质量体积比，将烘干后的样品加入反应液中，置恒温烘箱反应；3)离心取上清，加入溶于二氯甲烷的正二十二烷，用碳酸氢钠调PH为3?4，加超纯水和二氯甲烷，涡旋，静置分层；4)吸取下层有机相，于恒温烘箱中烘干；5)得到的烘干物质重新溶于二氯甲烷，加入嘧啶和N，O-双三甲基硅基乙酰胺，静置后用气相色谱-质谱联用仪分析。更进一步，上述测定梨果皮中木质素单体含量的方法的步骤优化为:I)液氮研磨样品，分别用丙酮、甲醇各提取，再用热水提取，45°C烘干；2)按照质量体积比为50:1，将烘干后的样品加入反应液中，置100°C恒温烘箱反应4h，再置于_20°C停止反应；3) 12000rpm离心lOmin，取上清液，按照样品与溶于二氯甲烷的正二十二烷的体积比3:2，加入正二十二烧，用碳酸氢钠调PH为3?4，加2mL超纯水和ImL 二氯甲烧，涡旋，静置分层；4)吸取下层有机相500 μ L，于45°C恒温烘箱中烘干；5)得到的烘干物质重新溶于二氯甲烷，加入嘧啶和N，O-双三甲基硅基乙酰胺，静置后用气相色谱-质谱联用仪分析。其中，上述步骤2)中所述的反应液是通过将终浓度为2.5%的三氟化硼乙醚和10%的乙硫醇溶于二氧六环制得的。其中，所述气相色谱-质谱联用仪的分析条件为:进样口温度为240?260°C，电子轰击离子源温度为220?240°C，接口温度270?290°C ;溶剂出峰时间延迟3?4min。进一步地，所述气相色谱-质谱联用仪的分析条件为:进样口温度为250°C，电子轰击离子源温度为230°C，接口温度280°C ;溶剂出峰时间延迟3min。上述测定梨果皮中木质素单体含量的方法还包括如下步骤:根据分子离子峰来定性，其中质荷比269为G木质素单体，荷质比299为S木质素单体。上述测定梨果皮中木质素单体含量的方法还包括以下步骤:根据正二十二烷的浓度，峰面积，气相响应因子k来定量，从而计算出样品中两种木质素单体的含量。其中，上述的响应因子k为1.5。本专利技术在处理样品时采用液氮研磨，可有效的降低样品褐变，酶失活对测定结果的影响；在检测样品时，本专利技术是采用正二十二烷作为内标物，出峰时间早且稳定，定量更加准确。此外，本专利技术提供的详细的处理方法，合适的气相色谱-质谱联用仪分析(GC-MS)条件，可以简便，快速，准确的测定梨果皮的2种木质素单体的含量，从而为研宄果皮中木质素单体对果皮色泽的影响提供依据，进而为进一步调控梨果皮色泽奠定理论基础。【附图说明】图1是两种梨果皮中木质素单体的定性鉴定图；以及图2是砀山酥梨和锈酥梨的果皮内两种木质素单体含量的对比结果图。【具体实施方式】以下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术所作的修饰或者替换，均属于本专利技术的范畴。实施例I仪器与样品1.1 仪器:安捷伦 7890A GC system 串联 5975C inert XL MSD。色谱柱:安捷伦HP-5，30111*0.25mm*0.25 μ mD1.2样品:‘砀山酥梨’及其褐皮芽变品系‘锈酥’的果皮。2方法与结果2.1样品的处理:取上述样品的各Imm左右厚度的梨果皮，采用液氮研磨，分别用丙酮、甲醇各提取24h，当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种梨果皮中木质素单体含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：取样品用液氮研磨，经有机相和热水提取后，烘干，然后采用三氟化硼和乙硫醇提取，再加入内标正二十二烷，再烘干后用嘧啶和N,O‑双三甲基硅基乙酰胺衍生化，用气相色谱‑质谱联用仪分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：衡伟，朱立武，王孟东，叶振风，贾兵，刘莉，刘普，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34