一种生物色谱比较筛选系统及其应用技术方案

本发明专利技术涉及分析化学和生物化学技术领域，本发明专利技术提供了一种生物色谱比较筛选系统，是一种在线的柱切换全二维色谱系统，由三个高效液相色谱溶剂输送泵，一个六位柱切换阀，一个二位十通阀，两个定量环，数根生物色谱柱，一根整体柱串联质谱分析器构成，用于平行比较小分子在正常、病理组织或细胞来源的生物色谱上的亲和力，从而筛选复杂样品中的疾病靶向性活性组分。本发明专利技术还进一步提供了利用上述筛选系统的生物色谱比较筛选方法。本发明专利技术的筛选系统和方法适用于在复杂体系样品中疾病靶向活性组分的自动高通量筛选，通过分析正常和病理模型上的差异大大增加筛选结果的专属性，同时本发明专利技术的筛选方法具有自动化、操作简单、普适性好、灵活性强、耗时短，可满足各类生物色谱的灵敏度需求，显著提高筛选通量和可信度。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及分析化学和生物化学
，本专利技术提供了一种生物色谱比较筛选系统，是一种在线的柱切换全二维色谱系统，由三个高效液相色谱溶剂输送泵，一个六位柱切换阀，一个二位十通阀，两个定量环，数根生物色谱柱，一根整体柱串联质谱分析器构成，用于平行比较小分子在正常、病理组织或细胞来源的生物色谱上的亲和力，从而筛选复杂样品中的疾病靶向性活性组分。本专利技术还进一步提供了利用上述筛选系统的生物色谱比较筛选方法。本专利技术的筛选系统和方法适用于在复杂体系样品中疾病靶向活性组分的自动高通量筛选，通过分析正常和病理模型上的差异大大增加筛选结果的专属性，同时本专利技术的筛选方法具有自动化、操作简单、普适性好、灵活性强、耗时短，可满足各类生物色谱的灵敏度需求，显著提高筛选通量和可信度。【专利说明】一种生物色谱比较筛选系统及其应用
本专利技术涉及分析化学和生物化学
，具体涉及一种生物色谱比较筛选系统、筛选方法及其应用。
技术介绍
生物色谱技术(Biological Chromatography)连接先进的检测器，具有高通量和高选择性的优势，广泛用于复杂样品(Moaddel R., Rosenberg A., Spelman K., FrazierJ., Frazier C., Nocerino S., Brizzi A., Mugnaini C.and Wainer 1.W., Developmentand characterization of immobilized cannabinoid receptor(CB1/CB2)opentubular column for on-line screening, Anal.Biochem.，2011，412，85-91)中活性小分子的筛选和小分子与特定受体间相互作用的研究(Habicht K.L., Frazier C.，SinghN.，Shimmo R.，Wainer 1.W.and Moaddel R.，The synthesis and characterizationof a nuclear membrane affinity chromatography column for the study of humanbreast cancer resistant protein (BCRP) using nuclear membranes obtained from theLN-229cells, J.Pharm.Biomed.Anal.，2013，72，159-162)。为 了有效地表征和确证对于生物色谱固定相有亲和作用的活性成分，国内外研究者建立了几种在线或离线的二维液相色谱的方法，用于复杂体系药物的活性组分的快速筛选(Wang S.，Sun M.，Zhang Y.，DuH.and He L，A new A431/cell membrane chromatography and online high performanceliquid chromatography/mass spectrometry method for screening epidermal growthfactor receptor antagonists from Radix sophorae flavescentis, J.Chromatogr.A, 2010，1217，5246-5252，Wang L.，Ren J.，Sun M.and Wang S.，A combined cellmembrane chromatography and online HPLC/MS method for screening compoundsfrom Radix Caulophylli acting on the human alpha(IA)-adrenoceptor, J.Pharm.Biomed.Anal.，2010，51，1032-1036)。从正常组织或传代细胞系中得到的细胞膜或蛋白片段已经成功用于生物色谱的筛选(Sun M., Ren J.，Du Η., Zhang Y., Zhang J., WangS.and He L., A combined A431cell membrane chromatography and online highperformance liquid chromatography/mass spectrometry method for screeningcompounds from total alkaloid of Radix Caulophylli acting on the human EGFRj J.Chromatogr.B，2010，878，2712-2718，Wang C.，He L., Wang N.and Liu F.，Screeningant1-1nflammatory components from Chinese traditional medicines using aperitoneal macrophage/cell membrane chromatography-offIine-GC/MS method, J.Chromatogr.B，2009，877，3019-3024)。然而，这些生物色谱模型的缺点在于它并不能完全模拟器官的损伤或病理状态，可能出现一些非疾病专属性或非特异性的相互作用，因而耗费了大量的时间用于分离、纯化和药效学的确证。因此，利用能最大化地模拟真实的病理状态的病理性生物色谱模型，并与正常生物色谱模型在相同色谱条件下平行比较，可大大提升生物色谱筛选的通量和专属性。因此，发展一种能在线高通量平行分析复杂样品中的活性组分在正常和病理生物色谱模型上的亲和力的分析系统具有重要科学意义和应用价值。随着色谱柱的切换(JoverE., Matamoros V.and Bayona J.M., Characterizationof benzothiazoles, benzotriazoles and benzosulfonamides in aqueous matrixesby solid-phase extraction followed by comprehensive two-dimensional gaschromatography coupled to time-of-flight mass spectrometry, J.Chromatogr.A, 2009, 1216, 4013-4019)、峰对齐(Adcock J.L., Adams M., Mitrevski B.S.and MarriottP.J., Peak modeling approach to accurate assignment of first-dimensionretention times in comprehensive two-dimensional chromatography,Anal.Chem., 2009, 81, 6797-6804)、二维数据解析技术(Pierce Κ.Μ., Kehimkar本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物色谱比较筛选系统，其特征在于，该筛选系统包括：三个高压液相溶剂输送泵、一个自动进样器、一个恒温控制单元、一个六位柱切换阀、一个二位十通阀、两个定量环、2至6根生物色谱柱、一根整体色谱分析柱和一台质谱分析器；所述的三个高效液相色谱溶剂输送泵是指第一维高压液相溶剂输送泵一、还有第二维高压液相梯度泵二和泵三；所述的泵一与自动进样器和六位柱切换阀依次连接，2至6根生物色谱柱可依次连接在六位柱切换阀上的接口上，置于37℃恒温控制单元中，六位柱切换阀出口连接二位十通阀①位，定量环1连通十通阀②位与⑤位，定量环2连通十通阀⑦位与⑩位，十通阀③位与⑧位直接连通，十通阀⑥位为废液出口，十通阀⑨位接高压液相梯度泵二和泵三，十通阀④位接整体色谱分析柱，分流后串联一台质谱分析器。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈啸飞，曹岩，柴逸峰，张俊平，朱臻宇，吕狄亚，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31