【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及测定生物样品中组织蛋白酶B潜在可用活性的方法,包括组织蛋白酶B活性形式的活性,和能从样品中存在的前体形式组织蛋白原B激活的组织蛋白酶B形式,和能被激活且其蛋白酶活性在样品中被蛋白酶抑制剂抑制的组织蛋白酶B形式。
技术介绍
为了测定组织提取物或体液如血清中的酶浓度,可用酶检测和免疫学试验如ELISA。在医学分析和临床诊断情况中,测定样品中完整和活性酶的存在量通常很重要,从而能说明病因学、疾病效果和预后。酶的永久失活形式如变性酶或酶片段通常不相关,因而不考虑测定这种酶且一般应该不考虑。然而,其他失活酶形式如其活性短暂且由抑制剂或酶前体可逆性抑制的酶(称为酶原)可在疾病成因、影响和/或预测中发挥决定性作用。如果生物学过程需要其酶活性,这种失活酶形式可在某些情况下转变成其活性形式。在这些情况中,例如,所述抑制剂通过某些机制灭活或从酶中撤出,或者酶原转变为其活性形式。组织或体液中活性和短暂失活酶的总体浓度对于特定疾病有重要启示。测定酶浓度的酶检测使用由活性酶进行或催化的这类反应。然而,如果所述酶形式也能包括在内,作为暂时 抑制失活形式和/或作为失活酶原在生物样品中可用(例如,这通常是用蛋白酶的情况),则这些酶形式由于其失活而不能用这类测试检测。因此,样品中可测量的酶活性通常不与真正可用的酶活性对应,因为至少一部分酶活性由抑制剂抑制或以酶原的失活形式存在。熟知在感染癌症的癌症患者组织样品中,溶酶体半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶B水平相较健康人的对应组织样品增加。因此,认为组织蛋白酶B是癌症疾病中的诊断和预后因子。一部分组织蛋白酶B是胱抑素抑制形式。此情况中考 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.02 DE 102010025970.51.一种测定生物样品中组织蛋白酶B潜在可用活性的方法,包括组织蛋白酶B活性形式的活性,能从样品中存在的前体形式组织蛋白原B激活的组织蛋白酶B形式,和能被激活且在样品中由蛋白酶抑制剂抑制其活性的组织蛋白酶B形式,所述方法有下列步骤 a)通过以下方式将所述样品中存在的组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式 a.1)将所述样品接触第一酶(蛋白水解酶),所述酶的功能性是通过蛋白水解消化将组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式,或 a.1i)将pH值降低到某一值,在该处组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式, b)通过将所述样品接触第二酶(抑制剂结合酶)来耗尽所述样品中组织蛋白酶B的游离蛋白酶抑制剂或阻遏其抑制剂功能并从组织蛋白酶B受抑制形式中撤出蛋白酶抑制剂,所述第二酶能结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B,其中 b.1)所述第一酶(蛋白水解酶)和所述第二酶(抑制剂结合酶)是相同的酶,前提是所述酶具有通过蛋白水解消化将组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式以及结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂的功能且对该蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B, 或 b.1i)若使用,所用的第二酶(抑制剂结合酶)不同于所述第一酶(蛋白水解酶), 其中 -第二酶(抑制剂结合酶)是没有降解组织蛋白酶B的蛋白水解活性的酶,或 -第二酶(抑制剂结合酶)是有降解组织蛋白酶B的蛋白水解活性的酶,所述第二酶降解组织蛋白酶B的该蛋白水解活性在所述样品中于步骤b)的反应时间后失活,或所述第二酶从所述样品中移出并由某一酶替代,所述某一酶没有降解组织蛋白酶B的活性但能结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B, c)将所述样品接触组织蛋白酶B的底物并记录由蛋白酶组织蛋白酶B催化的底物蛋白水解反应。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,具有通过蛋白水解消化将组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式的功能的所述第一酶(蛋白水解酶)是没有降解组织蛋白酶B的蛋白酶活性的水解酶,优选胃蛋白酶或组织蛋白酶D或组织蛋白酶C或嗜热菌蛋白酶或链霉蛋白酶,特别优选胃蛋白酶或组织蛋白酶D,且所用的第二酶(抑制剂结合酶)不同于第一酶(蛋白水解酶)。3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所用的第二酶(抑制剂结合酶)是木瓜蛋白酶,具有结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂的功能且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B,其中木瓜蛋白酶降解组织蛋白酶B的蛋白酶活性在所述样品中于反应时间后活化或木瓜蛋白酶从所述样品中移出并由某一酶替代,所述某一酶没有降解组织蛋白酶B的蛋白酶活性但具有结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂的功能且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B。4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述使用的第一酶(蛋白水解酶)和第二酶(抑制剂结合酶)是相同的酶,即木瓜蛋白酶,其具有通过蛋白水解消化将组织蛋白原B转变成组织蛋白酶B活性形式以及结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂的功能并且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B,其中木瓜蛋白酶降解组织蛋白酶B的蛋白酶活性在反应时间后活化或木瓜蛋白酶从所述样品中移出并由某一酶替代,所述某一酶没有降解组织蛋白酶B的蛋白酶活性但具有结合组织蛋白酶B的蛋白酶抑制剂的功能且对所述蛋白酶抑制剂的亲和性高于组织蛋白酶B。5.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,所述样品中的木瓜蛋白酶在反应时间后转化成改性木瓜蛋白酶,所述改性木瓜蛋白酶就组织蛋白酶B降解而言具有失活的蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员:H·J·迈耶,H·J·莫克,
申请(专利权)人:帕普斯特许可有限两合公司,
类型:
国别省市:
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