本发明专利技术公开了一株具有低温降解石油功能的交替假单胞菌Pseudoalteromonas sp.QN‑1，其保藏号为CGMCC No.11635。该菌株筛选自我国北方受石油污染的海域，可在低温条件下降解石油，特别是可在0℃的极端环境降解石油中的萘。本发明专利技术的交替假单胞菌QN‑1可应用于海洋石油污染的生物修复工作，尤其可应用于我国北方海域冬季(包括冰期)等低温环境下萘的降解。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物
，涉及一株海洋低温菌及其在海洋萘污染生物修复中的应用。所述菌株能在0℃～15℃的低温条件下降解石油烃，特别是具有在0℃的极端条件下高效降解石油烃中萘的特点，可用于我国北方海域溢油污染和萘污染的生物修复工作。
技术介绍
随着海洋运输业的高速发展和海洋开采业的快速崛起，海洋溢油事故日益频发，危害巨大。特别是低温海域发生的溢油由于温度低，使有机污染物持久存在，会对当地生态系统造成更大的危害。石油中多环芳烃(PAHs)具有广泛的毒性、致癌性及致畸诱变作用，通过生物累积及食物链的传递作用，会给海洋生物和人类健康带来极大危害，已经引起各国学者的高度重视。虽然PAHs在原油中的含量仅占1％左右，但通常溢油总量较大，因此其中PAHs的含量不容忽视。利用微生物修复海洋溢油具有成本低、效果好、对环境负面影响小、无二次污染等优点，因此日益受到人们的重视。环境温度对石油的生物降解影响很大，而我国北方海域冬季的海洋表面温度较低，大约在2℃左右，部分海域也会有结冰期。虽然目前已经发现了一些海洋石油烃低温降解菌，但菌源主要来自极地环境，而且多是烷烃低温降解菌，PAHs低温降解菌非常少。由于自然环境相当复杂，外源菌的进入会给本地生态环境带来诸多问题。为了避免引入大量外来菌种而造成海洋原有生态系统的破坏，进行生物修复时应选用土著菌种。但是，目前我国关于海洋石油烃低温降解菌的研究较少，特别是对海洋PAHs低温降解菌的研究成果更为匮乏。萘为常见的PAHs，本专利技术的内容是提供一株筛选自我国北方受污染海域的石油降解菌，该菌为交替假单胞菌，可在低温条件下降解石油，特别是可在0℃的极端环境下高效地降解萘。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术的不足提供一株在低温条件下可降解石油的海洋石油降解菌。该菌株筛选自我国北方受石油污染的海域，可在低温
条件下降解石油中的多环芳烃，特别是可在0℃的极端环境下高效地降解石油中的萘。本专利技术所提供的具有在低温条件下降解多环芳烃功能的交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)QN-1是从胶州湾海域筛选获得的。2013年11月22，中石化输油储运公司潍坊分公司输油管线破裂。事故发生后，部分原油沿着雨水管线进入胶州湾，污染附近海域。溢油发生一周后，取表层被原油污染的海水，经过筛选得到Pseudoalteromonas sp.QN-1。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101)保藏，保藏号为CGMCC No.11635，保藏日期为2015年11月09日。本专利技术的Pseudoalteromonas sp.QN-1的特征如下：(1)菌落特征：乳白、近似圆形、隆起、光滑、湿润。(2)遗传学特征：16S rDNA分析，表明其属于交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)。菌株Pseudoalteromonas sp.QN-1的16S rDNA序列具体可见序列表。(3)萘降解性能特征：在0℃的条件下，经过30天的降解实验后，萘降解率可达80.6％。本专利技术还提供交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)QN-1在低温条件下降解石油中的应用，优选地，该菌降解石油中的石油烃，更优地该菌高效地降解萘。所述低温条件是指0℃～15℃，尤其是指0℃。本专利技术的交替假单胞菌QN-1可应用于海洋石油污染的生物修复中，尤其可应用于低温环境中。本专利技术的有益效果：本专利技术的Pseudoalteromonas sp.QN-1是一株高效海洋低温萘降解菌，即使是在0℃的条件下还能保持较高的萘降解活力。本专利技术的菌株培养方法简单，培养基原料易得。该菌株对萘降解能力强，对菲和蒽等PAHs也具有一定降解能力，对石油中烷烃也具有一定降解能力，适用于海洋萘污染的生物修复工作，也可为我国北方海域溢油(包括冰期溢油)的生物修复工作提供优良的PAHs降解菌。