抗-碳水化合物的抗体可通过以下方法检测：(a)使固定在基质上的低聚甘露糖-血清白蛋白缀合物的阵列与含有抗体的血清样品接触，接触条件为其中TM10抗体以至少微摩尔的亲和力结合所述缀合物的低聚甘露糖的条件；和(b)检测因而发生的所述样品的特定抗体与所述缀合物的低聚甘露糖的结合，作为所述抗碳水化合物的抗体的指示。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术是在国立卫生研究院授予的基金No.7U01CA128416-04的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有某些权利。相关申请的交叉引用本申请要求于2012年4月24日提交的美国申请No.61/637,674和于2013年2月1日提交的美国申请No.61/759,745的优先权，所述申请的公开内容以引用的形式全文纳入本文。
技术介绍
前列腺癌(PCa)是男性中最常见的非上皮性恶性肿瘤。根据尸检研究，大量美国男性在他们30多岁的时候已经在他们的前列腺中患有癌症；该频率在男性70多岁的时候上升到约80％。尽管PCa有如此高的发病率，但在美国只有8％的男性在他们的一生中表现出影响他们生活质量的临床重大疾病[Stamey et al.1993]，并且在美国所有男性中只有3％死于PCa[Ries 1994]。没有其他人类癌症在非常高的恶性肿瘤的微观发病率和相对较低的死亡率之间具有如此巨大的差异。例如，乳腺癌——主要的女性恶性肿瘤——在5年内具有15％的死亡率[DeSantis et al.2011a；DeSantis et al.2011b]，同时，肺癌——总体上第三大常见的恶性肿瘤——在5年内具有超过86％的死亡率[Bach et al.2004]。PCa的高发生率和相对较低的死亡率之间的这种显著差异已经促使本专利技术人提出以下疑问：1)是否存在实质上降低PCa的死亡率的宿主监视机制；2)是否能建立新的测定方法来检测PCa的高风险、高死亡率的状态以使得可以给予这些受试者有效的治疗以降低该疾病的死亡率；和3)是否存在在侵袭性癌症(aPCa)和其他临床无痛、非侵袭性癌症(iPCa)之间差异性表达的关键免疫学靶标。这类免疫原性要素的鉴定对于建立治疗和诊断策略来改善PCa患者的当前健康护理是重要的。本专利技术人的小组已经研究了PCa的潜在免疫原性碳水化合物部分。通过对凝集素结合到组织微阵列上的模式进行评估，本专利技术人观察到PCa中很多聚糖标志物的异常表达[Wang et al.2011]。这些标志物是N-聚糖的前体、核心和内部序列，例如低聚甘露糖、三触角II型(Galβ1→4GlcNAc)链(Tri-II)或多价II型链(m-II)[Wang 2012]。这些标志物的常见免疫学特征在于它们通常被其它糖部分遮盖，并且它们属于一类通常“隐性的(cryptic)”的糖表位。重要的是，它们的组织表达或曝光量在PCa的不同Gleason分级和肿瘤转移中看起来明显不同[Lange et al.2012；Wang et al.2011]。这具有潜在的临床意义，因为Gleason分级是确定性手术治疗或放射治疗后PCa的复发的最有效预测指标(predictor)。随后，本专利技术人在动物模型研究中发现基于肿瘤细胞的疫苗诱发了抗Man9-簇的抗体[Newsom-Davis et al.2009]。在这种情况下，Fas-配体转染的黑素瘤细胞被用于动物免疫接种。通过该免疫接种策略建立的单克隆抗体(mAb)TM10在流式细胞术分析中显示了独特的结合性质。TM10不与未转化的正常细胞的细胞表面结合但是强烈地结合许多小鼠和人肿瘤细胞系(包括来自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌的那些)。有趣的是，本专利技术人的碳水化合物微阵列分析显示TM10识别由(Man9)n-匙孔血蓝蛋白(KLH)和[(Man9)4]n-KLH所呈递的寡甘露糖基表位[Newsom-Davis et al.2009]。最初构建了这些糖缀合物以显示由mAb 2G12识别的HIV-1中和表位[Ni et al.2006]，但是在该研究中发现它们呈递所述肿瘤相关的TM10-抗原。通过使用碳水化合物微阵列，本专利技术人还研究了人免疫系统是否也识别这些肿瘤碳水化合物并引起(mount)抗体应答。本专利技术人分析了一组来自带有PCa的男性的血清(N＝17)，与来自带有良性前列腺增生(BPH)的男性的血清(N＝12)相比较。发现所述两个TM10-阳性的Man9-缀合物可高度有效地捕获来自这两个组的人血清IgG抗体。但是，在癌症组中捕获的抗体的水平显著高于在BPH组中检测的那些[Wang2012]。总的来说，这些发现表明所述肿瘤相关的TM10抗原在体内具有免疫原性。