本发明专利技术提供了一种PRV抗体检测系统，该检测系统包被抗原为PRV的gB、gC和gD抗原中的任意两种或三种蛋白。该试剂盒具有种特异性和免疫原性的特点，检测率高，特异性强，较现有技术中的PRV抗体检测试剂盒阳性捡出率更高，更灵敏。本发明专利技术还提供了PRV抗体检测试剂盒的制备方法，该方法采用真核表达体系表达的蛋白抗原制备包被抗原，有效地降低了检测的背景值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种PRV抗体检测系统，该检测系统包被抗原为PRV的gB、gC和gD抗原中的任意两种或三种蛋白。该试剂盒具有种特异性和免疫原性的特点，检测率高，特异性强，较现有技术中的PRV抗体检测试剂盒阳性捡出率更高，更灵敏。本专利技术还提供了PRV抗体检测试剂盒的制备方法，该方法采用真核表达体系表达的蛋白抗原制备包被抗原，有效地降低了检测的背景值。【专利说明】PRV抗体检测系统及其制备方法
本专利技术属于兽用生物制品领域，具体地涉及一种检测PRV抗体的检测系统及其制 备方法。
技术介绍
伪狂犬病（Pseudorabies，PR)，又称Aujeszky氏病，是由伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus，PRV)引起的包括家畜和多种野生动物的一种以发热、奇痒及脑脊髓 炎为症状的高度接触性、急性传染病。猪是该病的天然宿主和储存者，不仅可引起妊娠母猪 的流产，甚至产死胎、弱胎和木乃伊胎，还可引发新生仔猪发热、神经症状，甚至衰竭死亡， 死亡率可达100%。自1902年首次在美国发现以来，猪伪狂犬病已在全球范围内流行，给世 界养猪业的健康发展造成了巨大的经济损失，成为严重危害养猪业健康发展的重大传染病 之一。 PRV属疱疹病毒科（Herpesviridae)a疱疹病毒亚科，为双链线形DNA，150kb左 右，目前已鉴定含11种糖蛋白：gB、gC、gD、gE、gG、gH、gl、gK、gL、gM、gN，大部分糖蛋白是 构成病毒囊膜的成分（郭广君.猪伪狂犬病病毒野毒与基因缺失疫苗株鉴别检测方法的建 立及应用.吉林大学博士学位论文）。 在伪狂犬病的防治工作中，监测和检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体的水平是非常 重要的一个环节。国际兽医局（InternationalEpizooticoffice, 0IE)推荐的检测方法包 括：血清中和试验（SN)和酶联免疫吸附试验（ELISA)等。ELISA是应用最为广泛的检测方 法，目前，国内市场上主要应用的是国外进口的以PRV全病毒、gB蛋白或gE蛋白为包被原 而制备的抗体检测试剂盒，其中，gB-ELISA仅检测gB抗体（邹浩勇，陈冬焕，熊金凤等.伪 狂犬病毒中和抗体与gB-ELISA抗体阻断率之间的相关性.猪业科学，2008, 5:94-96)。为 了加强对该病的疫情监测和流行病学调查，有必要研发出一种特异性强、敏感性高且价格 便宜的血清学检测试剂盒。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种猪伪狂犬病抗体检测试剂盒，该试 剂盒具有种特异性和免疫原性的特点，检测率高，特异性强。 本专利技术的第一方面在于提供一种PRV抗体检测系统，其中，所述检测系统包被抗 原为PRV的gB、gC和gD抗原中的任意两种或三种蛋白。 术语"猪伪狂犬病病毒抗原性蛋白"是指含有天然性猪伪狂犬病病毒的抗原性蛋 白，包括但不限于猪伪狂犬病病毒的gB蛋白、gC蛋白、gD蛋白，针对该抗原性蛋白产生的免 疫效应是所寻求的目的。 术语"猪伪狂犬病病毒"包括猪伪狂犬病病毒经典株和猪伪狂犬病病毒变异株， 所述猪伪狂犬病病毒变异株又称为高致病性猪伪狂犬毒株，是指表现为任何年龄的猪都会 感染，可在猪群水平传播，潜伏期短（1-2天），发病率在10% -100%之间，发病猪死亡率 在10% -100%之间（仔猪死亡率可高达100% )，感染后可引起猪只高热（40-42°C，持续 3日以上），呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起， 角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产（高达 35% )，早产，死胎，弱仔（弱仔14日龄前全部死亡）等繁殖障碍症状，优选地，所述的伪狂 犬变异株为经分离的所述猪伪狂犬病毒变异株当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免 疫了现有技术中基因缺失伪狂犬弱毒疫苗后依然会造成猪出现高热，精神沉郁，食欲下降 或废绝等症状的毒株。 