用于检测前列腺癌的miRNAs制造技术

本发明专利技术涉及一种用于前列腺癌诊断的miRNAs及试剂盒，属于分子生物学技术领域。其中的miRNAs包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，致癌性miRNAs在real-time PCR方法检测中表达量升高，抑癌性miRNAs在real-time PCR方法检测中表达量降低。根据前列腺癌的程度不同，采用不同的致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，分别针对性进行诊断。采用本发明专利技术所提供技术方案，可以快速、简单、高效、稳定的获得前列腺癌的诊断和预后评判结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学
，具体涉及用miRNAs进行前列腺癌的诊断。通过检测前列腺癌组织和作为对照的良性前列腺增生组织中miRNAs的表达，对高低恶性程度不同的前列腺癌进行诊断。 
技术介绍
在现有的研究中，临床上多采用蛋白质或某基因的mRNA水平进行肿瘤诊断、预后分析和肿瘤的治疗，但测试过程中需要分析成千上万的蛋白质或mRNA，测试过程较为繁琐；且测试过程中所选用的mRNA易降解，测试过程不稳定。 miRNA最早发现于1991年线虫体内，是一种内源性的非编码RNA，长度为18-25nt，在进化上比较保守，是基因调控因子，能够在诱导的沉默复合物（RISC）内通过与其靶mRNA全部或部分互补来识别信使RNA，并因此负性调节蛋白质的表达。生物信息学预测总共30%的蛋白质表达被miRNAs调控。miRNAs来源于基因组编码的前体miRNAs，多数是通过RNA聚合酶II从单个基因转录的，或者来自同时转录的多顺反子，在细胞核中被核酸酶III（Drosha）加工，通过核输出蛋白Exportina-5依赖性的机制和Ran-GTP依赖性的机制进入细胞质，并且被另一种核酸酶III（Dicer）进一步加工成为其成熟的形式。 迄今为止，miRBase数据库已鉴定公布了人类2582条miRNAs。然而，miRNAs的功能和靶基因还没有得到完整的解释和证实。不同组织细胞的生理异常中，某些miRNAs具有明显的异常表达，比如：肿瘤发生与某些miRNAs的表达和功能异常有密切的关系，相当一部分得到注释的miRNAs在基因组上被定位于肿瘤相关的脆性位点，因此，对不同类型肿瘤组织中具体miRNA的表达和功能异常的研究越来越受到人们的关注。 miRNAs用于前列腺癌的诊断：有些miRNAs的降低导致了其致瘤靶基因的调控紊乱，进而加速了肿瘤的转化。在前列腺癌中，miR-15a、miR-16-1的表达下调，由于Bcl-2mRNA的3’-UTR区有miR-15a、miR-16-1的结合位点，故miR-15a、miR-16-1的表达缺失导致抗凋亡基因Bcl-2蛋白的高表达，进而抑制细胞凋亡进程，所以miR-15a、miR-16-1被认为是诱导原癌基因Bcl-2mRNA失活的肿瘤 抑制剂。研究者早发现前列腺特异抗原（PSA）在前列腺癌诊断中是有局限性的。因此，整合血液PSA水平和某些生物标志物miRNA表达水平，如：miR-21和miR-141，可以将阳性前列腺癌预测从40%提高到87.5%，可以提高预测前列腺癌的精度，也有预后预测能力（恶性能力，转移行为和总生存期等）。近十年来，随着miRNAs发现和研究的快速进展，miRNAs表达谱对阐明疾病发生机制、诊断、预后评估和提供新的治疗策略发挥重要作用。而且，miRNAs的突变或异常表达以及它们所控制的通路可能成为有用的治疗靶点。因此，miRNAs是肿瘤分类，早期检测、疾病预后、制定治疗方案和治疗靶点等方面的重要工具，然而测试过程中，与前列腺癌发病相关联的miRNAs始终无法确认，这就给前列腺癌的诊断、分类、治疗靶点和治疗方案的制定、疾病预后等造成了严重干扰，不利于治疗。 申请人采用深度测序的方法对高低恶性程度不同的前列腺癌组织和良性前列腺增生组织中miRNAs的表达进行比较，并进一步研究高恶性前列腺癌组织、低恶性前列腺癌组织的miRNAs表达谱，最终确定了一个精确的前列腺癌诊断和分类系统，也为发现新型治疗靶点提供了理论依据。本申请案由此产生。 
技术实现思路
针对临床上前列腺癌的诊断问题，本专利技术的目的一提供了一种用于检测前列腺癌的miRNAs，包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表达量升高的miRNAs，所述的抑癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表达量降低的miRNAs。其中，高恶性前列腺癌（Gleason评分＞7）中，致癌性miRNAs为miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-144-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，可用于高恶性前列腺癌的诊断；低恶性前列腺癌（Gleason评分≤7）中，致癌性miRNAs为miR-125b-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a和miR-486-5p，可用于低恶性前列腺癌的诊断。 本专利技术的目的二在于提供一种用于前列腺癌诊断的试剂盒，包含致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表 达量升高的miRNAs，抑癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表达量降低的miRNAs。其中，高恶性前列腺癌（Gleason评分＞7）中，致癌性miRNAs为miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-144-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，可用于高恶性前列腺癌的诊断；低恶性前列腺癌（Gleason评分≤7）中，致癌性miRNAs为miR-125b-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a和miR-486-5p，可用于低恶性前列腺癌的诊断。 本专利技术采用深度测序技术对前列腺癌组织和良性前列腺增生组织中miRNAs的表达情况进行了研究，深度测序技术可以得到几乎所有的miRNAs差异表达信息，包括已知的miRNAs和未知的miRNAs，为我们发现与前列腺癌发生、发展密切相关的miRNAs提供了重要的技术支持和保障。 本专利技术进一步通过real-time PCR方法验证差异表达的miRNAs，并且发现了高恶性前列腺癌（Gleason评分＞7）中，高表达的miRNAs有：miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，是致癌性miRNAs；而低表达的miRNAs有：miR-144-3p、miR本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测前列腺癌的miRNAs，其特征在于：包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs为real‑time PCR方法检测中表达量升高的miRNAs，所述的抑癌性miRNAs为real‑time PCR方法检测中表达量降低的miRNAs。

【技术特征摘要】
1.用于检测前列腺癌的miRNAs，其特征在于：包括致癌性miRNAs和抑癌性
miRNAs，所述的致癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表达量升高的
miRNAs，所述的抑癌性miRNAs为real-time PCR方法检测中表达量降低的
miRNAs。
2.如权利要求1所述的用于检测前列腺癌的miRNAs，其特征在于：所述的致癌
性miRNAs为miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、
miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-144-3p、miR-221-3p、
miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，
可用于高恶性前列腺癌的诊断；致癌性miRNAs为miR-125b-5p、miR-139-3p、
miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、
miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs为miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a
和miR-486-5p，可用于低恶性前列腺癌的诊断。
3.一种用于前列腺癌诊断的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中包含致癌性

【专利技术属性】
技术研发人员：宋春娇，陈欢，余建华，徐潮阳，
申请(专利权)人：绍兴市人民医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33