一种库弗细胞活性抑制剂及其在制备治疗急性肝衰竭药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，提供了一种库弗细胞活性抑制剂，该活性抑制剂为重组人IL‑1受体拮抗剂(rhIL‑1Ra)。通过实验发现，rhIL‑1Ra显著抑制高表达IL‑1RI的大库弗细胞的活性，抑制库弗细胞的超微结构和吞噬活性，进而抑制库弗细胞活性能显著减少肝细胞凋亡并促进肝细胞增殖。结合上述结论，重组人IL‑1受体拮抗剂(rhIL‑1Ra)通过抑制库弗细胞的活性减少了肝细胞凋亡且促进了肝细胞的再生，为治疗急性肝衰竭和肝损伤保护的药物提供策略。

A Kupffer cell activity inhibitor and its application in the preparation of drugs for the treatment of acute liver failure

【技术实现步骤摘要】
一种库弗细胞活性抑制剂及其在制备治疗急性肝衰竭药物中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种库弗细胞活性抑制剂及其在制备治疗急性肝衰竭药物中的应用。
技术介绍
急性肝衰竭是一种起病迅速、死亡率高的严重疾病，可由肝炎病毒、药物、手术等条件引起(Bernaletal.，2015)。在临床方面，目前还没有明显提高急性肝衰竭患者生存率的药物。目前公认的治疗急性肝衰竭的唯一有效方法是肝移植。然而，由于供肝来源的缺乏和治疗费用的昂贵，这种手术仍不能广泛应用(Leeetal.，2015，2008)。IL-1Ra是IL-1家族的重要成员。这个家庭的主要成员包括两个活性配体，leukin-1(IL-1α)和interleukin-1β(IL-1β)；一种被称为IL-1Ra的拮抗剂；和两个受体，白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素-1受体II型(IL-1RII)。IL-1Ra和IL-1与IL-1RI具有相似的亲和力。然而，与IL-1不同，IL-1Ra不能激活受体。因此，它具有抑制IL-1生物活性的作用。IL-1、IL-1Ra、IL-1Ri是高度保守的IL-1系统，广泛参与多种炎症反应。血清IL-1Ra和IL-1β水平的比率与最终炎症性疾病的结果高度相关(Dinarello，2009，2011；奥尼尔，2008)。库弗细胞是存在于肝脏的巨噬细胞，分泌与急性肝衰竭密切相关的IL-1等细胞因子(Canbayetal.，2003；Kolios等，2006；Streetz等，2000；Zhangetal.，2011)。对部分肝切除术诱导的急性肝衰竭大鼠的研究表明，在术后库弗细胞明显被激活，而在对照组中，它们在形态上表现正常(Boermeesteretal.，1995)。此外，IL-1Ra抑制IL-1活性可显著改善急性肝衰竭大鼠肝脏的病理变化，几乎未发现激活的库弗细胞(Streetzetal.，2000)。部分肝切除术诱导的急性肝衰竭大鼠的库弗细胞数量在术后72小时内明显升高，但在库弗细胞中的血小板调节炎性细胞因子的帮助下，术后仅12小时即恢复正常水平(Lopez等，2016)。但是，目前关于库弗细胞的活性是否和IL-1家族有关还未有报道，而且亟待一种可以替代肝移植手术的可以有效治疗急性肝衰竭的药物。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供了一种库弗细胞活性抑制剂及其在制备治疗急性肝衰竭药物中的应用。该抑制剂为重组人IL-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)，由实验结果发现，GdCl3和rhIL-1Ra显著抑制库弗细胞的吞噬活性；体外共培养条件下，库弗细胞明显抑制了肝细胞的增殖，因此rhIL-1Ra为制备治疗急性肝衰竭的药物提供了新的策略。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面是提供一种库弗细胞活性抑制剂，所述抑制剂为重组人IL-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)。进一步地，所述抑制剂抑制库弗细胞的超微结构和吞噬活性。本专利技术的第二方面是提供该库弗细胞活性抑制剂在制备治疗急性肝衰竭的药物中的应用。进一步地，所述药物包括重组人IL-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)和药学上可以接受的载体。进一步地，载体选自以下任一种或多种：填充剂、粘合剂、增溶剂、崩解剂和助流剂。进一步地，药物的剂型选自以下任一种：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、口服液和注射剂。