一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法技术

本发明专利技术提供一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，对卷烟烟气进行样品前处理，采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，所述多维液相色谱质谱联用系统包括依次连接的第一维液相色谱装置、第二维液相色谱装置、质谱装置。本发明专利技术提供的一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，有效去除烟气中影响亚硝胺准确定量的干扰物质，使进入质谱样品干扰离子大大减少，具有灵敏度高、通量高的优点，适应于样品的批量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于卷烟主流烟气中重要化学成分分析的
，涉及一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，具体涉及一种采用多维液相色谱与质谱联用技术分析卷烟烟气中亚硝胺类化合物释放量的方法。
技术介绍
烟草特有亚硝胺(TSNAs，Tobacco-SpecificNitrosamines)是发现仅存在于烟草和烟气中的非挥发性亚硝胺。一般认为，烟草特有亚硝胺是在烟草调制过程中通过烟草生物碱硝化作用形成的。烟草特有亚硝胺(TSNAs)主要包括是4-(N-甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基降烟碱(NNN)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟碱(NAT)，其结构如下式。其中，NNN和NNK被国际癌症研究署(IARC)认定为一类致癌物，而NAB和NAT被证实对动物有致癌性。由于卷烟烟气有超过五千种成分且组成复杂，目前主流的方法主要有高效气相色谱-热能分析(GC-TEA)法和液相色谱质谱联用法(LC-MS)。但是，GC-TEA法存在前处理步骤烦琐、样品分析时间长、检测灵敏度较低等缺点，而LC-MS法有基质干扰严重，方法的灵敏度、检测限较低等问题。多维液相色谱(MDLC)，即将样品在第一根液相色谱柱的洗脱液依次注入后面的色谱柱进行分离的液相色谱联用技术，其与质谱(MS)联用是目前对复杂样品分离分析最受重视的手段之一，因此对于卷烟烟气中亚硝胺释放量的测定方法有必要进行进一步的探讨和研究。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，用于解决现有技术中缺乏高准确度、重现性好、检测限低、二次分离后样品不易污染质谱离子源，适应于样品批量检测的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，对卷烟烟气进行样品前处理，采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，所述多维液相色谱质谱联用系统包括依次连接的第一维液相色谱装置、第二维液相色谱装置、质谱装置。较佳地，所述卷烟烟气中亚硝胺包括有N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟草碱(NAT)。较佳地，所述样品前处理包括以下步骤：1)选取卷烟烟支，点燃后采用滤片捕集方式捕集卷烟烟气；2)将滤片进行超声萃取后静置、离心，取上清液过滤后，即得待测样品。优选地，在步骤1)中，所述滤片为剑桥滤片。所述剑桥滤片的直径为44mm。优选地，在步骤2)中，所述滤片置于EP管中进行萃取。优选地，在步骤2)中，所述萃取溶液为0.05-0.2mol/L乙酸铵(NH4Ac)水溶液。更优选地，所述萃取溶液为0.1mol/L乙酸铵(NH4Ac)水溶液。所述乙酸铵水溶液，通过称取乙酸铵，用水完全溶解后，转移至容量瓶中，加水定容得到。优选地，在步骤2)中，所述超声萃取的时间为30-50min。更优选地，所述超声萃取的时间为40min。优选地，在步骤2)中，所述静置时间为4-6min。更优选地，所述静置时间为5min。优选地，在步骤2)中，所述离心条件为：离心时间：4-6min；离心转速：2700-3300rpm。更优选地，所述离心条件为：离心时间：5min；离心转速：3000rpm。优选地，在步骤2)中，所述过滤的方式为水相滤膜过滤方式。更优选地，所述水相滤膜的孔径为0.22μm。较佳地，所述采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，包括以下步骤：A)配制标准样品；A1)分别称取NAB、NAT、NNN、NNK的标准品，加入甲醇定容，配成混合标准储备溶液；优选地，所述NAB、NAT、NNN、NNK的标准品的浓度均为0.5mg/ml。优选地，所述混合标准储备溶液中NAB、NAT、NNN、NNK的浓度均为50μg/ml。A2)分别称取d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK，加入甲醇定容，配成内标溶液；优选地，所述内标溶液中d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK的浓度均为5μg/ml。优选地，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为氘代试剂。具体的，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK分别为氘代N-亚硝基去甲基烟碱、氘代N-亚硝基新烟草碱、氘代N-亚硝基假木贼碱、氘代4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮。所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为商品化试剂，其化学性质稳定，适于作为内标。A3)分别移取不同体积的步骤A1中混合标准储备溶液，再分别加入一定体积的步骤A2中内标溶液，用甲醇定容配制为一系列不同浓度的混合标准溶液。优选地，所述混合标准溶液的浓度为0-10ng/ml。