【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对MUC1特异性的嵌合抗原受体(CAR)及其使用方法相关申请本申请要求临时申请USSN62/362,744(2016年7月15日提交)、USSN62/405,179(2016年10月6日提交)和USSN62/423,991(2016年11月18日提交)的权益，其各自的内容通过引用以其整体并入本文。并入序列表命名为“POTH-005_001WO_SeqList.txt”的文本文件的内容，其于2017年7月13日创建，文本文件大小为91KB，通过引用以其整体并入本文。本公开内容的领域本公开内容涉及分子生物学，且更特别地涉及以高亲和性(affinity)和亲合力(avidity)特异性地结合目标蛋白的支架蛋白。背景能够以高亲和性和亲合力识别和结合于特定目标蛋白的试剂的发现一直是生物制药业关注的焦点。虽然单克隆抗体已用于这个目的，仍然需要比抗体更小、更易溶解和更稳定的更有效的试剂。概述本公开内容提供组合物和使用这些组合物以高亲和性和亲合力识别并结合特定目标蛋白，优选地，MUC1的方法。本公开内容提供Centyrin组合物和使用这些组合物以高亲和性和亲合力识别并结合特定目标蛋白，优选地，MUC1的方法。Centyrin可以被结合到本公开内容的嵌合抗原受体的抗原识别区。在本公开内容的某些优选的实施方案中，MUC1是MUC1C-末端结构域(MUC1-C)。本公开内容的组合物可特异性地靶向MUC1-C的胞外域(ECD)序列，所述序列在蛋白水解裂解后保留在细胞表面，随后释放N-末端亚基。本公开内容的包含抗-MUC1Centyrin的Centyrin组合物或包含抗-MUC1Ce...
【技术保护点】
1.一种蛋白支架，其包含至少一个纤连蛋白III型(FN3)结构域的共有序列，其中支架能够结合人MUC1的序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.15 US 62/362744;2016.10.06 US 62/405179;201.一种蛋白支架，其包含至少一个纤连蛋白III型(FN3)结构域的共有序列，其中支架能够结合人MUC1的序列。2.权利要求1的蛋白支架，其中支架能够结合人MUC1的C-末端结构域(MUC1-C)的序列。3.权利要求1或2的蛋白支架，其中支架能够结合人MUC1-C的胞外域(ECD)的序列。4.权利要求1-3的任一项的蛋白支架，其中至少一个纤连蛋白III型(FN3)结构域源自人蛋白。5.权利要求4的蛋白支架，其中人蛋白是生腱蛋白-C。6.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其中共有序列包含LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT(SEQIDNO:1)。7.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其中共有序列在以下环内的一个或多个位置被修饰：(a)包含在共有序列的位置13-16的氨基酸残基TEDS(SEQIDNO:64)或由它们组成的A-B环；(b)包含在共有序列的位置22-28的氨基酸残基TAPDAAF(SEQIDNO:65)或由它们组成的B-C环；(c)包含在共有序列的位置38-43的氨基酸残基SEKVGE(SEQIDNO:66)或由它们组成的C-D环；(d)包含在共有序列的位置51-54的氨基酸残基GSER(SEQIDNO:67)或由它们组成的D-E环；(e)包含在共有序列的位置60-64的氨基酸残基GLKPG(SEQIDNO:68)或由它们组成的E-F环；(f)包含在共有序列的位置75-81的氨基酸残基KGGHRSN(SEQIDNO:69)或由它们组成的F-G环；或(g)(a)-(f)的任何组合。8.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其包含至少5个纤连蛋白III型(FN3)结构域的共有序列。9.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其包含至少10个纤连蛋白III型(FN3)结构域的共有序列。10.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其包含至少15个纤连蛋白III型(FN3)结构域的共有序列。11.前述权利要求的任一项的蛋白支架，其中支架以至少一个选自以下KD的亲和力结合人MUC1的序列，所述KD小于或等于10-9M，小于或等于10-10M，小于或等于10-11M，小于或等于10-12M，小于或等于10-13M，小于或等于10-14M，和小于或等于10-15M。12.权利要求11的蛋白支架，其中KD由表面等离子体共振测定。13.