本专利技术采用上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供一种库弗细胞活性抑制剂，即重组人IL-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)。因为库弗细胞能显著抑制肝细胞的增殖，rhIL-1Ra可以抑制库弗细胞的超微结构和吞噬活性，所以rhIL-1Ra进而为治疗急性肝衰竭的药物提供了策略。附图说明图1为本专利技术一实施例中经rhIL-1Ra和GdCl3处理的乙酰氨基酚诱导的急性肝衰竭小鼠与对照组小鼠的生存率对比图；图2为本专利技术一实施例中各组ALF小鼠Kupffer(库弗)细胞活性的检测对比图(其中，图A为CD163免疫荧光检测的代表性图片(x200)；图B为IL-1RI免疫荧光检测的代表性图片(x200)；图C为A图和B图的叠加效果图；图D为在0h、3h和6h各组大Kupffer细胞数量对比图；图E为在9h时，各组大Kupffer细胞百分比柱状图；图F为各组高表达IL-1RI的大Kupffer细胞百分比的柱状对比图)；图3为本专利技术一实施例中各组Kupffer细胞和肝细胞在透射电镜下的超微结构(×5000)对比图；图4为本专利技术一实施例中各组APAP诱导的ALF小鼠Kupffer细胞的吞噬活性表达图(其中，图A-D分别为3h、6h、9h、0h各处理组代表性的SPIO-MRI图片；图E和图F分别为各组SNR相对变化值的折线图和柱状图)；图5为本专利技术一实施例中各组早期和中期小鼠IL-1β和IL-1Ra分泌水平以及IL-1Ra/IL-1β的变化图及柱状对比图(其中，图A和图B为各组IL-1β分泌水平随时间变化的对比图；图C和图D为各组IL-1Ra分泌水平随时间变化的对比图；图E和图F为各组IL-1Ra/IL-1β比值随时间变化的对比图)；图6为本专利技术一实施例中各培养条件对肝细胞活性的影响结果对比图(其中，图A为使用免疫磁珠分选法分选Kupffer细胞(CD163+)的结果图；图B为各组细胞(Kupffer细胞单独培养、Kupffer细胞与肝细胞(1:1)分层三维共培养及肝细胞单独培养)分别与不同比例稀释(1/1，1/5，1/10，1/100，1/1000)的ALF小鼠(750mg/kg的APAP造模后6h)血清共培养48h后，CCK8法检测Kupffer细胞、肝细胞活性的结果的对比柱状图)。具体实施方式本专利技术提供了一种库弗细胞活性抑制剂，并提供了其在制备治疗急性肝衰竭药物中的应用。下面通过具体实施例对本专利技术进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本专利技术，但是下述实施例并不限制本专利技术范围。以下实施例中使用的抗体和试剂：对乙酰氨基酚、GdCl3、percoll和胶原酶IV购自美国密苏里州圣路易斯的Sigma-Aldrich公司(A7085-100G、G7532-5G、P1644和C5138)、兔多克隆抗体IL-1RI、羊多克隆抗体CD163、驴抗兔二抗购自美国加州圣克鲁斯市圣克鲁斯生物化学公司(sc-689、sc-18796、sc-2313)；ELISA试剂盒检测mIL-1β和mIL-1Ra从博士德购买，武汉，中国(EK0394和EK0783)；汉克斯的平衡盐溶液(HBSS)、胎牛血清(FBS)和RPMI-1640(Gibco，GrandIsland，NY，USA)、超顺磁氧化铁(SPIO，上海，中国)、细胞计数试剂盒(CCK8，Dojindo实验室，熊本，日本)、磁珠(MiltenyiBiotec，BergischGladbach，德国)；rhIL-1Ra在本实验室大肠杆菌中表达纯化，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种库弗细胞活性抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为重组人IL-1受体拮抗剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种库弗细胞活性抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为重组人IL-1受体拮抗剂。


2.根据权利要求1所述的一种库弗细胞活性抑制剂，其特征在于，所述抑制剂可以抑制库弗细胞的超微结构和吞噬活性。


3.一种如权利要求1-2任一项所述的库弗细胞活性抑制剂在制备治疗急性肝衰竭的药物中的应用。


4.根据权利要求3所述的库弗细胞活性抑制剂在制备治疗急性肝衰竭的药物中的应用，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡建军，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31