一种用于检测慢病毒载体拷贝数的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种用于检测慢病毒载体拷贝数的方法及其应用。具体而言，该方法包括对于慢病毒载体上的WPRE、HIV-1Ψ和RRE元件中的至少一种进行检测。经研究发现，通过对慢病毒载体上的上述元件进行检测，能够稳定且有效地检测出整合入CAR-T细胞基因组中整合的慢病毒载体拷贝数，且不受CART靶点和技术更新换代的限制，具有检测通用性。具有检测通用性。具有检测通用性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测慢病毒载体拷贝数的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种用于检测慢病毒载体拷贝数的方法及其应用。

技术介绍

[0002]随着生物技术的发展，基因治疗已成为治疗感染性疾病、遗传疾病、神经系统疾病以及肿瘤的焦点。用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体。目前，常用的病毒载体包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒和慢病毒载体四大系统，其中腺病毒与腺相关病毒不能将外源基因整合到基因组中，且外源基因表达时间比较短；而逆转录病毒和慢病毒能够随机将外源基因整合到细胞的基因组中，实现外源基因的长久持续性表达。
[0003]与逆转录病毒比较而言，慢病毒载体因为载体容量高、病毒滴度高、不受细胞分裂时期限制且无被基因沉默的风险，在临床上常常作为疾病的治疗工具。
[0004]慢病毒包装系统是以慢病毒基因组为基础，人为去除病毒复制所需要的基因，同时，插入用于基因表达、敲除或沉默的元件构建而成。目前，常用的为二代和三代慢病毒包装系统，主要由包装质粒、包膜质粒和穿梭质粒构成，将这些质粒共转染到293T细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测慢病毒载体拷贝数的方法，其特征在于，其包括：检测来自慢病毒载体上的基因元件；所述基因元件选自WPRE、HIV-1Ψ和RRE中的至少一种。2.根据权利要求1所述的用于检测慢病毒载体拷贝数的方法，其特征在于，所述基因元件的检测方式为：将能够扩增所述基因元件的引物组与提取自目标CAR-T细胞的待测核酸样本混合以进行PCR扩增；优选地，所述待测核酸样本为DNA样本。3.根据权利要求2所述的用于检测慢病毒载体拷贝数的方法，其特征在于，当所述基因元件为WPRE元件时，所述引物组包括序列如SEQ ID No.1～2所示的引物对和/或序列如SEQ ID No.3所示的探针，或者所述引物组包括序列如SEQ ID No.4～5所示的引物对和/或序列如SEQ ID No.6所示的探针；当所述基因元件为HIV-1Ψ元件时，所述引物组包括序列如SEQ ID No.7～8所示的引物对和/或SEQ ID No.9所示的探针；当所述基因元件为RRE元件时，所述引物组包括序列如SEQ ID No.10～11所示的引物对和/或序列如SEQ ID No.12所示的探针，或者所述引物组包括序列如SEQ ID No.13～14所示的引物对和/或序列如SEQ ID No.15所示的探针。4.根据权利要求3所述的用于检测慢病毒载体拷贝数的方法，其特征在于，所述引物组中的探针5
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端标记有荧光基团，3
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端标记有淬灭基团；优选地，所述荧光基团选自：VIC、FAM、TET、HEX、CY3、CY5、Texas Red、LC RED640和LC RED705中的任意一种；优选地，所述淬灭基团选自：BHQ1、BHQ2和BHQ3中的任意一种。5.根据权利要求3所述的用于检测慢病毒载体拷贝数的方法，其特征在于，PCR扩增的反应体系：10
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Taq2.4～2.6μl，24～26mM dNTP 0.1～0.3μl...

【专利技术属性】
技术研发人员：王保垒，蔡统聪，彭亮，王先进，都晓龙，叶立军，黎宣位，
申请(专利权)人：深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：