术语"gB蛋白"又称gll蛋白，为猪伪狂犬病病毒的糖蛋白之一，其大小约2. 8kb， 编码913个氨基酸（包新奇，黄绍华，刘巧荣等.猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分 段表达.中国比较医学杂志，2012, 22 (3) : 12 - 16)。 术语"gC蛋白"又称gin蛋白，为猪伪狂犬病病毒的糖蛋白之一，编码约487个氨 基酸（王键义.猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息学分析.四川农业大学硕士学 位论文）。 术语"gD蛋白"又称gp50蛋白，为猪伪狂犬病病毒的糖蛋白之一，编码402个氨基 酸（王键义.猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息学分析.四川农业大学硕士学位 论文）。 作为本专利技术的一种实施方式，所述检测系统还包括酶标板、样品稀释液、洗涤液、 HRP标记的抗猪IgG、底物显色液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。 作为本专利技术的一种实施方式，所述PRV抗体检测系统为猪伪狂犬病抗体检测试剂 盒，所述检测试剂盒包括：包被猪伪狂犬病病毒抗原性蛋白的酶标板、样品稀释液、洗涤液、 HRP标记的抗猪IgG、底物显色液A、底物显色液B、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清 对照，其中所述猪伪狂犬病病毒抗原性蛋白包括猪伪狂犬病病毒gB蛋白、gC蛋白、gD蛋白 中的至少两种蛋白。 所述样品稀释液含有磷酸盐缓冲液、Tween-20、脱脂奶；进一步优选地，所述 Tween-20在所述样品稀释液中的体积比为0. 05% (V/V)，所述脱脂奶在所述样品稀释液中 的体积比为10% (V/V)。 术语"磷酸盐缓冲液"是指含有磷酸或其盐并被调至理想pH值的溶液，是生物化 学研究中使用最为广泛的一种缓冲液。一般地，磷酸盐缓冲液是从磷酸或磷酸盐（包括但 不限于钠和钾盐）制备的。本领域已经知道一些磷酸盐，例如磷酸二氢钠和磷酸二氢钾、磷 酸磷酸氢二钠和磷酸氢二钾、磷酸钠和磷酸钾。已经知道磷酸盐是以盐的水合物形式存在 的。由于缓冲液的二级解离作用，缓冲的pH值范围很宽，例如约pH4至约pHIO的范围，优 选约pH5至pH9的范围，更优选约pH6至约pH8的范围，最优选约pH7. 4。进一步优选地，所 述磷酸盐缓冲液为含氯化钠和氯化钾的磷酸盐缓冲液。 所述洗漆液含有磷酸盐缓冲液、Tween-20 ;进一步优选地，所述Tween-20在所述 样品洗涤液中的体积比为0.05% (V/V)。 所述底物显色液A液含有3,3〃，5,5〃_四甲基联苯胺（TMB)20mg、无水乙醇10ml， 然后用ddH20定容至100ml;所述底物显色液B含有柠檬酸2.lg、无水Na2HP042. 82g、0. 75% (W/V)的过氧化氢尿素0. 64ml，然后用ddH20定容至100ml。 所述终止液含有2MH2S04。 作为本专利技术的一种实施方式，所述的检测系统中所述gB、gC和gD抗原分别为序列 SEQIDNo. 2、SEQIDNo. 4 和SEQIDNo. 6 编码的蛋白；或分别为序列SEQIDNo. 8、SEQ IDNo. 10和SEQIDNo. 12编码的蛋白。 作为本专利技术的一种实施方式，所述的检测系统中所述gB、gC和gD本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种PRV抗体检测系统，其中，所述检测系统包被抗原为PRV的gB、gC和gD抗原中的任意两种或三种蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王莹，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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