优选地，所述混合标准溶液内，d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK的浓度均为1ng/ml。B)样品定性检测：分别将步骤A)配制的标准样品和经样品前处理后待测样品进行多维液相色谱质谱联用系统检测，通过第一维液相色谱装置进行馏分后，由所述第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定，比较保留时间、质谱扫描进行定性，确定待测样品中4种亚硝胺成分；C)样品定量检测：分别将步骤A)配制的标准样品和经样品前处理后待测样品进行多维液相色谱质谱联用系统检测，通过第一维液相色谱装置进行馏分后，由所述第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定，采用内标标准曲线法进行MRM定量，获得待测样品中4种亚硝胺成分的含量。优选地，所述步骤B)或C)中，所述第一维液相色谱装置进行馏分是将步骤A1配制的混合标准储备溶液和经样品前处理后待测样品溶液通过第一维液相色谱装置进行馏分。优选地，所述步骤B)或C)中，所述第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定是指将步骤A3配制的混合标准溶液与待测样品的稀释溶液通过第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定。优选地，所述步骤B)或C)中，所述第一维液相色谱装置的色谱条件为：第一维液相色谱：正相液相色谱；色谱柱：强阳离子交换色谱柱(SCX)；检测波长：220-240nm；柱温：25-35℃；流速：0.5-1.5mL/min；进样量：5-15μl；流动相A相：5-15mmol/LKH2PO4+1-10mmol/LH3PO4+80-90％H2O+10-20％CH3CN(pH＝2-4)；流动相B相：5-15mmol/LKH2PO4+1-10mmol/LH3PO4+0.1-1.0mol/LKCl+80-90％H2O+10-20％CH3CN(pH＝2-4)；梯度洗脱。更优选地，所述第一维液相色谱装置的色谱条件为：第一维液相色谱：WatersACQUITYUPLC；色谱柱：WatersSpherisorbS5SCX(4.6*150mm,5μm)；检测波长：230nm；柱温：30℃；流速：1mL/min；进样量：10μl；流动相A相：10mmol/LKH2PO4+5mmol/LH3PO4+85％H2O+15％CH3CN(pH＝3)；流动相B相：10mmol/LK本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，对卷烟烟气进行样品前处理，采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，所述多维液相色谱质谱联用系统包括依次连接的第一维液相色谱装置、第二维液相色谱装置、质谱装置。

【技术特征摘要】
1.一种卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，对卷烟烟气进行样品前处理，采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，所述多维液相色谱质谱联用系统包括依次连接的第一维液相色谱装置、第二维液相色谱装置、质谱装置。2.根据权利要求1所述的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，其特征在于，所述卷烟烟气中亚硝胺包括有N-亚硝基去甲基烟碱、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮、N-亚硝基假木贼碱和N-亚硝基新烟草碱。3.根据权利要求1所述的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，其特征在于，所述样品前处理包括以下步骤：1)选取卷烟烟支，点燃后采用滤片捕集方式捕集卷烟烟气；2)将滤片进行超声萃取后静置、离心，取上清液过滤后，即得待测样品。4.根据权利要求1所述的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，其特征在于，所述采用多维液相色谱质谱联用系统对前处理所得待测样品进行定性定量分析，包括以下步骤：A)配制标准样品：配制混合标准储备溶液、内标溶液和混合标准溶液；B)样品定性检测：分别将步骤A)配制的标准样品和经样品前处理后待测样品进行多维液相色谱质谱联用系统检测，通过第一维液相色谱装置进行馏分后，由所述第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定，比较保留时间、质谱扫描进行定性，确定待测样品中4种亚硝胺成分；C)样品定量检测：分别将步骤A)配制的标准样品和经样品前处理后待测样品进行多维液相色谱质谱联用系统检测，通过第一维液相色谱装置进行馏分后，由所述第二维液相色谱装置进行分离，再由所述质谱装置进行测定，采用内标标准曲线法进行MRM定量，获得待测样品中4种亚硝胺成分的含量。5.根据权利要求4所述的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析方法，其特征在于，所述步骤B)或C)中，所述第一维液相色谱装置的色谱条件为：第一维液相色谱：正相液相色谱；色谱柱：强阳离子交换色谱柱；检测波长：220-240nm；柱温：25-35℃；流速：0.5-1.5mL/min；进样量：5-15μl；流动相A相：5-15mmol/LKH2PO4+1-10mmol/LH3PO4+80-90％H2O+10-20％CH3CN，pH＝2-4；流动相B相：5-15mmol/LKH2PO4+1-10mmol/LH3PO4+0.1-1.0mol/LKCl+80-90％H2O+10-20％CH3CN，pH＝2-4；梯度洗脱。6.根据权利要求5所述的卷烟烟气中亚硝胺释放量的分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，刘百战，王磊君，吴达，
申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：上海;31