用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，其包含：在所述固相载体中的竞争性分析物，其中所述竞争性分析物与结合对的第一元件偶联；所述固相载体中处于所述竞性争分析物下游的经标记的缀合物，其中所述分析物同所述竞争性分析物竞争结合所述缀合物；以及固定于所述固相载体中的、处于所述缀合物下游的捕获试剂，其中所述捕获试剂包含结合对的第二元件；其中选择固相载体中结合对的第一元件和第二元件彼此间的亲和力以及缀合物与捕获试剂之间的距离和/或缀合物与竞争性分析物之间的距离，以提高固相载体对分析物的阈值。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及分析物检测。更具体地，本专利技术涉及用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的固相载体和方法。 专利技术背景 一般而言，用于检测分析物的固相载体和方法具有提高灵敏度的目标，因为大多数分析物在样品中以非常低的水平存在，并且检测的临床相关阈值通常在ng/ml至低μ g/ml的范围。然而，某些分析物在样品中以高得多的量存在，并且临床相关阈值太高而不能使用常规方法直接检测。相反，检测这样的高浓度分析物的一般方法包括由最终使用者稀释样品。此外，许多常规方法不适于由最终使用者直接使用，并且相反样品必须被送至实验室用于测定最终结果。当分析物检测必须快速进行时，这种延迟是有问题的。 例如，新生小牛仅可通过从初乳中摄取免疫球蛋白(Ig)来获得对疾病的被动免疫。该初乳Ig的传递仅可能在小牛生命的约第一天内发生。在产后的约12小时后，以逐渐升高的速率自发发生小牛肠通透性的终止。Ig传递的量变化较大，并且已认识到，多至约40%的小牛未获得足够的被动免疫。在那些小牛中所得到的低Ig浓度与高发病率和死亡率有关。然而，无论它们是否需要免疫转移，小牛中存在的Ig的量都非常高，处于mg/ml范围，并因此超出了常规方法直接检测的范围。 因此，需要减轻和/或克服现有技术的至少一种缺陷。 专利技术概述 在一些方面，本专利技术涉及用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体和一步式方法。本文描述的固相载体和方法可用于检测阈值处于mg/ml范围的样品中的分析物。因此，这样的固相载体和方法可用于鉴定在出生后短时间内需要免疫系统传递的新生小牛或其他哺乳动物。 根据一个方面，提供了用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，所述固相载体包含: -在所述固相载体中的竞争性分析物，其中所述竞争性分析物与结合对的第一元件偶联； -所述固相载体中处于所述竞性争分析物下游的经标记的缀合物，其中所述分析物同所述竞争性分析物竞争结合所述缀合物；以及 -固定于所述固相载体中的、处于所述缀合物下游的捕获试剂，其中所述捕获试剂包含所述结合对的第二元件； 其中选择所述固相载体中所述结合对的所述第一元件和所述第二元件彼此间的亲和力，以及所述缀合物与所述捕获试剂之间的距离，和/或所述缀合物与所述竞争性分析物之间的距离，以提高所述固相载体对所述分析物的阈值。 在一个方面，如权利要求1所述的固相载体，其中所述分析物是免疫球蛋白，例如IgG0 在一个方面，所述缀合物是对所述分析物具有特异性的抗体。 在一个方面，所述结合对的所述第一元件是生物素，并且所述结合对的所述第二元件是抗生物素蛋白链菌素或抗生物素蛋白。 在一个方面，所述样品是选自全血、血清、血浆、尿、乳和初乳的生物样品。 在一个方面，所述预定阈值为至少约lmg/ml、3mg/ml、5mg/ml、1mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml 或 50mg/mlo 在一个方面，所述固相载体还包含所述竞争性分析物上游的封闭捕获试剂。 根据另一个方面，提供了用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，所述固相载体包含: -固定于所述固相载体中的封闭捕获试剂，其中所述封闭捕获试剂与所述样品中的所述分析物结合，并从而降低可移动的所述分析物的浓度； -所述固相载体中的、处于所述封闭捕获试剂下游的经标记的缀合物；以及 -固定于所述固相载体中的、处于所述缀合物下游的捕获试剂，其中所述捕获试剂是竞争性分析物，并且其中所述分析物同所述竞争性分析物竞争结合所述缀合物； 其中选择所述固相载体中所述缀合物与所述捕获试剂之间的距离，以提高所述固相载体对所述分析物的阈值。 根据另一个方面，提供了用于检测样品中分析物的一步式方法，所述方法包括将所述样品施加至本文所述的固相载体，其中阳性信号表示所述分析物不存在，或者以低于预定阈值的量存在。 根据另一个方面，提供了用于确定新生哺乳动物是否需要免疫转移的一步式方法，所述方法包括将来自所述新生哺乳动物或其母体的生物样品施加至固相载体，所述固相载体包含: -与结合对的第一元件偶联的哺乳动物IgG； -所述哺乳动物IgG下游的经标记的抗哺乳动物IgG抗体；以及 -所述抗哺乳动物IgG下游的所述结合对的第二元件； 其中选择所述结合对的所述第一元件和所述第二元件彼此间的亲和力，以及所述抗哺乳动物IgG抗体与所述结合对的所述第二元件之间的距离，和/或所述抗哺乳动物IgG与所述哺乳动物IgG之间的距离，以使得当所述哺乳动物具有处于或低于mg/ml范围内的预定阈值时产生阳性信号，指示所述哺乳动物需要免疫转移。 