一种铜绿假单胞菌菌剂和鼠李糖脂发酵液的制备方法技术

本发明专利技术属于石油生物技术和环境生物技术领域，具体地说，它涉及一种铜绿假单胞菌菌剂和鼠李糖脂发酵液的制备方法。将扩培好的铜绿假单胞菌种子液按照体积比2％-8％的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元素，并调节发酵培养基的pH值，进行通气、搅拌发酵，得到铜绿假单胞菌菌剂或鼠李糖脂发酵液。采用本发明专利技术方法制备的铜绿假单胞菌菌剂和鼠李糖脂发酵液可以很好地适应油藏环境，同时具有较好的驱油效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于石油生物技术和环境生物
，具体地说，它涉及，该菌剂及发酵液能很好地适应油藏环境，同时具有较好的驱油效果，另外鼠李糖脂发酵液也可用于鼠李糖脂的其他应用。
技术介绍
石油经降解菌(hydrocarbon degradat1n bacteria, HDB)是能将石油经作为唯一碳源进行生物降解，并产生气体、脂肪酸及生物表面活性剂等代谢产物的一类微生物的总称。石油烃降解菌能清除石油中的部分石蜡，代谢产物主要是有机酸、糖脂类、脂肽类表面活性剂，可进一步改善原有的流动性，降低油水之间的界面张力，有利于提高石油采出率。 铜绿假单胞菌(Pseudomonoas aeruginosa)是一种油藏中常见的、能以原油为唯一碳源大量合成表面活性剂鼠李糖脂的烃降解菌，已被广泛应用于现场采油、原油污染物降解，取得了一定的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种铜绿假单胞菌菌剂的制备方法，该菌剂适用于油藏环境，且具有高产生物表面活性剂的能力，用于油藏环境原位降解原油、改变原油流动性具有独特效果。 本专利技术的另一个目的在于提供一种鼠李糖脂发酵液的制备方法，该发酵液既可以油藏环境原位降解原油、改变原油流动性，同时用于鼠李糖脂的其他应用。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的: —种铜绿假单胞菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤: Al.将扩培后的种子液按照体积比为2% -8%的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元素，并调节发酵培养基的PH值； A2.进行通气、搅拌发酵。 根据权利要求1所述的制备铜绿假单胞菌菌剂的方法，其特征在于所述步骤A中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 糖蜜0.5% -1.0%，酵母膏 0.1 % -0.5%，大豆油 0.1 % -0.5 %，磷酸氢二钾0.1% -0.5% ;余量为水；发酵培养基pH = 7.0-7.4。 一种鼠李糖脂发酵液的制备方法，其特征在于包括如下步骤: B1.将扩培后的种子液按照体积比为2% -8%的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元素，并调节发酵培养基的PH值； B2.进行通气、搅拌发酵； 根据权利要求3所述的制备鼠李糖脂发酵液的方法，其特征在于所述步骤A中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 大豆油2% _4%，玉米浆干粉0.5% _1.0%，磷酸氢二钾0.1% -0.5%，磷酸二氢钾0.1% -0.5%，硫酸镁0.01% -0.05% ;余量为水；发酵培养基pH = 7.0-7.4。 根据权利要求1、3所述的制备鼠李糖脂发酵液的方法，其特征在于所述步骤中的扩培过程包括: Cl.将斜面菌种制成摇瓶种子； C2.将摇瓶种子制成一级种子； C3.将一级种子制成二级种子，将二级种子接入发酵罐培养基进行发酵。 一种微生物菌剂用于提高原油采收率的应用，其特征在于所述微生物为铜绿假单胞菌。 一种鼠李糖脂发酵液用于提高原油采收率的应用。 【具体实施方式】本专利技术所述的实例是对本专利技术的说明而不能限制本专利技术，在与本专利技术相当的含义和范围内的任何改变和调整，都应认为是在本专利技术的范围内。下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1铜绿假单胞菌液体菌剂的制备本实施例中，利用本专利技术的铜绿假单胞菌发酵制备液体菌剂，其具体发酵培养步骤如下:A.菌种接入摇瓶培养，温度为37°C，180-200r/min，培养12_16h，得到摇瓶菌种；B.一级发酵培养:将A步骤中的摇瓶菌种按照5% -10%的接种量接种至装有培养基的一级发酵罐中，温度为37±2°C、pH7.0-7.5、通气比为1: 0.5及搅拌速度为150_180r/min的条件下发酵培养12-18h，得到一级发酵菌种；C.二级发酵培养:将B步骤中的一级发酵菌种按照5% -10%的接种量接种至装有培养基的二级发酵罐中，温度为37±2°C、PH7.0-7.5、通气比为1: 0.5及搅拌速度为150-180r/min的条件下发酵培养12_18h，得到二级发酵菌种；D.发酵培养:将C步骤中的二级发酵菌种按照5%-10%的接种量接种至装有培养基的三级发酵罐中，温度为37±2°C、pH7.0-7.5、通气比为1: 0.5及搅拌速度为150_180r/min的条件下发酵培养24-36h，得到铜绿假单胞菌菌液；所述步骤A中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 蛋白胨0.5% -1.0%，酵母膏0.1% -0.5%，氯化钠0.5% -1.0%;余量为水；发酵培养基 pH = 7.0-7.4。所述步骤B、C、D中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 糖蜜0.5 % -1.0 %，酵母膏0.1 % -0.5 %，大豆油0.1 % -0.5 %，磷酸氢二钾0.1% -0.5% ;余量为水；发酵培养基pH = 7.0-7.4。经检测，发酵结束发酵液中铜绿假单胞菌菌浓为5.8X 101(lCfu/mL。实施例2鼠李糖脂发酵液的制备本实施例与实施例1的区别在于: 所述步骤B、C、D中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 大豆油2 % -4 %，玉米浆干粉0.5 % -1.0 %，磷酸氢二钾0.1 % -0.5 %，磷酸二氢钾 0.1% -0.5%，硫酸镁0.01% -0.05% ;余量为水;发酵培养基pH = 7.0-7.4。所述步骤D中的发酵条件为:发酵0h-24h温度为37±2°C、发酵24h以后温度为34±2°C、pH7.0-7.5、通气比为I: 0.5及搅拌速度为100-180r/min的条件下发酵培养72h-108h，得到鼠李糖脂发酵液。经检测，发酵结束发酵液中鼠李糖脂浓度为45g/L。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铜绿假单胞菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤： A.将扩培后的种子液按照体积比为2％‑8％的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元素，并调节发酵培养基的pH值； B.进行通气、搅拌发酵。

【技术特征摘要】
1.一种铜绿假单胞菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤: 八.将扩培后的种子液按照体积比为2% -8%的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元素，并调节发酵培养基的1)?值； 8.进行通气、搅拌发酵。2.根据权利要求1所述的制备铜绿假单胞菌菌剂的方法，其特征在于所述步骤八中的发酵培养基由以下质量百分数的组分组成: 糖蜜0.5 % -1.0 %，酵母膏0.1 % -0.5 %，大豆油0.1 % -0.5 %，磷酸氢二钾0.1% -0.5% ；余量为水；发酵培养基邱=7.0-7.4。3.一种鼠李糖脂发酵液的制备方法，其特征在于包括如下步骤: 八.将扩培后的种子液按照体积比为2% -8%的接种量转接至灭菌后的发酵罐培养基中，发酵培养基中含有必要的碳源、氮源、无机盐及微量元...

【专利技术属性】
技术研发人员：章厚名，卢彦珍，陈亮，徐真，
申请(专利权)人：北京华纳斯科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11