这些靶标的异常表达或暴露可以在癌症受试者中引发特异的自身抗体反应。本专利技术人使用根治性前列腺切除术样本和血清的斯坦福同龄组(cohort)将本专利技术人的调查扩展至更大规模的血清学研究。如下面所总结的，本专利技术人建立了ELISA以便能够高度特异性检测人血清中的抗Man9-簇的抗体(包括IgGMan9和MMan9)。本专利技术人还证实抗Man9-簇的抗体广泛存在于人体循环中，并且证实这些自身抗体的水平在其癌症含有大体积的Gleason分级4和/或5的男性中显著地增加。相关技术：本专利技术的方面公开为Wang et al.2012,J Proteomics&Bioinformatics(5:090-095,DOI:10.4172/jpb.1000218)和Wang et al.2013,Drug Development Research[14(2):65-80,DOI:10.1002/ddr.21063]。斯坦福专利US7,981,625。
技术实现思路
本专利技术提供了用于检测抗碳水化合物的抗体的材料、系统和方法。在一个方面，所述方法包括以下步骤：(a)使在基质上的低聚甘露糖-血清白蛋白缀合物的阵列与含抗体的血清样品接触，基础条件为其中TM10抗体以至少微摩尔的亲和力结合所述缀合物的低聚甘露糖的条件；和(b)检测由此产生的所述样品的特定抗体与所述缀合物的低聚甘露糖的结合，作为所述抗碳水化合物的抗体的指示。在另一方面，所述组合物为包含有序的、固定的低聚甘露糖-血清白蛋白缀合物的阵列的微阵列、微孔板(microwell plate)或相关基质，其中所述缀合物的低聚甘露糖以至少微摩尔的亲和力结合TM10抗体。在另一方面，本专利技术提供了用于通过检测抗碳水化合物的抗体如IgMan9和PSA来协同预测前列腺增生，特别是前列腺癌的临床结果的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使低聚甘露糖和前列腺特异性抗原(PSA)与患者样品中的抗体接触，接触条件为其中所述抗体特异性结合所述抗原的条件；和(b)检测由此产生的所述抗体与所述抗原的特异性结合，其中所述抗体的特异性结合可协同预测前列腺增生的临床结果。本专利技术包括具体的实施本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测抗‑碳水化合物的抗体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使固定在基质上的低聚甘露糖‑血清白蛋白缀合物的阵列与含抗体的血清样品接触，接触条件为其中TM10抗体以至少微摩尔的亲和力结合缀合物的低聚甘露糖的条件；(b)检测因而发生的所述样品的特定抗体与所述缀合物的低聚甘露糖的结合，作为所述抗碳水化合物的抗体的指示。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.24 US 61/637,674;2013.02.01 US 61/759,7451.一种用于检测抗-碳水化合物的抗体的方法，所述方法包括以下
步骤：
(a)使固定在基质上的低聚甘露糖-血清白蛋白缀合物的阵列与含
抗体的血清样品接触，接触条件为其中TM10抗体以至少微摩尔的亲和
力结合缀合物的低聚甘露糖的条件；
(b)检测因而发生的所述样品的特定抗体与所述缀合物的低聚甘
露糖的结合，作为所述抗碳水化合物的抗体的指示。
2.权利要求1的方法，其中所述血清白蛋白是HSA或BSA。
3.权利要求1的方法，其中所述低聚甘露糖是man5或man9。
4.权利要求1的方法，其中所述缀合物具有结构
(Man9GlcNAc2Asn)n-BSA或(Man5GlcNAc2Asn)n-BSA。
5.权利要求1的方法，其中所述阵列包含固定在所述基质的不同
位置上的man5和man9-血清白蛋白缀合物
6.权利要求1的方法，其中所述阵列还包含固定在所述基质的不
同位置上的ASOR、AGOR或OR。
7.权利要求1的方法，所述方法从人血清抗体的未经筛选的库中
选择性检测TM10样抗-Man9簇。
8.权利要求1的方法，其中所述样品来自患有前列腺发育异常的
人并且所产生的结合的量指示前列腺增生的状态。
9.权利要求1的方法，其中所述样品其中所述样品来自患有前列
腺发育异常的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王德农，
申请(专利权)人：思研SRI国际顾问与咨询公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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