一株石油烃降解菌DLFJ3-3及其应用制造技术

一株石油烃降解菌DLFJ3-3及其应用，涉及环境石油污染生物处理。所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3-3，登记入册编号为CGMCC No.9014。所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3-3可在降解石油烃类化合物中应用。所述石油烃类化合物包括但不限于柴油、液态烷烃等烃类化合物。该菌含有与石油烃降解相关的基因，这些基因在该菌降解石油时发挥重要作用。所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3-3能利用石油∶柴油＝1∶1作为能源和碳源生长繁殖，该菌6天能将无机盐培养基中的5g/L的石油∶柴油＝1∶1降解65.17％。

【技术实现步骤摘要】
—株石油轻降解菌DLFJ3-3及其应用
本专利技术涉及环境石油污染生物处理，尤其是涉及一株石油烃降解菌DLFJ3-3及其应用。
技术介绍
当前，海洋的污染正在日趋加剧，其中海洋的石油污染尤为严重(HeadI M,Jones D M,F.Rff.Marine microorganisms make a meal of oil.[J].Nat RevMicrobiol.2006, 4:173-182.)。目前，世界所需石油的2/3经海路运输，经常运行在航道上的油轮大约有7000艘之多(李德生，罗群.石油一人类文明社会的血液[M]:清华大学出版社，2002.)。大型油轮失事以后，其中的原油部分或全部流入海洋中，从而造成严重的海洋石油污染。石油污染给海洋环境和海洋生态系统带来了严重的危害，直接或间接的影响着人类的生存和可持续发展(龙绍桥.海上溢油行为与归宿数值模拟及其对环境的影响研究[D]:中国海洋大学；2006.)。其主要表现在以下几个方面:1)影响海气系统间物质和能量的交换。2)破坏海洋生态系统。3)制约人类社会和环境的可持续发展。目前，常用的海洋石油污染的治理方法主要有物理修复、化学修复和生物修复。与化学、物理方法相比，生物修复对人和环境造成的影响小，且修复费用仅为传统物理、化学修复的30 %~50 % (Bragg JR, Prince RC, Harner EJ etal.Effectiveness of Bioremediation for the Exxon-Valdez Oi1-Spi 11 [J].Nature.1994，368(6470):413-418.)。生物修复以其投入小，无二次污染的优势被视为最有前途的环境治理手段(Juhasz AL, Naidu R.Bioremediation of high molecular weightpolycyclic aromatic hydrocarbons:a review of the microbial degradation of benzo [a]pyrene [J].1nternational Biodeterioration&Biodegradation.2000, 45(1): 57-88.)。在海洋环境中生活着各种各样的石油烃降解菌，海洋石油烃降解菌早在一个世纪前就已经被分离到。目前，大概有79个细菌属、9个蓝细菌属、103个真菌属以及12个蓝藻属能利用烃类物质作为唯一的碳源和能源。在这些种类繁多的烃类降解细菌中，大概只有1/4(19个属)的细菌类降解者是海洋专属的烃类降解者(Head IM, Jones DM, Roling WF.Marinemicroorganisms make a meal of oil [J].Nat Rev Microbiol.2006, 4 (3): 173-182.)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3。本专利技术的另一个目的是提供一株石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3在降解石油烃类化合物中的应用。 所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3,已于2014年04月03日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码:100101，登记入册编号为CGMCC N0.9014。该菌来源于大连新港溢油事件发生地的表层海水，经人工富集培养、分离纯化得到。该菌是革兰氏染色阴性的柠檬胞菌属(Citreicella sp.)的菌株DLFJ3-3，生物学特性为触酶阴性，氧化酶阳性，非发酵型，专性需氧，菌体形态为无芽孢杆菌，菌落圆形、乳白色不透明、表面光滑湿润、边缘规则，无晕环，中央凸起，直径5~6_。通过对该菌基因组的测序，发现该菌含有很多与石油烃降解相关的基因。该菌的最适生长条件为:pH = 6.5~8.5，温度25~28°C。所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3可在降解石油烃类化合物中应用。所述石油烃类化合物包括但不限于柴油、液态烷烃等烃类化合物。对所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3进行基因组测序发现，该菌含有与石油烃降解相关的基因，这些基因在该菌降解石油时发挥重要作用。实验证明，所述石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3_3能够利用石油:柴油=I: I作为能源和碳源生长繁殖，该菌6天能将无机盐培养基中的5g/L的石油:柴油=I: 1(体积比)降解65.17%。【附图说明】图1为DLFJ3-3在石油:柴油=I: 1、柴油以及液态烷烃中的降解图。在图1中，标记a为原油:柴油，b为柴油，c为液态烧烃。【具体实施方式】实例一:Citreicella sp.DLFJ3-3 的分离与鉴定现场采集大连新港溢油地区表层海水，采用海水培养基加入I %石油:柴油=I: I在28°C 180r/min条件下进行富集培养。一周后，在固体培养基(M2)中稀释涂布平板，得到多株纯菌，纯菌经过接种至液体培养基中验证其降解石油烃的能力，最后得到一株石油烃的高效降解菌DLFJ3-3，该菌经16S rDNA鉴定为柠檬胞菌属(Citreicella sp.);选取其中相似序列，用MEGA5.0计算出序列的系统进化距离，构建系统进化树。进化树显示，与其相似度最高的菌株都为Citreicella sp.菌株。结合菌株的16S rDNA的测定结果，将其归属于朽1檬胞菌属(Citreicella sp.)。固体培养基(M2)的成分:乙酸钠5g/L,柠檬酸钠0.05g/L,普通肉汤培养基0.5g/L，蛋白胨0.lg/L,酵母粉0.lg/L,苹果酸0.05g/L,葡萄糖lg/L,鹿糖0.5g/L,硝酸铵lg/L,氯化铵0.2g/L,酒石酸钠0.05g/L,可溶性淀粉0.5g/L,琼脂粉15g/L，加海水至1L，调pH7.5，115°C高压蒸汽灭菌30min后补加I %体积已灭菌的KH2PO4 溶液(10g/L, ρΗ6.7)及 0.1%体积 0.22 μ m 滤膜除菌的 FeSO4 (0.4g/L)。实例二:Citreicella sp.DLFJ3-3降解石油烃的性能将Citreicella sp.DLFJ3-3接种至含I %石油:柴油=I: I的人工海水培养基(MMC)中，在180r/min、28°C摇床中避光培养，每隔一天分别取样利用重量法测定培养液中石油烃的降解率，实验结果见图1。由图1可以看出Citreicella sp.DLFJ3-3在第3~5天之间对于石油:柴油=I: I的降解较快，且该菌在7天内对于1%石油:柴油=I: I的降解率达到了 65.17 %。人工海水培养基(MMC):NaC124g/L, MgSO4.7H207g/L, NH4NO3Ig/L，KC10.7g/L, KH2P042g/L，Na2HP043g/L, pH7.4。灭菌后补加适量微量元素混合液，微量元素经0.22 μ M滤膜过滤除菌。MMC微量元素混合液=CaCl2, 2mg/L ；FeCl3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3‑3，已于2014年04月03日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，登记入册编号为CGMCC No.9014。

【技术特征摘要】
1.一株石油烃降解菌(Citreicella sp.)DLFJ3-3，已于2014年04月03日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，登记入册编号为CGMCC N0.9014。2.如权利要求1所述一株石油烃降解菌(Citreicellasp.)DLFJ3_3在降解石油烃类化合物中的应用。3.如权利要求2所述应用，其特征在于所述石油烃类化合物包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵宗泽，王万鹏，张荣秋，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35