重组人源细胞珠蛋白在制备治疗高血脂症及动脉粥样硬化药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了重组人源细胞珠蛋白在制备治疗高血脂症及动脉粥样硬化药物中的应用。发明专利技术人分别建立高血脂大鼠模型和动脉粥样硬化大鼠模型，通过皮下注射rhCYGB进行治疗。实验结果表明，rhCYGB药物无毒性，与模型对照组相比，rhCYGB治疗组有显著的改善，其血脂四项较模型组明显减少，而藻双酯钠治疗组血脂四项明显高于正常，故rhCYGB治疗高脂饮食引起的高血脂比藻酸双酯钠药效更好。动脉粥样硬化大鼠模型中，治疗组与模型对照组相比较，其血脂四项也有明显减少，并且动脉粥样斑块也有明显减少。因而采用重组人源细胞珠蛋白治疗高血脂症及动脉粥样硬化具有低毒、安全、有效的优点。

【技术实现步骤摘要】
重组人源细胞珠蛋白在制备治疗高血脂症及动脉粥样硬化药物中的应用
本专利技术涉及重组人源细胞珠蛋白的新用途，特别涉及重组人源细胞珠蛋白在制备治疗高血脂症及动脉粥样硬化药物中的应用。
技术介绍
据有关报道，高脂血症与动脉粥样硬化的发生和发展密切相关。高血脂症的主要危害是导致动脉粥样硬化，进而导致众多的相关疾病，其中最常见的一种致命性疾病就是冠心病。动脉粥样硬化并发的心绞痛、心肌梗死、脑中风、肾功能不全、偏瘫等常为中老年患者的主要死亡原因。很多医生认为有效治疗高血脂非常有利于预防动脉粥样硬化的发生。高脂血症表现为脂肪代谢或运转异常使血浆中的一种或多种脂质含量高于正常值。关于高脂血症的诊断标准，目前国内和国际尚无统一的方法。既往认为血浆总胆固醇浓度>5.17mmol/L（200mg/dl）可定为高胆固醇血症，血浆甘油三酯浓度>2.3mmol/L（200mg/dl）为高甘油三酯血症。大量进食高脂饮食、抽烟、缺少运动、精神压力、遗传因素等会造成高血脂症，其中大量进食高脂食物是高血脂的一个重要因素。据统计，我国血脂异常患者已高达1.6亿，35岁以上的人群中有2500万人同时患有高血压和高脂血症。因此，正确认识高血脂症，及时诊断和治疗，具有重要意义。正常人的血脂主要包括胆固醇(或称总胆固醇TC)和甘油三酯，在血循环中以非游离状态存在，和蛋白结合成脂蛋白这样的大分子运输。主要的脂蛋白分为乳糜微粒、极低密度(前-β)脂蛋白(VLDL)、低密度(β-)脂蛋白(LDL)和高密度(a-)脂蛋白(HDL)，这些蛋白是紧密相联的。高脂血症常为高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemia），表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症或两者兼有，临床上分为两类：①原发性，罕见，属遗传性脂代谢紊乱疾病；②继发性，常见于高脂饮食、抽烟、饮酒、控制不良糖尿病、甲状腺功能减退症、肾病综合征、胆道阻塞等。其发病机理存在多种假说：有人认为是LDL受体功能下降，LDL排除障碍；有人认为由VLDL产生过多或清除障碍以及VLDL转变成LDL过多所致LDL受体清除不力。由于高脂血症是一种慢性病，而现有的高脂血症动物模型普遍采用高脂的乳糜灌胃，对动物体的刺激大，同时，灌胃对动物的刺激大，导致动物精神紧张，动物的神经系统及内分泌系统受到一定影响，得到的动物模型与真实发展而成的饮食性高脂血症存在较大的区别，这也给饮食性高脂血症的药物筛选带来了一定程度的影响。动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是动脉硬化的血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始，一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。动脉粥样硬化在西方发达国家为高发疾病。随着中国人民生活水平提高和饮食习惯的改变，该病也成为中国的高发疾病。临床上选择性地做心电图，放射性核素心、脑、肾等脏器扫描，多普勒超声检查，以及选择性血管造影等，便可作出初步诊断。目前动脉粥样硬化的常规治疗就是：合理饮食、适当运动加以药物治疗。根据WHO的调查，因为性别、遗传、年龄的差异，目前高血脂症和动脉粥样硬化都并未有非常可靠有效的治疗方案。