快速逆转录定量聚合酶链式反应制造技术

本文提供了用于快速检测样品中的RNA的方法。所述方法包括提供含有所述样品、扩增试剂和具有RNA依赖性聚合酶活性和DNA依赖性聚合酶活性两者的聚合酶的反应混合物；通过孵育不超过5分钟的逆转录时间将所述RNA逆转录成DNA；以及通过执行包括多个扩增循环的热循环方案来扩增所述DNA，其中每个扩增循环至少包括变性步骤和退火步骤。括变性步骤和退火步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】快速逆转录定量聚合酶链式反应
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年1月17日提交的序列号为62/793,657的美国临时专利申请的优先权，该美国临时专利申请据此通过引用整体并入本文。


[0003]本文提供了用于快速扩增和检测样品中的RNA的方法。在特定实施方案中，所公开的方法可用于临床诊断，诸如用于检测受试者中的病毒感染。

技术介绍

[0004]传染病常通过核酸测试诊断。然而，最广泛实践的核酸扩增方法聚合酶链式反应(PCR)或定量或实时PCR(qPCR或RT
‑
PCR)既耗时又耗能。RNA的检测对于临床诊断，尤其是对于病毒感染也可为必不可少的，但是RNA不能通过PCR直接扩增。它需要第一逆转录步骤，在该第一逆转录步骤中称为逆转录酶的酶酶促地从RNA模板制造DNA拷贝(cDNA)。在RT
‑
qPCR中，然后在PCR反应中扩增该cDNA。
[0005]RT
‑
qPCR测定可以在一步或两步反应中执行。在一步法RT
‑<br/>qPCR中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测样品中靶RNA的方法，所述方法包括：a.提供含有所述样品、扩增试剂和具有RNA依赖性聚合酶活性和DNA依赖性聚合酶活性两者的聚合酶的反应混合物；b.通过孵育不超过5分钟的逆转录时间将所述RNA逆转录成DNA；c.通过执行包括多个扩增循环的热循环方案来扩增所述DNA，其中每个扩增循环至少包括变性步骤和退火步骤。2.如权利要求1所述的方法，其中所述扩增试剂包括三磷酸脱氧核苷酸、缓冲液、辅因子和寡核苷酸引物，所述扩增试剂被配置用于扩增所述样品中的所述靶RNA。3.如权利要求2所述的方法，其中所述寡核苷酸引物包括正向引物和反向引物。4.如权利要求2所述的方法，其中所述寡核苷酸引物以至少6μM的浓度提供。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸引物以12μM的浓度提供。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述聚合酶以至少0.4U/μL的浓度提供。7.如权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述聚合酶以0.8U/μL的浓度提供。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中所述辅因子是镁盐或锰盐。9.如权利要求8所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：