鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱技术

本发明专利技术提供了一种鸦葱指纹图谱的建立方法，具体步骤为将鸦葱制备成供试品溶液，在一定的条件下经过高效液相色谱仪的分离检测，获得鸦葱的指纹图谱，本发明专利技术同时提供了由该方法得到的鸦葱的标准指纹图谱，该图谱能够为鸦葱鉴别和内在的质量控制提供可靠的依据，本发明专利技术操作简便，稳定性高、重现性好、特征峰多，能全面、准确地评价鸦葱药材的质量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种鸦葱指纹图谱的建立方法，具体步骤为将鸦葱制备成供试品溶液，在一定的条件下经过高效液相色谱仪的分离检测，获得鸦葱的指纹图谱，本专利技术同时提供了由该方法得到的鸦葱的标准指纹图谱，该图谱能够为鸦葱鉴别和内在的质量控制提供可靠的依据，本专利技术操作简便，稳定性高、重现性好、特征峰多，能全面、准确地评价鸦葱药材的质量。【专利说明】鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱
本专利技术涉及一种鸦葱指纹图谱的建立方法，以及由该方法所得的鸦葱标准指纹图谱，属于中药分析领域。
技术介绍
鸦葱为菊科植物Scorzonera austriaca Wild的干燥全草。五月?六月米挖、晒干。本品全长10?40厘米；根粗壮，倒圆锥状，直径约0.3?3厘米；茎多数，簇生于根颈顶端，不分枝，光滑无毛，茎基被稠密褐色的纤维状撕裂的鞘状残遗；基生叶广披针形至长圆状卵形，长20?30 (-40)厘米，宽1.2?3.5 (-5)厘米，边缘平展，基部鞘状扩大，鞘内被稠密的棉毛，基部边缘有棉毛；茎生叶少数，I?3枚，鳞片状；头状花序单生茎顶，瘦果无毛。鸦葱作为传统中药，全草入药，具有清热解毒、消炎、通乳的功效，主治痈疮、淋病、妇女带下、乳腺炎等症。鸦葱也是一味传统藏药(藏名:巴多拉)。关于鸦葱化学成分的研究除本研究室外，只有武全香等报道了鸦葱中倍半萜类和三萜类化学成分的研究(武全香，李娟，祝英.藏药鸦葱化学成分的研究.有机化学，2003，23 (11):446)，Ting-Fu Jiang等报道了香豆素类化学成分的研究(T.F.Jiang et.al.Determinationof kavalactones and flavonoid glycoside in Scorzonera austriaca by capillaryzone electrophoresis.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2007,43(3):854-858) 0本研究室对鸦葱中黄酮类化学成分进行了研究(李泉妙，王广树.鸦葱中黄酮苷类成分的提取分离与结构鉴定.吉林大学学报(医学版)，2010, 36 (I): 10-12)、(刘欣，张子龙，王广树等.鸦葱中黄酮成分的提取分离及结构鉴定.吉林大学学报(医学版)，2012，38 (3):595-597)、(何碌.鸦葱中黄酮类化合物的研究.吉林大学研究生学位论文，2012)、(李泉妙.鸦葱中化学成分的研究及保肝活性的初探.吉林大学研究生学位论文，2008)。迄今为止，本研究室从鸦葱中分得了 10余种黄酮类化合物，对总黄酮提取物进行了生物活性研究，发现鸦葱总黄酮具有治疗肝炎和保肝作用，于2013年获得了中国专利技术专利(一种鸦葱总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途，专利号ZL201110255235.1，授权公告日2013-06-04)。本研究室正在进行以鸦葱为原料，以鸦葱总黄酮为有效部位，以治疗病毒性肝炎为目标的新药创制的研究，并获得了国家科技重大专项的资助(国家科技重大专项“重大新药创制”，治疗病毒性肝炎创新药物-YCZT 的研究，2013ZX09103002-007)。中药指纹图谱技术是目前国内外公认的用来控制中药、天然药物或中药材整体质量最有效、最准确、最直接的手段，是一种综合的、宏观的和可量化的鉴别方法，其基本属性是“整体性”和“模糊性”。“整体性”是指完整地比较色谱的特征“面貌”；“模糊性”强调的是对照物与待测样品指纹图谱的相似性。运用指纹图谱技术可以鉴别中药材和中成药的真伪，评价原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳定性。但是，迄今为止，有关鸦葱药材的指纹图谱还未见报道。鉴于以上不足，有必要专利技术一种建立鸦葱指纹图谱的新方法，使之既能操作简便、稳定和重现性好，又能全面、准确地评价鸦葱药材的质量，从而既能加强对鸦葱药材真伪、产地的鉴别，又能对鸦葱药材的质量和品质进行全面评价和控制，弥补了现有鸦葱质量药材控制方法的不足，使其更加完善和科学。