具体实施方式下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。另外，下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。下述实施例采用的培养基及其组成为如下：MMC培养基为：NaCl 24g，NH4NO3 1.0g，KCl 0.7g，KH2PO4 2.0g，Na2HPO43.0g，MgSO4·7H2O 7.0g，微量元素CaCl2 0.02mg/L，FeCl3·6H2O 0.5mg/L，CuSO40.005mg/L，MnCl2·4H2O 0.005mg/L，ZnSO4·7H2O 0.1mg/L，加去离子水至1L，pH 7.4；2216E液体培养基为：蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.1g，加去离子水至1000mL，pH值7.4～7.8；2216E琼脂培养基为：蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.1g，琼脂15g，加去离子水至1000mL，pH值7.4～7.8。实施例1菌株Pseudoalteromonas sp.QN-1的分离与鉴定菌株Pseudoalteromonas sp.QN-1的分离(1)样品采集：胶州湾；(2)富集驯化：于250mL三角瓶中加入100mL MMC培养液，120℃下灭菌15min。二氯甲烷用0.22μm孔径的耐有机溶剂滤膜过滤除菌。称取0.2g萘溶于20mL除菌后的二氯甲烷中，然后转入到已灭菌的100mL MMC培养液里，放于摇床上振荡过夜使二氯甲烷挥发。待二氯甲烷挥发后，加入海水样品5mL，置入低温生化培养箱，于120r/min、10℃下振荡培养30d，然后从中取5mL培养液再次转接：将5mL培养液加入到含有0.2g萘的100mL MMC培养液中(处理方法同上)，于120r/min条件下培养30d。每轮培养温度降低1℃，直至0℃，并在0℃条件下长期驯化。(3)分离纯化：将经过富集驯化的微生物培养液进行梯度稀释，并在2216E固体培养基上进行平板划线，0℃培养直至长出清晰菌落。挑选生长良好的菌落，在已灭菌的2216E固体培养基上分3个区域进行划线，置入生化培养箱，于0℃下培养。挑取3区具有生长优势的单菌落，进行二次划线分离。如此反复多次划线，直到分离出菌落单一的菌株，命名为菌株QN-1。2.菌株Pseudoalteromonas sp.QN-1的鉴定(1)菌落特征：乳白、近似圆形、隆起、光滑、湿润。(2)遗传学特征：16S rDNA分析，表明其属于交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)，被分类为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.11635，保藏日期为2015年11月09日。16S rDNA序列如SEQ ID No.1。实施例2菌株Pseudoalteromonas sp.QN-1的发酵用无菌接种环挑取纯化后的菌苔至装有100mL已灭菌的2216E液体培养基的三角瓶锥形中，低温振荡培养7d(0℃，120r/min)，成为种子液；将种子液按10％体积比加入2216E液体培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株在海洋环境中具有低温降解多环芳烃功能的交替假单胞菌Pseudoalteromonas sp.QN‑1，其保藏号为CGMCC No.11635。
【技术特征摘要】
1.一株在海洋环境中具有低温降解多环芳烃功能的交替假单胞菌Pseudoalteromonas sp.QN-1，其保藏号为CGMCC No.11635。2.如权利要求1所述的交替假单胞菌QN-1在低温条件下降解石油中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述交替假单胞菌QN-1降解多环芳烃。...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭平，林建国，曹宾霞，
申请(专利权)人：大连海事大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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