鉴于中药成分复杂，制备工艺不够成熟稳定，西药的副作用明显，开发出真正安全无毒有效防治高血脂症和动脉粥样硬化的药物，是一个非常有现实意义和使用价值的研究。细胞珠蛋白(cytoglobin)是人体固有的保护性蛋白，对机体无毒副作用。细胞珠蛋白最初由Kawada等在大鼠HSC中发现，其在硫代乙酰胺胁迫诱导的纤维化肝脏星状细胞(HSC)中表达明显增加，因而起初被命名为HSC激活相关蛋白(Stellatecellactivation-associatedprotein，STAP)。蛋白测序表明它属于新的一类含血红素的六配位蛋白(Hexacoordinateglobinsuper-family)，是哺乳动物中四种球蛋白(Globin)之一。进一步的研究发现STAP不仅存在于HSC中，还普遍存在于人类多种器官组织以及肾脏和胰脏的类成纤维细胞中，因而将其统一称为细胞珠蛋白(Cytoglobin，Cygb)。细胞珠蛋白由190个氨基酸残基组成，分子量是21.4kD，定位于染色体17q25。目前的研究表明Cygb具有过氧化酶的作用、活性氧清除剂的作用及一氧化氮加双氧酶功能，基因上具有保守的组织缺氧反应元件(HRE)，其3’UTR同时还含有组织缺氧诱导的mRNA稳定信号(HIPBS)，可保证Cygb基因在组织缺氧时的表达和稳定性。在各种应激情况下如缺血、氧化应激及纤维化时，Cygb表达增加。与球蛋白家族的其他成员一样，Cygb具有保护细胞免受氧化应激的损伤，体内及体外实验表明外源性过表达rhCygb可保护肝星状细胞免受氧化应激损伤并且抑制其向纤维样细胞分化。迄今未有文献报导人源珠蛋白具有改善或治疗高脂血症和动脉粥样硬化的作用。由于人类Cygb与大鼠Cygb在基因序列上具有97％的同源性，故本专利技术采用来源于人的细胞珠蛋白（重组人源细胞珠蛋白，rhCygb）蛋白进行大鼠模型的治疗实验。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供重组人源细胞珠蛋白（rhCygb）在制备治疗心血管疾病药物中的应用，所述心血管疾病优选为高血脂症、动脉粥样硬化。专利技术人分别建立高血脂大鼠模型和动脉粥样硬化大鼠模型，通过皮下注射rhCYGB进行治疗。实验结果表明，rhCYGB药物无毒性，与模型对照组相比，rhCYGB治疗组有显著的改善，其血脂四项较模型组明显减少，而藻双酯钠治疗组血脂四项明显高于正常，故rhCYGB治疗高脂饮食引起的高血脂比藻酸双酯钠药效更好。动脉粥样硬化大鼠模型中，治疗组与模型对照组相比较，其血脂四项也有明显减少，并且动脉粥样斑块也有明显减少。因而采用重组人源细胞珠蛋白治疗高血脂症及动脉粥样硬化具有低毒、安全、有效的优点。附图说明图1为rhCygb治疗组和藻酸双酯钠治疗组的大鼠肝脏病理观察结果。图2为模型对照组和正常对照组的大鼠肝脏病理观察结果。图3为大鼠动脉标本病理观察结果。具体实施方式一、高血脂大鼠模型试验1、动物建模：将体重为200～250g的清洁级健康成年雄性SD大鼠50只按完全随机方法分为2组，正常对照组10只，造模组40只。正常对照组：投喂普通颗粒饲料，自由摄食，平均每天每只约20克左右。模型组：投喂高脂饲料（高脂饲料为实验室自选配方，并由南方医科大学实验动物中心制作：85%基础饲料，4%胆固醇，10%猪油，0.2%丙硫氧嘧啶，0.5%胆盐），自由摄食，平均每天每只约20克左右。造模4周。40只造模组大鼠经过4周造模成功后，随机选取10只采用尾部静脉采血测量血脂四项，测量结果证实造模成功。2、动物给药：40只造模组大鼠随机分为3mg/kgrhCygb治疗组（8只）、6mg/kgrhCygb治疗组（8只）、9mg/kgrhCygb治疗组（8只）、阳性药（藻酸双酯钠）治疗组（8只）、模型对照组（8只）。正常对照组：一直投喂普通颗粒饲料。模型对照组：在实验期间持续投喂高脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组人源细胞珠蛋白在制备治疗心血管疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.重组人源细胞珠蛋白在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：董文其，欧玲伶，魏威，李珍，王萍，
申请(专利权)人：董文其，
类型：发明
国别省市：广东;44