一种检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒和检测方法，属于食品安全检测技术领域。本发明专利技术试剂盒配制简单，且能够灵敏、简便、快速、准确地检测样本中的罗丹明B含量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒和检测方法，属于食品安全检测
。本专利技术试剂盒配制简单，且能够灵敏、简便、快速、准确地检测样本中的罗丹明B含量。【专利说明】一种检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒及检测方法
本专利技术涉及食品安全检测领域。具体而言，本专利技术涉及一种用于检测罗丹明B的 酶联免疫检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
罗丹明B (Rhodamine B)又称玫瑰红B或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种鲜桃红 色人工合成染料。经动物实验发现，罗丹明B是致癌物质，因此不允许添加到食品中。2008 年卫生部发布《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一 批)》，明确规定禁止在食品中添加罗丹明B类工业染料。但仍有很多非法企业将罗丹明B 添加于调味品和其他食品中用作染色剂。因此急需建立一种快速灵敏的检测方法，用于检 测食品中非法添加的罗丹明B。 目前，罗丹明B的检测主要是实验室仪器分析，如高效液相-荧光检测法和高效液 相-质谱联用检测法，而免疫分析相关产品在市场上较少。但实验室分析用仪器设备及其 运行维护成本较高，对操作人员的专业要求也较高。而免疫分析较于仪器分析，前处理方法 简便、检测快速、可用于现场检测并且便于推广。 因此，本领域需要配制简单，且能够灵敏、简便、快速、准确地检测样本中的罗丹明 B含量的酶联免疫试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种酶联免疫试剂盒以及检测方法，用于检测食品中添加的 罗丹明B。 -方面，本专利技术提供了用于定量检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包 括：样品稀释液，其为含有1%至5%海藻糖的pH7. 4的0. 01M磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述试剂盒还包括： 包被有罗丹明B合成抗原的酶标板，其中罗丹明B合成抗原的包被浓度为0. 5至 1. 5 μ g/mL ； 罗丹明B单克隆抗体工作液，其为含0.5至1.0 μ g/mL罗丹明B单克隆抗体的 pH7. 4的0. 01M磷酸盐缓冲液； 辣根过氧化物酶标记的IgG抗体工作液，其为含0. 5至1. 0 μ g/mL辣根过氧化物 酶标记的IgG抗体的pH7. 4的0. 01M磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述罗丹明B合成抗原配制在pH9. 8的0.02M碳酸盐缓冲液 中。 在一个实施方式中，所述试剂盒中，罗丹明B合成抗原的包被浓度为1 μ g/mL。 在一个实施方式中，所述试剂盒中，罗丹明B单克隆抗体工作液为含0. 5 μ g/mL罗 丹明B单克隆抗体的pH7. 4的0. 01M磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述试剂盒中，辣根过氧化物酶标记的IgG抗体工作液为含 1 μ g/mL辣根过氧化物酶标记的IgG抗体的pH7. 4的0. 01M磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述试剂盒中，样品稀释液为含有1%海藻糖的pH7. 4的0.01M 磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述试剂盒还包括： 罗丹明B标准品； 显色液A，其为万分之五至千分之一的过氧化氢或过氧化脲； 显色液B，其为万分之三至万分之五的四甲基联苯胺； 终止液，其为1. 8至2. Omol/L的硫酸溶液； 洗涤液，其为含吐温200. 1%_0· 5%的磷酸盐缓冲液。 在一个实施方式中，所述的试剂盒还包括 罗丹明B标准品； 显色液A，其为万分之五的过氧化氢或过氧化脲； 显色液B，其为万分之三的四甲基联苯胺； 终止液，其为2mol/L的硫酸溶液； 洗涤液，其为含0. 