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(a)包含抗原识别区的胞外结构域，其中抗原识别区包含至少一个依据前述权利要求的任一项的蛋白支架；(b)跨膜结构域，和(c)包含至少一个共刺激结构域的胞内结构域。14.权利要求13的CAR，其中胞外结构域进一步包含信号肽。15.权利要求13或14的CAR，其中(a)的胞外结构域还包含抗原识别区和(b)的跨膜结构域之间的铰链。16.权利要求13-15的任一项的CAR，其中跨膜结构域包含编码CD8跨膜结构域的序列。17.权利要求13-16的任一项的CAR，其中至少一个共刺激结构域包含CD28和/或4-1BB共刺激结构域。18.权利要求17的CAR，其中4-1BB共刺激结构域位于跨膜结构域和CD28共刺激结构域之间。19.一种组合物，其包含权利要求1-12的任一项的蛋白支架和至少一种药学上可接受的载体。20.一种组合物，其包含权利要求13-18的任一项的嵌合抗原受体和至少一种药学上可接受的载体。21.一种转座子，其包含权利要求1-12的任一项的蛋白支架。22.一种转座子，其包含权利要求13-18的任一项的CAR。23.权利要求22的转座子，其中转座子包含诱导型半胱天冬酶多肽，其包含(a)配体结合区，(b)接头，和(c)截短的半胱天冬酶9多肽，其中诱导型半胱天冬酶多肽不包含非-人序列。24.一种组合物，其包含权利要求21-23的任一项的转座子。25.权利要求24的组合物，其进一步包含含有编码转座酶的序列的质粒。26.权利要求25的组合物，其中编码转座酶的序列是mRNA序列。27.权利要求21-26的任一项的转座子或组合物，其中转座子是piggyBac转座子。28.权利要求25-27的任一项的组合物，其中转座酶是piggyBac转座酶。29.权利要求28的组合物，其中piggyBac转座酶包含含有SEQIDNO:4的氨基酸序列。30.权利要求28或29的组合物，其中piggyBac转座酶是超活性变异体和其中超活性变异体包含在SEQIDNO:59的位置30、165、282和538的一个或多个处的氨基酸取代。31.权利要求30的组合物，其中SEQIDNO:59的位置30的氨基酸取代是缬氨酸(V)取代异亮氨酸(I)(I30V)。32.权利要求30的组合物，其中SEQIDNO:59的位置165的氨基酸取代是丝氨酸(S)取代甘氨酸(G)(G165S)。33.权利要求30的组合物，其中SEQIDNO:59的位置282的氨基酸取代是缬氨酸(V)取代甲硫氨酸(M)(M282V)。34.权利要求30的组合物，其中SEQIDNO:59的位置538的氨基酸取代是赖氨酸(K)取代天冬酰胺(N)(N538K)。35.权利要求28-34的任一项的组合物，其中转座酶是超级piggyBac(sPBo)转座酶。36.权利要求35的组合物，其中超级piggyBac(sPBo)转座酶包含含有SEQIDNO:60的氨基酸序列。37.一种载体，其包含权利要求1-18的任一项的CAR。38.权利要求37的载体，其中载体是病毒性载体。39.权利要求38的载体，其中病毒性载体包含从逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒或其任何组合分离或衍生的序列。40.权利要求38或39的载体，其中病毒性载体包含从腺病毒相关病毒分离或衍生的序列。41.权利要求38-40的任一项的载体，其中病毒性载体是重组载体。42.权利要求37的载体，其中载体是纳米粒子载体。43.权利要求42的载体，其中纳米粒子载体包含核酸、氨基酸、聚合物、胶束、脂质、有机分子、无机分子或其任何组合。44.权利要求37-43的任一项的载体，其中载体包含诱导型半胱天冬酶多肽，其包含(a)配体结合区，(b)接头，和(c)截短的半胱天冬酶9多肽，其中诱导型半胱天冬酶多肽不包含非-人序列。45.一种组合物，其包含权利要求37-44的任一项的载体。46.一种细胞，其包含权利要求1-12的任一项的蛋白支架。47.一种细胞，其包含权利要求13-18的任一项的CAR。48.一种细胞，其包含权利要求21-36的任一项的转座子或转座酶。49.一种细胞，其包含权利要求37-44的任一项的载体。50.权利要求46-49的任一项的细胞，其中所述细胞在细胞表面上表达CAR。51.权利要求46-50的任一项的细胞，其中所述细胞是免疫细胞。52.权利要求51的细胞，其中免疫细胞是T-细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤(NK)-样细胞、造血祖细胞、外周血(PB)衍生的T细胞或脐带血(UCB)衍生的T细胞。53.权利要求51的细胞，其中免疫细胞是T-细胞。54.权利要求46-50的任一项的细胞，其中所述细胞是人工抗原呈递...
【专利技术属性】
技术研发人员：E奥斯特塔，D谢洛克，
申请(专利权)人：波赛达治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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