The invention discloses a monoclonal antibody against human B7 8209H3, including heavy and light chains, and the amino acid sequence of the heavy chain variable region (mVH) is the same as SEQ ID NO.1, as follows: EVQLVESGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGNO.2 phase Similarly, the details are as follows: DILMTQSPSSMSVSLGDTVSITCHASQDISSNIGWLQGPGNSFKGLIYHGTNLED GVPSRFSGSGADYSLTISGLESEDFADYTLQSVFPYTFGGTKLEIK. The invention also discloses a detection method, an application and a kit thereof. The monoclonal antibody against human B7 H3 provided by the invention can be used for the immunohistochemical detection of tumor tissues, improve the accuracy of the immunohistochemical detection of tumor specimens, contribute to the diagnosis of malignant tumors, determine the primary location and pathological typing, and improve the diagnostic accuracy of tumors, especially poorly differentiated or undifferentiated tumors.
【技术实现步骤摘要】
一种抗人B7-H3单克隆抗体的制备方法及其免疫组化检测方法及其应用及其试剂盒
本专利技术涉及生物
,具体涉及一种抗人B7-H3单克隆抗体的制备方法及其免疫组化检测方法及其应用及其试剂盒。
技术介绍
近年来,越来越多的研究发现,B7-H3分子异常表达在各种肿瘤组织,如卵巢癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、结直肠癌、前列腺癌等。临床回顾性病例分析发现,B7-H3的表达与临床病理学特征存在相关性,通过生存分析发现高表达B7-H3的病例预后差,死亡率高,并且在肿瘤患者外周血中也发现了高水平的可溶性B7-H3(sB7-H3)。此外,研究还发现,B7-H3与移植免疫排斥和自身免疫病理相关,转染了B7-H3基因的移植物可以抑制宿主T细胞的活性,从而延长移植物的生存时间。这些研究结果都提示,B7-H3是个重要的负性共刺激分子,具有重要的研究和运用价值。人类很多肿瘤中,B7-H3在mRNA和蛋白水平上均有表达并且与病人的预后呈负相关。目前已有不少文献对各类肿瘤进行回顾性研究,从临床角度分析B7-H3在抗肿瘤免疫中的功能,包括卵巢癌、食管癌、肾癌、胃癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和黑色素瘤。B7-H3异常表达于肿瘤组织或肿瘤患者的外周血中,并和年龄、病理类型、肿瘤生物学效应和患者生存率密切相关。因此,研制鼠抗人B7-H3单克隆抗体可以为进一步研究该分子在肿瘤中的作用奠定物质基础,同时也为探明B7-H3信号传导通路及机制提供有效的研究手段,有功能的抗人B7-H3单克隆抗体更有望成为肿瘤生物治疗的潜在靶点。
技术实现思路
为了克服现有技术当中的缺陷,本专利技术的目的之一 ...
【技术保护点】
1.一种抗人B7‑H3单克隆抗体,包括重链和轻链,其特征在于,所述重链可变区(mVH)的氨基酸序列与SEQ ID NO.1相同,具体如下:EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSRYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDDGRNTYDRDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTALYYCVRHRAITTARFDYWGQGTSLTVSS;所述轻链可变区(mVL)的氨基酸序列与SEQ ID NO.2相同,具体如下:DILMTQSPSSMSVSLGDTVSITCHASQDISSNIGWLQQGPGNSFKGLIYHGTNLEDGVPSRFSGSGSGADYSLTISGLESEDFADYYTLQSVQFPYTFGGGTKLEIK。
【技术特征摘要】
1.一种抗人B7-H3单克隆抗体,包括重链和轻链,其特征在于,所述重链可变区(mVH)的氨基酸序列与SEQIDNO.1相同,具体如下:EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSRYAMSWVRQTPEKRLEWVATISDDGRNTYDRDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTALYYCVRHRAITTARFDYWGQGTSLTVSS;所述轻链可变区(mVL)的氨基酸序列与SEQIDNO.2相同,具体如下:DILMTQSPSSMSVSLGDTVSITCHASQDISSNIGWLQQGPGNSFKGLIYHGTNLEDGVPSRFSGSGSGADYSLTISGLESEDFADYYTLQSVQFPYTFGGGTKLEIK。2.如权利要求1所述的一种抗人B7-H3单克隆抗体,其特征在于,所述所述重链可变区(mVH)具有三个高变区为:GFTFSRYA、ISDDGRNT、VRHRAITTARFDY。3.如权利要求1所述的一种抗人B7-H3单克隆抗体,其特征在于,所述轻链可变区(mVL)具有三个高变区为:QDISSN、HGT、LQSVQFPYT。4.如权利要求1-3任意一项所述的一种抗人B7-H3单克隆抗体在重链和轻链可变区的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)B7-H3单克隆抗体的杂交瘤的制备;(1.1)免疫小鼠;(1.2)细胞培养;(1.3)融合与筛选;(2)B7-H3鼠/人嵌合抗体的制备;(2.1)提取杂交瘤细胞的cDNA:从该杂交瘤细胞株中提取RNA,并使用RT-PCR技术,将获得的RNA反转录为cDNA;利用特定设计的上下游引物PCR克隆该杂交瘤细胞的重链可变区(mVH)和轻链可变区(mVL);所述特定设计的上下游引物的序列分别为核苷酸SEQIDNO.3和核苷酸序列4;(2.2)所述重链可变区(mVH)和轻链可变区(mVL)分别与克隆载体(pJETcloningvector)连接...
【专利技术属性】
技术研发人员:张学光,
申请(专利权)人:苏州旭光科星生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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