铜绿假单胞菌株，其保藏号为CCTCC M 2015272。本发明专利技术还提供铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272在合成糖脂类生物表面活性剂中的应用以及利用铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成糖脂类生物表面活性剂的方法。本发明专利技术的有益效果为：1.本发明专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272能够用于合成糖脂类生物表面活性剂，并且本发明专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272的糖脂类生物表面活性剂的产量远远高于现有铜绿假单胞菌株的糖脂类生物表面活性剂的产量；2.本发明专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成所得的糖脂类生物表面活性剂相比于现有铜绿假单胞菌株合成所得的糖脂类生物表面活性剂，其对温度的耐受性更强，并且对pH有更广泛的适应性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物的开发和应用领域，具体地说涉及一种铜绿假单胞菌株及其应 用。
技术介绍
生物表面活性剂（Biosurfactants)是微生物在代谢过程中分泌的具有表面活 性，同时含有亲水基和疏水基的两性化合物，包括糖脂、脂肽、脂蛋白、磷脂以及中性类脂衍 生物等。与化学合成的表面活性剂相比，生物表面活性剂有许多明显的优势：（1)低临界胶 束浓度和高表界面活性；（2)对离子强度的稳定性；（3)较高的生物降解性和低毒性；(4) 逐步吸附和持久的活性；（5)优良的破乳性能。目前，石油污染是世界各国面临的一个突出 的环境难题，各国都在研宄如何运用生物修复技术进行石油污染土壤的修复，而生物表面 活性剂的应用是生物修复的一个关键因素。 但是目前合成生物表面活性剂的主要问题在于产量过低，提取纯化费用过高，生 物表面活性剂的成本比化学表面活性剂的成本高3 -10倍。因此降低生产成本、选育生物 表面活性剂的高产菌株、优化发酵培养条件以及开发经济有效的回收工艺，是目前研宄的 重点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够合成得到高产量、高质量的糖脂类生 物表面活性剂的铜绿假单胞菌株。 为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种从辽宁省盘锦市辽河某油田受污染土壤 中筛选出的铜绿假单胞菌株，该菌株的保藏号为：CCTCCM2015272,保藏日期为2015年5 月4日，中文名（拉丁文学名）为铜绿假单胞菌株（Pseudomonasaeruginosa)，保藏单位为 中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉大学校内。 本专利技术还提供铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272在合成糖脂类生物表面活性剂中 的应用。 本专利技术还提供利用铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成糖脂类生物表面活性剂 的方法，包括以下步骤：将保藏号为CCTCC M 2015272的铜绿假单胞菌株接种至种子培养 基中，于30-35°C、120-150r/min的发酵条件下恒温振荡培养1-2天，然后以5-10%的 接种量接种于发酵培养基中，于相同的发酵条件下恒温振荡培养5- 7天，最后通过沉淀法 或溶剂萃取法从发酵液中提取出糖脂类生物表面活性剂； 所述种子培养基为牛肉膏液体培养基，所述发酵培养基为葡萄糖液体培养基。 进一步的，所述牛肉膏液体培养基的组成为：每1000毫升水中含有3.0克牛肉膏、 1. 0 克NaN03、l. 0 克（NH4)2S04、1. 2 克Na2HP04 ? 12H20、1. 0 克KH2P04、0. 01 克MgS04 ? 7H20 和 0? 002 克CaCl2; 所述葡萄糖液体培养基的组成为：每5毫升微量元素溶液中含有35. 0克葡萄糖、 4. 0 克NaN03、1. 1 克KC1、4. 0 克NaCl、0. 028 克FeS04.7H20、1. 5 克KH2P04、1. 5 克K2HP04、0. 5 克MgS04 ? 7H20和0. 5克酵母粉； 其中微量元素溶液的组成为：每1000毫升水中含有〇. 029克ZnS04、0. 024克 CaCl2、0. 025 克CuS04和 0? 017 克MgSO4。 