T细胞受体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域。具体而言，本发明专利技术提供抗原特异性T‑细胞受体(TCR)。此外，本发明专利技术涵盖编码其的多核苷酸和包含所述多核苷酸的载体。还提供了包含本发明专利技术的分子的宿主细胞。此外，本发明专利技术提供用于诊断和治疗特别是癌症的手段和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体及其用途
技术介绍
形成细胞介导的免疫系统的部分的T淋巴细胞(或T细胞)在消除病原体中起主要作用。T细胞在胸腺中发育并在其表面上表达T细胞受体分子，该T细胞受体分子允许识别在有核细胞上表达的主要组织相容性复合体(MHC)分子上呈递的肽(抗原呈递)。病原体的抗原，即由MHC分子呈递的外源抗原，将引发强的T细胞响应，而由于在此类T细胞发育过程中在胸腺中的自身抗原特异性T细胞的阴性选择，自身抗原通常不会导致T细胞响应。因此，免疫系统可以区分呈递外源抗原或自身抗原的有核细胞，并通过T细胞的强有效的细胞因子释放和细胞毒性机制特异性地靶向和消除受感染的细胞。免疫系统的力量被认为是未来癌症治疗的一个很有前途的工具。在过去的十年中，研究已经开始通过利用过继细胞转移(ACT)来开发T细胞的独特性质，该过继细胞转移涉及施用离体扩增的供体来源的淋巴细胞。ACT对于癌症的治疗是一个有吸引力的概念，因为它不需要患者的免疫能力，并且被转移的淋巴细胞的特异性可以针对通常不能有效地触发自体T细胞响应的非突变且因此免疫原性差的肿瘤抗原。尽管已证明ACT是各种类型癌症的有效治疗，但其作为临床治疗的广泛应用仍受到对来自每位患者的肿瘤特异性T细胞的定制(custom)分离和表征的需求的阻碍——定制(custom)分离和表征这一过程不仅可能是困难且耗时的，也常常不能产生高亲和力的T细胞(Xue等，ClinExpImmunol.2005Feb；139(2)：167-172；Schmitt等，HumGeneTher.2009Nov；20(11)：1240-1248)。肿瘤抗原特异性T细胞受体(TCR)向原代T细胞的遗传性转移可克服ACT当前的一些局限性，因为它允许快速产生具有定义的抗原特异性的肿瘤反应性T淋巴细胞，甚至在免疫受损患者中也是如此。然而，鉴定具有特异性识别肿瘤抗原并在体内显示出预期抗肿瘤作用的TCR的合适T细胞克隆仍然是目前研究的主题。考虑到2012年全球约有1410万新发癌症病例，并且目前癌症是全球约14.6％的人类死亡的原因，因此迫切需要新的和有效的治疗方案。本专利技术的目的在于满足上述需求。
技术实现思路
本专利技术提供抗原特异性T细胞受体以及包含其的核酸、载体、宿主细胞；和其各种用途及应用。第一方面，本专利技术涉及一种T细胞受体(TCR)，其包含(i)TCRα链可变区的互补决定区3(CDR3)，该CDR3包含CAVHSTAQAGTALIF(SEQIDNO；1)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：1具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；和/或(ii)TCRβ链可变区的CDR3，该CDR3包含CASSTHRGQTNYGYTF(SEQIDNO：2)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：2具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。本文提供的TCR能够结合包含在X1LX2GLDX3LL(SEQIDNO：31)的氨基酸序列内的表位或其HLA-A*02结合形式，优选结合包含在VLDGLDVLL(SEQIDNO：32)的氨基酸序列内的表位或其MHC结合形式。上述氨基酸序列对应于PRAME(优先在黑色素瘤中表达的抗原)的氨基酸位置100至108，其被认为由多种不同的癌症表达。根据本专利技术，TCR可以例如包含(i)TCRα链可变区，其包含如SEQIDNO：15所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；和/或(ii)TCRβ链可变区，其包含如SEQIDNO：16所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。本专利技术的TCR还可包含TCRα链和/或TCRβ链中的恒定区。特别地，本文提供的TCR可包含(i)TCRα链，其包含选自SEQIDNO：7、9、11或13中任一个的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：7、9、11或13具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；和/或(ii)TCRβ链，其包含选自SEQIDNO：8、10、12或14中任一个的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：8、10、12或14具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。本专利技术的TCR可具有多种形式，如所述TCR可以是天然TCR、TCR变体、TCR片段或TCR构建体。本文还设想包含彼此共价连接的TCRα链和TCRβ链的异二聚体和多聚体以及包含一个或多个融合组分的TCR构建体。可用的TCR构建体包括例如TCRα链、TCRβ链(二者彼此共价连接)和抗体或抗体片段(比如svFv)，该抗体或片段针对淋巴细胞表面上的抗原或表位(如CD3、CD28、CD5、CD16或CD56)并通过连接子与TCR链融合。其它可用的可与本专利技术的TCR共价连接的部分包含各种标记。本专利技术的TCR还可以可溶形式提供。此外，本专利技术提供一种编码本文提供的TCR中的任一种的核酸，所述核酸例如包含SEQIDNO：23、24、25、26、27、28、29或30中任一个的核酸序列或由所述核酸序列组成。此外，本文提供一种载体，其包含根据本专利技术所述的核酸。示例性载体包括病毒载体，如慢病毒或γ-逆转录病毒载体。本文还提供了包含本专利技术的TCR、核酸或载体的宿主细胞。可用的宿主细胞包括淋巴细胞，比如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、γ/δ-T细胞。此外，本专利技术提供一种用于获得本专利技术的TCR的方法。本文还提供了一种包含本专利技术的TCR、核酸、载体和/或宿主细胞的药物组合物或诊断组合物。还设想了本专利技术的TCR、核酸、载体、宿主细胞和/或药物组合物作为药物或诊断剂的用途，特别是在癌症的检测、诊断、预后、预防和/或治疗中的用途。一种预防或治疗癌症的可用方法包括以下步骤：(a)提供本文公开的TCR、核酸、载体、宿主细胞和/或药物组合物中的一种或多种；和(b)向有此需要的受试者施用上述物质中的一种或多种。