【技术实现步骤摘要】
检测细胞中病毒载体拷贝数的引物和探针、试剂盒、方法
[0001]本专利技术涉及细胞产品质量检测
,尤其是指检测细胞中病毒载体拷贝数的引物和探针、试剂盒、方法。
技术介绍
[0002]细胞产品制备质量控制以及患者注射细胞产品后的随访,均要求检测外源病毒载体基因拷贝数,以监控细胞内外源病毒载体基因拷贝数的变化。出于安全性考虑,现行政策要求:细胞产品中的外源病毒载体基因拷贝数不高于5拷贝/细胞。对患者体内的外源CAR或TCR拷贝数进行间接追踪,有利于评估CAR
‑
T或TCR
‑
T细胞在体内的存活。
[0003]现时,国内外相关研究中,普遍使用实时荧光定量聚合酶链式反应法(qPCR法)进行基因拷贝数的测定。qPCR法是一种灵敏度高、特异性强且可通过实时监控进行定量的核酸检测技术。qPCR法最常用的有两种技术:一种是荧光染料法,但其与DNA亲和力强,通常对PCR反应有抑制作用;另一种是荧光探针法,为序列特异性的TaqMan探针,灵敏度高,特异性强,已经被应用于生物制药的一些领域。国外已有相关文献研究利用探针qPCR法,建立外源基因拷贝数的检测方法,但针对某一采用特定载体的细胞的检测方法并不适用于工作载体或类型不同的细胞的质量控制检测中,对应的引物选择也存在差异。使用qPCR法检测细胞拷贝数时,既要保证能检出目标载体拷贝数,又要屏除细胞本身的核酸序列干扰,所以,引物的选择影响检测结果的可靠性和准确性。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题是:设计 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.检测细胞基因组中病毒载体拷贝数的引物和探针,其特征在于,引物由Primer
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F和Primer
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R组成,所述Primer
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F的序列示于SEQ ID NO:1,所述Primer
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R的序列示于SEQ ID NO:2,探针的序列示于SEQ ID NO:3;所述引物用于扩增病毒载体的部分序列和/或相应的互补序列,所述病毒载体的部分序列示于SEQ ID NO:4。2.一种试剂盒,其特征在于,包含质粒标准品以及权利要求1所述的检测细胞基因组中病毒载体拷贝数的引物和探针。3.如权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,还包含Premix Ex Taq、ROX Reference DyeⅡ和健康人基因组DNA。4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包含UltraPure water和孔板。5.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述Primer
‑
F的浓度为1~100μmol/L,所述Primer
‑
F的浓度为1~100μmol/L,所述探针的浓度为1~100μmol/L,所述质粒标准品的浓度为1
×
106~9
×
109copies/μL。6.如权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述Primer
‑
F的浓度为10μmol/L,所述Primer
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F的浓度为10μmol/L,所述探针的浓度为10μmol/L,所述质粒标准品的浓度为9
×
107~2
×
108copies/μL的MSGV1标准品。7.一种检测细胞基因组中...
【专利技术属性】
技术研发人员:程玉,王俊涛,林庆卿,王明军,
申请(专利权)人:深圳市因诺转化医学研究院,
类型:发明
国别省市:
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