【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种循环肿瘤细胞的富集、分析方法。
技术介绍
目前认为，肿瘤微转移灶起源于侵入循环中的肿瘤细胞，因此，循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)可能是肿瘤远处转移的一种标志。近年来，随着分子技术的发展，使得分离、计数外周血CTCs成为可能。在疾病早期阶段，CTCs可能有助于良、恶性肿瘤的鉴别，转移风险的预测和判断。在疾病进展期，CTCs或许可以提供重要的预后信息，以及帮助医生监测治疗效果。而且，CTCs可能反映肿瘤特征，能够指导治疗方案的制定，并且可以作为靶向治疗的靶标。 现有的CTCs富集方法通常是基于CTCs的表面标志物，如免疫磁性分选法，或CTCs的物理性质（密度和大小），如梯度离心法。其中，基于免疫磁珠的CellRearch是一种半自动化的CTCs检测仪器，该方法针对CTCs表面的标志物进行正向富集，2004年已被美国FDA批准用于预测乳腺癌患者的无病生存期和总生存期，但由于CTCs在体内生长过程中会出现丢失上皮细胞黏附因子表面抗原等CTCs表面标志物的现象，不能富集该部分CTCs细胞，在实际使用的局限性较大。 密度梯度离心法的具有简单、廉价、快速等优点，但分离的肿瘤细胞不纯，分离效率不高，有相当一部分肿瘤细胞丢失，在实际应用仍有很大局限。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种富集循环肿瘤细胞的方法，该方法可以很...
【技术保护点】
一种循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，主要包括以下步骤：1）对生物体液样本进行红细胞裂解处理以去除红细胞；2）加入与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的免疫微珠进行孵育以去除白细胞、血小板及残余的红细胞。
【技术特征摘要】
1.一种循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
1）对生物体液样本进行红细胞裂解处理以去除红细胞；
2）加入与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的免疫微珠进行孵育以去除
白细胞、血小板及残余的红细胞。
2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，还包括：
3）将去除白细胞、红细胞后的细胞悬液在滤膜上进行过滤，得到富集循环肿
瘤细胞的滤膜。
3.根据权利要求2所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述滤膜孔
径为5～8um，选自聚碳酸酯滤膜、纤维滤膜、尼龙滤膜、或塑料薄膜。
4.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，所述的免疫微珠上共价或
非共价偶联有与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的抗体。
5.根据权利要求4所述的循环肿瘤细胞的富集方法，所述的免疫微珠上偶联的
抗体选自CD2、CD15、CD16、CD19、CD33、CD41、CD45、CD35、CD235a
中的两种或以上。
6.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，使用红细胞
裂解液对生物体液样本进行红细胞裂解处理，所述红细胞裂解液包括有以下
浓度的组份：0.1M～0.5M氯化铵、0.001M～0.2M碳酸氢钾、0.001～0.05M
乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
7.根据权利要求6所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述红细胞
裂解液包括有以下浓度的组份：0.3M～0.32M氯化铵、0.018M～0.022M碳酸
氢钾、0.003～0.005M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
8.根据权利要求7所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述的红细
胞裂解液还包括有0.01%～0.2%的甲醛。
9.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述免疫微
珠由抗体与微珠表面进行共价或非共价偶联而成，所述微珠的直径介于10纳
米-100微米。
10.根据权利要求9所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述微珠
为磁性或非磁性。
11.根据权利要求10所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述微珠
含有聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、和四氧化三铁中一种或以上的成分。
12.根据权利要求1至11任一所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，
所述生物体液样本来源于人或动物的：外周循环血，胸腔积液，腹水，脐带
血，羊水，骨髓，或培养的人或动物细胞。
13.一种用于富集循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括红细胞
裂解液，免疫微珠。
14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括滤膜。
15.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，刘志明，吴诗扬，刘苏燕，林丽，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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