本专利技术还设想以下步骤：(a)提供受试者的样品，所述样品包含淋巴细胞；(b)提供本文公开的TCR、核酸、载体、宿主细胞和/或药物组合物中的一种或多种；和(c)将其引入步骤(a)中得到的淋巴细胞，并由此获得经修饰的淋巴细胞，(d)向有此需要的受试者或患者施用步骤(c)的所述经修饰的淋巴细胞。本专利技术进一步涉及一种体外检测受试者中癌症的存在的方法，其包括：(a)提供受试者的样品，所述样品包含一个或多个细胞；(b)使所述样品与本专利技术的TCR、核酸、载体或宿主细胞接触，由此形成复合物，和(c)检测所述复合物，其中所述复合物的检测指示受试者中癌症的存在。附图说明图1示出了采用成熟树突细胞的引发(priming)方法的示意图。将PRAME转染的成熟树突细胞用于在自体健康供体的环境(repertoire)中从头诱导PRAME特异性CD8T细胞。图2示出了与加载肽的T2细胞共培养的PRAME100-108特异性T细胞克隆T4.8-1-29的多种细胞因子分泌(IFN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种T细胞受体(TCR)，其包含：(i)TCRα链可变区的CDR3，其包含CAVHSTAQAGTALIF(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQ ID NO：1具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；如/或(ii)TCRβ链可变区的CDR3，其包含CASSTHRGQTNYGYTF(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQ ID NO：2具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；所述TCR能够结合包含在X1LX2GLDX3LL(SEQ ID NO：31)的氨基酸序列内的表位或其MHC结合形式，优选结合包含在VLDGLDVLL(SEQ ID NO：32)的氨基酸序列内的表位或其MHC结合形式。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.03.10 EP 17160260.0;2016.06.17 LU 931121.一种T细胞受体(TCR)，其包含：(i)TCRα链可变区的CDR3，其包含CAVHSTAQAGTALIF(SEQIDNO：1)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：1具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；如/或(ii)TCRβ链可变区的CDR3，其包含CASSTHRGQTNYGYTF(SEQIDNO：2)的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：2具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；所述TCR能够结合包含在X1LX2GLDX3LL(SEQIDNO：31)的氨基酸序列内的表位或其MHC结合形式，优选结合包含在VLDGLDVLL(SEQIDNO：32)的氨基酸序列内的表位或其MHC结合形式。2.根据权利要求1所述的TCR，其包含：(i)TCRα链可变区，其包含SEQIDNO：15所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；和/或(ii)TCRβ链可变区，其包含SEQIDNO：16所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。3.根据权利要求1或2中任一项所述的TCR，其进一步包含：(i)TCRα链恒定区，和/或(ii)TCRβ链恒定区。4.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其包含：(i)TCRα链，其包含选自SEQIDNO：7、SEQIDNO：9、SEQIDNO：11或SEQIDNO：13的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：7、11、9或13具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成；和/或(ii)TCRβ链，其包含选自SEQIDNO：8、SEQIDNO：10、SEQIDNO：12或SEQIDNO：14的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成，或包含与SEQIDNO：8、10、12或14具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选90％或95％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。5.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，所述TCR选自天然TCR、TCR变体、TCR片段或TCR构建体。6.根据权利要求5所述的TCR构建体，其包含至少一个TCRα链和至少一个TCRβ链，它们彼此共价连接以形成TCR异二聚体或多聚体。7.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其进一步包含一个或多个任选地选自以下的融合组分：Fc受体；Fc结构域，包括IgA、IgD、IgG、IgE和IgM；细胞因子，包括IL-2或IL-15；毒素；抗体或其抗原结合片段，包括抗-CD3、抗-CD28、抗-CD5、抗-CD16或抗-CD56抗体或其抗原结合片段；CD247(CD3-ζ)、CD28、CD137、CD134结构域，或它们的组合，任选地进一步包含至少一个连接子。8.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其包含：(i)至少一个如权利要求1至3中任一项所定义的TCRα链；和(ii)至少一个如权利要求1至3中任一项所定义的TCRβ链；(iii)抗体或单链抗体片段(scFv)，其针对淋巴细胞表面上的抗原或表位；其中所述TCRα-链和TCRβ-链彼此连接并任选地通过连接子与所述抗体或scFv融合。9.根据权利要求8所述的TCR，其中所述抗原选自CD3、CD28、CD5、CD16或CD5...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·埃林杰，C·韦纳，M·韦斯，S·怀尔德，D·申德，
申请(专利权)人：基因医疗免疫疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE