一种肽核酸化合物及其制备方法技术

本发明专利技术属于肽核酸领域，公开了一种肽核酸化合物，所述的肽核酸化合物的碱基序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’。所述的一种肽核酸化合物的制备方法，包括下述步骤：（1）将氨基保护的肽核酸单体接到固相载体上；（2）脱除保护基使氨基游离出来；（3）下一个氨基保护的肽核酸单体与载体上的肽核酸的氨基偶合反应生成肽键；（4）重复上述步骤至肽核酸序列合成完成，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；（5）将肽核酸序列从固相载体上列接下来，并脱除所有侧链保护基；（6）将上述产物经过凝胶柱分离和反向HPLC纯化，得到最终产物。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于肽核酸领域，公开了一种肽核酸化合物，所述的肽核酸化合物的碱基序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’。所述的一种肽核酸化合物的制备方法，包括下述步骤：（1）将氨基保护的肽核酸单体接到固相载体上；（2）脱除保护基使氨基游离出来；（3）下一个氨基保护的肽核酸单体与载体上的肽核酸的氨基偶合反应生成肽键；（4）重复上述步骤至肽核酸序列合成完成，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；（5）将肽核酸序列从固相载体上列接下来，并脱除所有侧链保护基；（6）将上述产物经过凝胶柱分离和反向HPLC纯化，得到最终产物。【专利说明】
本专利技术属于化学合成领域，涉及，具体是涉及一 种具有抑制黑色素生成效果的肽核酸化合物及其制备方法。
技术介绍
酪氨酸酶在人体黑色素形成过程中起着关键作用，黑色素细胞内的酪氨酸在酪氨 酸酶的作用下转换为多巴，并进一步氧化为多巴醌，多巴醌经过一系列中间产物最终形成 真黑色素。通过减少酪氨酸酶的生成或抑制酪氨酸酶的活性实现抑制黑色素生成的效果在 皮肤病防治、肿瘤治疗以及美容领域都有着重要的意义。近年来随着分子生物学的发展基 因干扰技术为减少酪氨酸酶生成提供了一条可行的途径，其原理是根据碱基互补配对特性 将与酪氨酸酶基因片段互补的RNA或肽核酸（PNA)序列引入黑色素细胞，通过引入序列与 目标基因片段的特异性结合阻碍酪氨酸酶基因的表达，从而实现减少酪氨酸酶生成进而减 少黑色素生成的效果。 目前所用的干扰序列有RNA和PNA，其中PNA以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键 取代了 DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，不仅可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并 结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构，又由于其不带负电荷，与DNA和RNA之间不 存在静电斥力，结合的稳定性和特异性都大为提高，成为基因干扰治疗中更加安全高效的 手段。
技术实现思路
要解决的技术问题：本专利技术提出了一种肽核酸化合物TDS的制备方法及应用，它 与黑色素细胞序列中酪氨酸酶的基因序列片段互补，并且与酪氨酸酶基因以外的任何人类 已知基因序列无同源性，TDS通过与酪氨酸酶的特异结合达到抑制酪氨酸酶和黑色素生成 的效果。 技术方案：本专利技术公开了 一种肽核酸化合物，其碱基序列为 5' -CACTTACTGGGATAGCGG-3'，记为 TDS。 该肽核酸化合物通过以下四种肽核酸单体合成： 【权利要求】1. 一种肽核酸化合物，其特征在于，所述的肽核酸化合物的碱基序列为 5, -CACTTACTGGGATAGCGG-3，。2. 根据权利要求1所述的一种肽核酸化合物，其特征在于所述的肽核酸化合物由单 体构成，所述的单体用下列通式表示：G为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶四种碱基中的一种。3. 根据权利要求1所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括 下述步骤：（1)将氨基保护的肽核酸单体接到固相载体上； (2) 脱除保护基使氨基游离出来； (3) 下一个氨基保护的肽核酸单体与载体上的肽核酸的氨基偶合反应生成肽键； (4) 重复上述步骤至肽核酸序列合成完成，序列为5' -CACTTACTGGGATAGCGG-3' ； (5) 将肽核酸序列从固相载体上列接下来，并脱除所有侧链保护基； (6) 将上述产物经过凝胶柱分离和反向HPLC纯化，得到最终产物。4. 