本发明专利技术涉及与血清蛋白诸如血清白蛋白结合的氨基酸序列；包括或基本由所述氨基酸序列组成的化合物、蛋白质和多肽；编码所述氨基酸序列、蛋白质或多肽的核酸；包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物，且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列、蛋白质和多肽在ｐＨ５－８范围内基本独立的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能够结合血清蛋白诸如血清白蛋白的氨基酸序列；包括或 基本由所述氨基酸序列组成的化合物、蛋白质和多肽；编码所述氨基酸序 列、蛋白质或多肽的核酸；包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物， 且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的用途。具体地，本专利技术涉及以这样的方式结合血清蛋白的氨基酸序列(和包 括所述氨基酸序列的化合物)，所述方式是当处于生理pH值时，基本不依 赖于pH (如本文中定义)。按照本专利技术，已经发现所述氨基酸序列(以及包括至少一种所述氨基 酸序列的化合物，如本文中进一步所述)与不基本独立于pH的方式结合 相同血清蛋白的氨基酸序列相比，在循环中具有有利(即，更长)的半衰 期。由本文中进一步的描述，本专利技术的其他方面、实施方案、优势和应用 将变得清晰。
技术介绍
能够结合人血清蛋白诸如人血清白蛋白的氨基酸及其在多肽构建体中 增长治疗相关蛋白质和多肽半衰期的用途是本领域中已知的。例如，WO 91/01743、 WO 01/45746和WO 02/076489描述了与血清白 蛋白结合的肽部分，所述血清白蛋白能够与治疗蛋白质和其他治疗化合物 和实体相融合，从而增长其半衰期。然而，这些肽部分是细菌或合成来源 的，其对于用在治疗中是较不优选的。埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO 04/041865描述了针 对血清白蛋白(和特别是针对人血清白蛋白)的纳米体②(Nanobodies ), 它能够与其他蛋白质(诸如一种或多种针对理想靶标的其他纳米体⑧)相连，从而增长所述蛋白质的半衰期。新生Fc受体(FcRn)，也称为"Brambell受体"，与延长白蛋白在循 环中的寿命有关(见Chaudhury等，实验医学杂志(The Journal of Experimental Medicine),第3巻，第197号，315-322 (2003))。 FcRn受体 是由可溶性轻链、跨膜区和约50个氨基酸的细胞质尾部组成的完整膜糖 蛋白，所述可溶性轻链由P2-微球蛋白组成，所述(32-微球蛋白通过三个细 胞外结构域与43 kD a链非共价结合。所述细胞质尾部包含参与受体内在 化的基于二核苷酸基序的胞吞作用信号。所述a链是蛋白质非经典MHC I 家族的成员。f32m与a链的缔合对FcRn的正确折叠和离开内质网定向到 内体和细胞表面非常关键。RcRn的整体结构类似于I类分子的整体结构。a-1和oc-2区类似由8 个反向平行P链组成的平台，所述反向平行|3链形成以2个反平行a-螺旋 为顶端的单P-折叠，所述a-螺旋非常类似于MHC I分子中的肽裂口。由 于a-l螺旋的全面重新定位和a-2螺旋由于存在Prol62而在该螺旋中引入 断裂导致的C-末端部分弯曲，FcRn螺旋彼此相当靠近，从而阻断肽结合。 FcRn的Argl64侧链也阻断肽N-末端与MHC 口袋的潜在的相互作用。另 外，a-1和a-2螺旋间的盐桥和疏水性相互作用也对沟关闭作出贡献。因此，FcRn不参与抗原呈递，且所述肽裂口是空的。FcRn结合并运输IgG由母体循环穿过胎盘合胞滋养层到达胎儿循环， 并保护成人中IgG免于被降解。除体内稳态外，FcRn控制组织中IgG的 胞转作用。FcRn位于上皮细胞、内皮细胞和肝细胞中。按照Chaudhury等(见上)，白蛋白结合FcRn从而形成具有IgG的三-分子复合物。白蛋白和IgG非协作地结合于FcRn上的不同位点。人FcRn 与琼脂糖-HSA和琼脂糖-hlgG的结合是pH依赖性的，其在pH5.0时达到 最大，并在pH7.0-pH8时接近零。