与间皮素结合的单克隆抗体及其制备方法技术

本公开提供了一种与间皮素结合的单克隆抗体，该单克隆抗体包括可变区，可变区包括具有选自以下氨基酸序列集合的至少两种的氨基酸序列的互补决定区(CDR)，氨基酸序列集合为：SEQ ID NO:4、6、8、12、14、16。在本公开中，由于该单克隆抗体能够特异性地识别组织、细胞表面和体液中的间皮素蛋白，能够阻断间皮素受体和间皮素作用，特别适用于用于间皮素的检测和抗体依赖性的疾病治疗。

Monoclonal antibodies binding to mesothelin and their preparation methods

The present disclosure provides a monoclonal antibody that binds to mesothelin. The monoclonal antibody comprises a variable region comprising a complementary decision region (CDR) with at least two amino acid sequences selected from the following set of amino acid sequences: SEQ ID NO: 4, 6, 8, 12, 14, 16. In this disclosure, since the monoclonal antibody can specifically recognize mesothelin proteins in tissues, cell surfaces and body fluids, and can block the action of mesothelin receptors and mesothelin, it is particularly suitable for detection of mesothelin and treatment of antibody-dependent diseases.

【技术实现步骤摘要】
与间皮素结合的单克隆抗体及其制备方法
本公开涉及一种与间皮素结合的单克隆抗体及其制备方法。
技术介绍
近年来，研究者发现，间皮素(Mesothelin)cDNA包含一个1884bp的开放阅读框，编码69kDa前体蛋白(628个氨基酸)。糖基化后，前体被呋喃在氨基酸288-293处裂解，产生40kDa蛋白和从细胞中释放的较小的32kDa片段。这种32kDa的脱落片段称为巨核细胞增强因子(MPF)。40kDa蛋白存在于细胞表面，经磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C处理后，可释放出来。由于恶性间皮瘤和卵巢腺癌起源于正常的间皮细胞，所以这些恶性疾病表达间皮素。间皮素最常见的形式是膜结合，但发现2个变体：具有8个氨基酸插入的变体1也是膜结合。由于缺乏GPI锚定信号序列，变异2是脱落的，可溶的形式。可溶性间皮素蛋白可从卵巢癌患者血清中检测到，并可作为有用的新标志物，诊断卵巢癌，和/或与CA125(癌症抗原-125)一起监测治疗反应。此外，可溶性的间皮素在很多肿瘤(间皮瘤、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、软组织肿瘤等)病人的血液和渗出液中升高。测定这些液体中间皮素水平已经被美国FDA初步批准作为监测患者反应和进展的工具。除此之外，间皮素还参与肿瘤的发生发展，作为肿瘤治疗的新的靶点。许多以间皮素为靶点的新型治疗性抗体药物已被开发，并应用于实体肿瘤的临床试验。它们包括Morphotek/NCI提供的未结合单克隆抗体amatuximab，NCI/Roche提供的重组免疫毒素SS1P和RG7787，Bayer、Roche/Genentech和BMS/Medarex提供的不同抗体-药物结合物(ADC)。因此，建立新的高特异性识别，高亲和力结合间皮素抗体，对肿瘤的诊断，治疗反应的监控和肿瘤的治疗有重要价值。由于间皮素是一条具有较长的氨基酸序列的蛋白，具有较多的抗原决定簇，因此，针对间皮素蛋白可以获得不止一个抗体(包括单克隆抗体或多克隆抗体)，这些抗体对抗原的结合特性(如特异性等)均可能是不同的。因此，本领域技术人员在研究中往往难以找到特别理想的，阻断效果明显的单克隆抗体。
技术实现思路
本公开有鉴于上述现有技术的状况而完成，其目的在于提供一种高特异性识别，高亲和力的间皮素单克隆抗体、制备方法及其应用。为此，本公开的第一方面提供了一种与间皮素结合的单克隆抗体，可选地，所述抗体包括可变区，所述可变区包括具有选自以下氨基酸序列集合的至少两种的氨基酸序列的互补决定区(CDR)，所述氨基酸序列集合为：SEQIDNO:4、6、8、12、14、16。在本公开中，由于所述单克隆抗体中的CDR与现有间皮素单克隆抗体的CDR相比为全新的CDR，具有高特异性、高亲和力，并且具有明显的阻断间皮素-间皮素受体相互作用的作用，进而阻断间皮素受体激活功能。因此该单克隆抗体能够特异性地识别组织、细胞表面和体液中的间皮素蛋白，能够阻断间皮素受体和间皮素作用，特别适用于间皮素的检测和抗体依赖性的疾病治疗。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，所述可变区可以包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列可以为SEQIDNO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列可以为SEQIDNO:10。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，可选地，所述SEQIDNO:4、6或8为所述重链可变区的CDR，所述SEQIDNO:12、14或16为所述轻链可变区的CDR。