1%_0. 5%吐温20的磷酸盐缓冲液。 在本专利技术中，用于制备酶标板的固相材料包括但不限于聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙 烯，载体的形式是凹孔型微量反应板。 在一个实施方式中，所述的试剂盒还包括罗丹明B提取液和使用说明书。 在一个实施方式中，所述罗丹明B提取液为甲醇、甲醇水溶液、乙腈或正己烷。 另一方面，本专利技术提供了通过酶联免疫实验检测样品中的罗丹明B的方法，所述 方法包括使用本专利技术的试剂盒。 在一个实施方式中，所述方法包括： 用样品稀释液配制罗丹明B标准品或待测样品。 在一个实施方式中，所述方法包括： 显色步骤中每孔加入等体积显色液A和B。 在一个实施方式中，所述方法包括： (1)用样品稀释液配制浓度为0、0· 1、0· 3、0· 9、2· 7、和8. lng/ml的罗丹明B标准 品； (2)显色步骤中每孔加入等体积显色液A和B。 在一个实施方式中，所述的方法还包括提取待测样品中的罗丹明B的步骤。 在一个实施方式中，所述的方法中提取待测样品中的罗丹明B的步骤包括：（1)加 入一定体积的提取液，样品质量与提取液体积比为1:5到1:10 ; (2)提取时间为15到30分 钟；（3)离心或静置后，取上清液用氮气吹干；（4)加入样品稀释液复溶，氮气吹干前后溶液 的体积比为1:4到1:5。 在一个实施方式中，本专利技术罗丹明B的检测方法包括：（1)将试剂盒从保存条件下 恢复室温；（2)提取待测样品中的罗丹明B (样品前处理步骤）；（3)配制罗丹明B标准品 工作液；（4)依次在酶标板的孔中加入标准品或样品、酶标记的IgG抗体工作液和抗体工作 液；（5) 25°C孵育；（6)洗涤；（7)在酶标板的孔中加入显色液；（8) 25°C显色；（9)加入终 止液；（10)在酶标仪上于450nm处读数；（11)根据标准曲线公式计算出样品中罗丹明B的 含量。 在一个实施方式中，样品前处理方法包括：（1)称取一定质量的样品；（2)加入一 定体积的提取液(包括但不限于，例如甲醇、甲醇水溶液、乙腈、正己烷)，样品质量与提取 液体积比为1:5到1:10 ; (3)提取时间为15到30分钟；（4)离心或静置后，取上清液用氮 气吹干；（5)加入样品稀释液复溶，氮气吹干前后溶液的体积比为1:4到1:5 ; (6)取50 μ L 复溶后的溶液检测。 本专利技术试剂盒的检测原理为： 将罗丹明Β合成抗原包被在固相载体上；加入罗丹明Β标准品或样品，并加入酶标 记的IgG抗体与罗丹明Β抗体，样品中的罗丹明Β与酶标板上固定的罗丹明Β竞争结合试 剂中的抗体，并且酶标记的IgG抗体与罗丹明B抗体反应；通过洗涤除去没有结合的罗丹明 B抗体与酶标记的IgG抗体；通过酶催化显色剂显色，显色后终止，测定样品的吸光度值；样 品的吸光度值与罗丹明B的浓度呈负相关，与标准曲线比较计算可得出样品中罗丹明B的 浓度。 有益效果： 本专利技术检测罗丹明B的试剂盒主要采取间接竞争酶联免疫测定法，定性或定量检 测样品中罗丹明B的含量；检测过程采用一步孵育法，进一步缩短了检测时间，与通常的两 步孵育间接竞争法相比，检测时间由1小时15分钟缩短为45分钟。本检测方法提供的样 品前处理方法适用于多种食品，前处理过程较简单，能同时检测大批样品。 本专利技术试剂盒使用罗丹明B单克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，为使用者 简化操作步骤，节省操作时间。本专利技术试剂盒的优点在于灵敏度高、特异性强、准确度高、对 样品需求量少、对仪器设备要求低、试剂保存时间长等，可以在调味料等食品安全检测中发 挥重要作用，有重大的社会意义和广阔的市场前景。 【专利附图】【附图说明】 图1为通过本专利技术试剂盒获得的罗丹明B标准曲线。 图2为通过江大绿康试剂盒获得本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于定量检测罗丹明B的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括：样品稀释液，其为含有1%至5%海藻糖的pH7.4的0.01M磷酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳，王雪，张俊萍，田静秒，郑清林，
申请(专利权)人：北京普析通用仪器有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11