关于FcRn以与其结合IgG相同的pH 依赖性方式结合白蛋白的观察提示白蛋白与FcRn相互作用并由此受到保 护免于被降解的机理与IgG的相同，并通过与FcRn类似的pH-灵敏性相 互作用受到介导。利用SPR测量各个HSA结构域结合固定的可溶性hFcRn 的能力，Chaudhury显示FcRn和白蛋白通过白蛋白的D-III结构域，以pH-依赖性方式，在与IgG结合位点不同的位点上相互作用(Chaudhury, PhD论文，见http:〃www.andersonlab.com/biosketchCC.htm; Chaudhury等，生物化 学(Biochemistry) , ASAP文章10.1021/bi052628y S0006-2960(05)02628-0 (网页公开日期2006年3月22日)；还参见Chaudhury，生物化学(Biochemistry), 2006，第45巻，4983-49%)。本领域中已知的白蛋白结合剂的主要缺点是它们在灵长类动物中有限 的体内半衰期。在小鼠中，血清白蛋白的天然半衰期是大约2天，且已经 表明不同的血清白蛋白结合剂表现出相似的半衰期，即大约2天。然而， 就已在灵长类动物(即，猕猴(iWacaca)属的，诸如恒河猴和食蟹猴(cynomologus monkeys))中测试的已知的血清白蛋白结合剂来说，它们 表现出大约3天的半衰期。参考Domantis有限公司的Lucy Holt博士在2006 年6月1日的IBC会议"抗体及更多"("Antibodies and Beyond")期间在 2006年6月1日提出的"为了最佳实践修整人结构域抗体"("r"//on'"g /z膽(2" Z)o附m'" j"幼o血:y ) 的演讲中关于所谓的"AlbudAb's " (AlbudAbTM是英国剑桥Domantis有限公司的商标)的数 据。换言之，本领域中已知其在灵长类动物中半衰期数据的血清白蛋白结 合剂是有缺陷的，因为它们在灵长类动物中，在体内表现出短血清半衰期。 这些半衰期比这些动物中血清白蛋白的天然半衰期明显更短，例如，是其 25%。许多治疗剂，特别是生物学剂(即，肽或多肽药物、多核苷酸，等) 在体内经历不充分的血清半衰期。这使得以高频率和/或更高剂量施用所述 治疗剂，或使用持续不变释放制剂成为必需，以维持治疗功效所需的血清 水平。药物的频繁全身性施用与大量有害副作用相关。例如，频繁的，例 如每日的，全身性注射对受试者显示出相当大的不适，并引起与施药有关 的高危险性感染，且可能需要住院或频繁去医院，特别是在静脉内施用治 疗剂时。而且，在长期治疗中，每日静脉内注射还可以引起大量由重复刺 破血管引起的组织结疤和血管病理学副作用。已知对于所有频繁的全身性 施用治疗剂，如例如，向糖尿病患者施用胰岛素，或向患有多发性硬化的 患者施用干扰素药物存在类似的问题。所有这些因素对保健系统引起降低 的患者顺应性和增高的成本。因此，存在对增长治疗剂在灵长类动物，特别是在人中的血清半衰期的方法的需要。 专利技术概述本专利技术通过提供以这样的方式结合血清蛋白的氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)解决该需要，所述方式是当处于生理pH值时基 本不依赖于pH (如本文中所述)。本专利技术氨基酸序列结合(或在生理条件下能够结合)的血清蛋白具体 可以是在天然存在所述血清蛋白的人或动物体内进行再循环或再循环机 制的任意血清蛋白。所述血清蛋白的实例对于技术人员应该是清楚的。更具体地，本专利技术氨基酸结合(或在生理条件下能够结合)的血清蛋白可以选自由下列各项组成的本文档来自技高网...
【技术保护点】
氨基酸序列，所述氨基酸序列以处于生理ｐＨ值时基本不依赖于ｐＨ的方式与血清蛋白结合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：伊格纳茨约瑟夫伊莎贝拉拉斯特斯，亨德里克斯雷内瑞斯雅各布斯马托伊斯，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]
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