上述配方的培养基能够为铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272提供良好的生长营养 和环境，有利于降低合成周期，并提高糖脂类生物表面活性剂的产量。 本专利技术的有益效果为： 1.本专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272能够用于合成糖脂类生物表面活性剂， 并且本专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272的糖脂类生物表面活性剂的产量远远高于现 有铜绿假单胞菌株的糖脂类生物表面活性剂的产量； 2.本专利技术铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成所得的糖脂类生物表面活性剂相 比于现有铜绿假单胞菌株合成所得的糖脂类生物表面活性剂，其对温度的耐受性更强，并 且对pH有更广泛的适应性。 3.本专利技术提供的利用铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成糖脂类生物表面活性 剂的方法工艺简单、周期短、易于实施，适用于工业化大规模生产。【附图说明】图1是本专利技术实施例1筛选所得菌株的系统发育树图。 图2是铜绿假单胞菌株CCTCCM2015272合成所得的生物表面活性剂的红外吸收光 谱图。【具体实施方式】 下面结合附图、实施例对本专利技术作进一步描述： 实施例1 铜绿假单胞菌株的筛选及鉴定，包括以下步骤： 实验材料：富集培养基：NaCl3. 0g，NH4C1 0?lg，MgS04 ? 7H20 0? 02g，NaN030. 2g，KH2P040.lg， K2HP040. 2g，原油 3. 0g，蒸馏水 1000mL。油平板培养基：蛋白胨 5. 0g，NaCl3. 0g，NH4C1 0?lg，MgS04 ? 7H20 0? 02g， NaN030 . 2g，KH2P040.lg，K2HP040. 2g，琼脂20. 0g。灭菌后倒平板，在其表面涂布一层经石油 醚稀释的原油。种子培养基：牛肉膏 3. 0g，NaN03l. 0g，（NH4)2S041. 0g，Na2HP04 ? 12H20 1. 2g， KH2P041. 0g，MgS04 ? 7H20 0? 01g，CaCl20. 002g，蒸馏水 1000mL〇发酵培养基：葡萄糖 35. 0g，NaN034. 0g，KC1 1.lg，NaCl4. 0g，FeS04 ? 7H20 0? 028g，KH2P041. 5g，K2HP041. 5g，MgS04 ? 7H20 0? 5g，酵母粉 0? 5g，微量元素溶液 5mL。微量元素溶液：ZnS040 . 0 29g，CaCl20. 024g，CuS040. 025g，MgS040. 017g，蒸馏水 lOOOrnL。1. 1初筛 称取土样（采集于辽宁省盘锦市辽河某油田受污染土壤）10g，加入90mL无菌水， 150r/min摇床振荡2h，静置30min后取上清液lOmL接种到装有90mL富集培养基的摇瓶 中，于30°C、120r/min的恒温摇床中振荡培养，3d后取培养液转接至富集培养基中，在同样 条件下进行二次培养。取二次培养的培养液lmL，用无菌水进行梯度稀释，取不同浓度梯度 的富集培养液涂布于油平板培养基，于30°C培养箱中培养24h后挑取有较大排油圈的单菌 落，进一步分离纯化，得到初筛菌株。 1. 2复筛 将初筛菌株接种至种子培养基中，于30°C、120r/min恒温摇床中振荡培养ld，然 后以5%的接种量接种于发酵培养基中，于同样条件下培养3d。取一加有20mL水的培养皿， 在水面上加O.lmL石蜡油（加适量苏丹红染色）形成红色油膜，在油膜中心滴入摇瓶发酵 液，测量排油圈直径大小，直径大于3cm的菌株保留做进一步研宄。同时，测定发酵液的表 面张力，筛选出产生物表面活性剂的优势菌种。 1.3表面张力测定 将发酵液过滤除油，12000r/min离心20min，取上清液，采用Auto-tensiometer QBZY-1表界面张力仪铂金板法测定表面张力。 L4菌株鉴定 由上海生物工程技术服务有限公司对上述筛选得到的菌株进行16S rRNA测序，将 所测序列在GenBank核酸序列数据库中与已有的其他16S rRNA序列数据进行相本文档来自技高网...
【技术保护点】
铜绿假单胞菌株，其保藏号为CCTCC M 2015272。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴涓，左珊珊，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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