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，可选地，所述SEQIDNO:4为所述重链可变区的CRD1；所述SEQIDNO:6为所述重链可变区的CRD2；所述SEQIDNO:8为所述重链可变区的CRD3。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，所述SEQIDNO:12可以为所述轻链可变区的CRD1；所述SEQIDNO:14可以为所述轻链可变区的CRD2；所述SEQIDNO:16可以为所述轻链可变区的CRD3。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，所述单克隆抗体可以还包括重链恒定区和轻链恒定区，其中，所述重链恒定区的重链类型可以为IgGl、IgG2a、IgG2b或IgG3，所述轻链恒定区的轻链类型可以为κ链或λ链。另外，在本公开的第一方面所涉及的单克隆抗体中，所述单克隆抗体可以为免疫球蛋白分子或抗原结合片段。在这种情况下，能够与间皮素结合。本公开的第二方面提供了一种与间皮素结合的单克隆抗体的功能变体，可选地，具有与上述任一项所述的可变区的50％至99％的的氨基酸序列同源性。在本公开中，功能变体与本公开所涉及的单克隆抗体的可变区具有50％至99％的氨基酸序列同源性。在这种情况下，单克隆抗体与该功能变体相比具有相同或不同的、更高或更低的结合亲和性，功能变体仍然能够识别并结合结合间皮素或其片段。本公开的第三方面提供了一种免疫缀合物，至少可以包括上述任一项所述的单克隆抗体。在这种情况下，免疫缀合物能够用于间皮素蛋白或其片段的体外免疫测定或者纯化。本公开的第四方面提供了一种核酸分子，可选地，所述核酸分子编码上述任一项所述的单克隆抗体。在这种情况下，核酸分子可以被用作克隆过程的中间物。本公开的第五方面提供了一种表达载体，可以包括上述所述的核酸分子。在这种情况下，表达载体能够转入适当的细胞中，使其能够表达与间皮素结合的单克隆抗体。本公开的第六方面提供了一种宿主细胞，可选地，包括上述所述的表达载体。在这种情况下，宿主细胞能够表达与间皮素结合单克隆抗体。本公开的第七方面提供了一种与间皮素结合的单克隆抗体的制备方法，可以包括通过培养上述所述的宿主细胞。在这种情况下，通过各种分离方法能够分离和纯化与间皮素结合的单克隆抗体。本公开的第八方面提供了一种药物组合物，可以包括上述任一项所述的单克隆抗体。在这种情况下，可以用于制备诊断、治疗和/或预防间皮素阳性的肿瘤等相关疾病。本公开的第九方面提供了一种试剂盒，包括上述任一项所述的单克隆抗体。在这种情况下，可以方便、快速且准确地检测待测样品中间皮素或其含量，从而得知待测样品中是否存在间皮素受体-间皮素过度相互作用。附图说明图1示出了本公开的实施方式所涉及的与间皮素结合的单克隆抗体的结构示意图。图2示出了LK19特异性识别肿瘤细胞的间皮素蛋白的结果图。图3示出了LK19，LK20和LK423三种抗体检测胰腺癌细胞表面的间皮素表达的结果图。图4示出了LK19检测肿瘤组织及癌旁的间皮素表达的结果图。具体实施方式以下，参考附图，详细地说明本公开的优选实施方式。在下面的说明中，对于相同的部件赋予相同的符号，省略重复的说明。另外，附图只是示意性的图，部件相互之间的尺寸的比例或者部件的形状等可以与实际的不同。除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。本文使用的术语“单克隆抗体”是指仅针对某一特定的抗原决定簇，显示出单一结合特异性的抗体。另外，抗体包括含重(H)链和轻(L)链的蛋白和抗原结合部分。其中，重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)，重链恒定区包含3个结构域CH1、CH2和CH3；轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)，轻链恒定区包含一个结构域CL。另外，VH和VL区还可被细分成其间插入了较保守本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与间皮素结合的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括可变区，所述可变区包括具有选自以下氨基酸序列集合的至少两种的氨基酸序列的互补决定区(CDR)，所述氨基酸序列集合为：SEQ ID NO:4、6、8、12、14、16。

【技术特征摘要】
1.一种与间皮素结合的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括可变区，所述可变区包括具有选自以下氨基酸序列集合的至少两种的氨基酸序列的互补决定区(CDR)，所述氨基酸序列集合为：SEQIDNO:4、6、8、12、14、16。2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:10。3.如权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述SEQIDNO:4、6或8为所述重链可变区的CDR，所述SEQIDNO:12、14或16为所述轻链可变区的CDR。4.如权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述SEQIDNO:4为所述重链可变区的CRD1；所述SEQIDNO:6为所述重链可变区的CRD2；所述SEQIDNO:8为所述重链可变区的CRD3。5.如权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述SEQIDNO:12为所述轻链可变区的CRD1；所述SEQIDNO:14为所述轻链可变区的CRD2；所述SEQIDNO:16为所述轻链可变区的CRD3。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：张笑人，
申请(专利权)人：上海霖科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31