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有鸦葱药材质量控制方法的不足而提供一种鸦葱指纹图谱的建立方法，其特点是将鸦葱制备成供试品溶液后，经过高效液相色谱仪分离检测，获得鸦葱的指纹图谱，从而为鸦葱的鉴别和内在的质量控制提供可靠的依据。本专利技术一种鸦葱指纹图谱的建立方法具体包括如下步骤:I)供试品溶液的制备:取鸦葱药材粗粉，以乙醇溶液超声提取，过滤，取滤液适量采用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；2)参照物溶液的制备:取鸦葱黄酮苷A(5，7，3'，4'-四羟基黄酮-6-C-13-D-批喃葡萄糖碳苷)、鸦葱黄酮苷D (5，7，4'-三羟基黄酮-S-C-β -D-吡喃葡萄糖碳苷)对照品，溶于甲醇溶液作为参照物溶液；3)制作鸦葱指纹图谱:分别精密吸取供试液溶液和参照物溶液，经高效液相色谱仪分离检测，其中，流动相的组成为14.6mmol.L-1的磷酸溶液-乙腈；采用梯度洗脱；得到鸦葱指纹图谱。其中，供试品溶液按如下步骤制备:精密称取鸦葱药材粗粉2.00g，置具塞容器中，精密加入70%乙醇50ml，密塞后称定重量，超声提取lh，静置，放冷，70%乙醇补足缺失重量，摇匀，滤过。取滤液适量采用0.45 μ m微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。对照物溶液按如下步骤制备:取鸦葱黄酮苷A(5，7，3'，4'-四羟基黄酮-6-C- β -D-吡喃葡萄糖碳苷)、D (5，7，4'-三羟基黄酮-8-C- β -D-吡喃葡萄糖碳苷)对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每1ml中黄酮苷Α(5，7，3'，4'-四羟基黄酮-6-C- β -D-吡喃葡萄糖碳苷)0.lmg, D (5，7，4'-三羟基黄酮-8-C- β -D-吡喃葡萄糖碳苷)0.1mg的混合溶液,摇匀。色谱条件为:色谱柱为:PhenomenexGemini5u C18110A(250X4.60mm5micron)柱；流动相为14.6mmol *L_1的磷酸-乙腈；采用梯度洗脱:00min — 15min — 30min — 50min—70min — 75min,乙臆 15%— 18% — 30% — 40% — 66% ;流速 Iml *min-l ;检测波长为273nm ;进样量10 μ I ;柱温25°C。本专利技术还提供由上述鸦葱指纹图谱的建立方法得到的鸦葱标准指纹图谱。将12份鸦葱样品按上述方法制备成供试品溶液，在高效液相色谱仪上分离检测，使用国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》软件分析，得到鸦葱标准指纹图谱。所述标准指纹图谱有13个特征峰，第7、10号色谱峰分别为对应鸦葱黄酮苷A(5，7，3'，4'-四羟基黄酮-6-C-13-D-吡喃葡萄糖碳苷)、鸦葱黄酮苷D(5，7，4'-三羟基黄酮-8_C-13-D-吡喃葡萄糖碳苷)，图谱总长度为75min，7号峰平均保留时间为31.65min,以7号峰为参照峰，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积，平均相对保留时间和相对峰面积如下:I号峰，平均相对保留时间为0.6916，平均相对峰面积为1.1849 ；2号峰，平均相对保留时间为0.7769，平均相对峰面积为0.2001 ；3号峰，平均相对本文档来自技高网...

【技术保护点】
鸦葱指纹图谱的建立方法，其特征在于将鸦葱制成供试品溶液，经高效液相色谱仪分离检测，获得鸦葱的指纹图谱；所述方法包括如下步骤：1)供试品溶液的制备：取鸦葱药材粗粉，以乙醇溶液超声提取，过滤，取滤液适量采用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；2)参照物溶液的制备：取鸦葱黄酮苷A(5,7,3′,4′‑四羟基黄酮‑6‑C‑β‑D‑吡喃葡萄糖碳苷)、鸦葱黄酮苷D(5,7,4′‑三羟基黄酮‑8‑C‑β‑D‑吡喃葡萄糖碳苷)对照品，溶于甲醇溶液作为参照物溶液；3)制作鸦葱指纹图谱：分别精密吸取供试液溶液和参照物溶液，经高效液相色谱仪分离检测，其中，流动相的组成为14.6mmol·L‑1的磷酸溶液‑乙腈；采用梯度洗脱；得到鸦葱指纹图谱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王广树，张爽，谢扬，周小平，孙薇，王艳，杨锦竹，张沐新，刘银燕，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22