根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括 下述步骤： (1) 称取固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C，HOBt，DCC，DCM，DMF， 室温下搅拌，以DCM和NMP交替洗涤后以TFA/DCM溶液脱保护后用DCM和NMP交替洗涤树 脂； (2) 重复上述操作，将目标PNA序列中的单体按从5'到3'的顺序依次接入，序列为 5, -CACTTACTGGGATAGCGG-3,； (3) 在反应器中缓慢加入TFA/TIS/H20=95/2. 5/2. 5 (重量比）的溶液，反应后过滤并用 氮气吹去大部分的溶剂，先后用无水乙醚和30%乙酸水溶液洗涤，再用1. 5:1的乙腈/水和 30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压蒸馏后冷冻干燥得到粗产物； (4) 将粗产物溶于0. 5mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，，收集淋洗曲 线第一个主峰处的产物，冷冻干燥； (5) 粗产物经HPLC纯化，经过HPLC纯化后得到最终产品。5. 根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括 下述步骤： (1) 称取IOOmg固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C50mg，HOBt 34mg，DCC51mg，DCM3mL，DMF0. 5mL，室温下搅拌3h，以DCM和NMP交替洗涤后以25%的 TFA/DCM溶液脱保护30分钟后用DCM和NMP交替洗涤树脂； (2) 重复上述操作，将目标PNA序列中的单体按从5'到3'的顺序依次接入，序列为 5, -CACTTACTGGGATAGCGG-3,； (3) 在反应器中缓慢加入TFA/TIS/H20=95/2. 5/2. 5的溶液，反应3小时后过滤并用氮 气吹去大部分的溶剂，先后用无水乙醚和30%乙酸水溶液和洗涤，再用1. 5:1的乙腈/水和 30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压蒸馏后冷冻干燥得到粗产物； (4) 将粗产物溶于2-3毫升0. 5mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，淋洗 液为0. 5mol/L乙酸溶液，流速为lml/min，收集淋洗曲线第一个主峰处的产物，冷冻干燥； (5) 粗产物经HPLC纯化，色谱柱为C18柱，流动相为：A:0. 1%TFA/H20,B: 70%CH3CN/0. 1%TFA/H20，流速为lmL/min，经过HPLC纯化后得到最终产品。6.根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括 下述步骤：（1)称取150mg固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C 50mg， HOBt34mg，DCC 51mg，DCM 3mL，DMF 0. 5mL，40摄氏度下搅拌lh，以DCM和NMP交替洗涤后 以25%的TFA/DCM溶液脱保护30分钟后用DCM和NMP交替洗涤树脂； (2) 重复上述操作，将目标PNA序列中的单体按从5'到3'的顺序依次接入，序列为 5, -CACTTACTGGGATAGCGG-3,； (3) 将反应后的树脂放入氟化氢裂解仪中，加入1滴苯甲醚，将裂解仪抽真空并冷却， 加入2mL液态氟化氢，-5°C反应2小时，使用油泵抽除未反应的氟化氢；先后用无水乙醚和 30%乙酸水溶液和洗涤，再用1. 5:1的乙腈/水和30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压 蒸馏后冷冻干燥得到粗产物； (4) 将粗产物溶于2毫升0. 5mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，淋洗液 为0. 5mol/L乙酸溶液，流速为lmL/min，收集淋洗曲线第一个主峰处的产物，冷冻干燥； (5 )粗产物经HPLC纯化得到最终产品。【文档编号】C07K14/00GK本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽核酸化合物，其特征在于，所述的肽核酸化合物的碱基序列为5’‑CACTTACTGGGATAGCGG‑3’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李子寅，凌静，凌天阳，
申请(专利权)人：苏州维泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32