在一个方面，所述结合对的所述第一元件是生物素，并且所述结合对的所述第二元件是抗生物素蛋白链菌素或抗生物素蛋白。 在一个方面，所述样品来源于所述新生哺乳动物，并且选自全血、血清、血浆和尿。 在一个方面，所述样品来源于所述新生哺乳动物的母体，并且选自乳和初乳。 在一个方面，所述哺乳动物是牛、马、羊驼或无峰驼。 在一个方面，所述预定阈值为约10mg/ml。 本专利技术的其他特征和优点将从下文的详细描述中变得显而易见。但是，应理解，详述和具体实例在表示本专利技术实施方案的同时，仅以解释说明的方式给出，因为对本领域技术人员来说，本专利技术精神和范围内的多种改变和修饰都将从所述详述中变得显而易见。 【附图说明】 本专利技术将通过下文的描述以及参考附图而得到进一步的理解，其中: 图1示出了如本文描述的固相载体第一方面的示意图；并且 图2示出了如本文描述的固相载体第二方面的示意图。 专利技术详述 常规的固相载体测定已被进行了优化以提高其灵敏度，从而降低样品中存在的分析物的检测阈值。这是因为大多数分析物的临床相关阈值水平十分低，例如在μ g/mi的范围内或者更低。因此，这样的常规固相载体测定在用于鉴定样品中以较高量存在的分析物的阈值水平的一步式方法中不是直接可用的，其中这样的分析物的临床相关阈值水平要高得多，例如处于mg/ml的范围内。 当使用常规固相载体测定来检测以较高量存在于样品中的分析物时，在将样品施加至固相载体之前通常需要进行样品稀释。“稀释”是指在施用于固相载体测定之前用合适的稀释剂稀释例如血液或尿样品，并且不原样使用直接来自身体的样品。因此，由于需要进行样品稀释，这样的测量不视为“一步式”测定。样品稀释可导致若干问题，至少包括由于对样品的不适当稀释而导致的样品污染和测试结果不准确。此外，样品的稀释需要最终使用者进行计算和测量，这也可导致测试结果不准确。 特别地，常规固相载体测定的高灵敏度已经成为快速鉴定需要免疫转移的新生小牛方面的问题。这样的小牛必需尽快得到鉴定，因为免疫转移可有效进行的时间窗十分有限。此外，新生小牛的血液中一般存在mg/ml范围的牛IgG，其中将小牛分成需要免疫转移的小牛(IgG低于10mg/ml的小牛)和不需要免疫转移的小牛(IgG为10mg/ml或更高的小牛)的阈值为约10mg/ml IgG。过去难以找到可“在牛旁边”以一步式方式进行的而无需进行样品稀释的测试来提供快速和准确的测试结果，从而确定哪些本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，所述固相载体包含：‑所述固相载体中的竞争性分析物，其中所述竞争性分析物与结合对的第一元件偶联；‑所述固相载体中的、处于所述竞争性分析物下游的经标记的缀合物，其中所述分析物同所述竞争性分析物竞争结合所述缀合物；以及‑固定于所述固相载体中的、处于所述缀合物下游的捕获试剂，其中所述捕获试剂包含所述结合对的第二元件；其中选择所述固相载体中所述结合对的所述第一元件和所述第二元件彼此间的亲和力，以及所述缀合物与所述捕获试剂之间的距离和/或所述缀合物与所述竞争性分析物之间的距离，以提高所述固相载体对所述分析物的阈值。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.20 US 61/636,0661.用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，所述固相载体包含: -所述固相载体中的竞争性分析物，其中所述竞争性分析物与结合对的第一元件偶联； -所述固相载体中的、处于所述竞争性分析物下游的经标记的缀合物，其中所述分析物同所述竞争性分析物竞争结合所述缀合物；以及 -固定于所述固相载体中的、处于所述缀合物下游的捕获试剂，其中所述捕获试剂包含所述结合对的第二元件； 其中选择所述固相载体中所述结合对的所述第一元件和所述第二元件彼此间的亲和力，以及所述缀合物与所述捕获试剂之间的距离和/或所述缀合物与所述竞争性分析物之间的距离，以提高所述固相载体对所述分析物的阈值。2.如权利要求1所述的固相载体，其中所述分析物是免疫球蛋白。3.如权利要求2所述的固相载体，其中所述免疫球蛋白是IgG。4.如权利要求1至3中任一项所述的固相载体，其中所述缀合物是对所述分析物具有特异性的抗体。5.如权利要求1至4中任一项所述的固相载体，其中所述结合对的所述第一元件是生物素，并且所述结合对的所述第二元件是抗生物素蛋白链菌素或抗生物素蛋白。6.如权利要求1至5中任一项所述的固相载体，其中所述样品是选自全血、血清、血浆、尿、乳和初乳的生物样品。7.如权利要求1至6中任一项所述的固相载体,其中所述预定阈值为至少约lmg/ml、3mg/ml、5mg/ml、1mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml 或 50mg/ml。8.如权利要求1至7中任一项所述的固相载体，其还包含所述竞争性分析物上游的封闭捕获试剂。9.用于检测样品中处于预定阈值或高于预定阈值的分析物的存在的固相载体，所述固相载体包含: -固定于所述固相载体中的封闭捕获试剂，其中所述封闭捕获试剂能与所述样品中的所述分析物结合，并从而降低可移...
【专利技术属性】
技术研发人员：史沁卫，徐静，
申请(专利权)人：ZBX公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA
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