The invention discloses a method for separating Saccharomyces cerevisiae haploid based on super high throughput of flow cytometry, belonging to the technical field of high throughput screening. By optimizing the treatment conditions of ascospores, the optimum preparation conditions of Saccharomyces cerevisiae spore suspension are obtained. The active spores and inactivated cells in spore suspension were dyed with PI and FDA dyes respectively. The activity of Saccharomyces cerevisiae spores and the absolute count of spores were achieved by analyzing the dyed samples based on flow cytometry. The invention establishes the optimal preparation conditions of spore suspension, and establishes a super high throughput Saccharomyces cerevisiae haploid separation technology based on flow cytometry.
【技术实现步骤摘要】
一种基于流式细胞术超高通量分离酿酒酵母单倍体的方法
本专利技术涉及一种基于流式细胞术超高通量分离酿酒酵母单倍体的方法,属于高通量筛选
技术介绍
酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)在发酵工业中有广泛应用,如酿酒工业、生物能源产业等。同时作为模式生物,其拥有遗传背景清晰、基因操作简便、培养周期较短等优点,在基础研究中也有广泛应用。在发酵工业领域,杂交育种是一种传统、高效的提高酿酒酵母生产性能的育种手段。通过将拥有不同优良性状的单倍体进行杂交,而后分离单倍体,可以筛选得到整合不同优良性状的子代单倍体,提高工业生产性能。在基础研究领域,通过杂交不同表型单倍体细胞,而后分离子代单倍体、进行特定表型分组、全基因组关联分析,可以精确定位与特定表型差异相关的基因型差异。传统酿酒酵母单倍体分选是利用孢子比营养细胞耐热性高的特点,通过58℃热处理杀死营养细胞,而后涂布YPD平板进行分离。这种方法需要大量的人工操作,且未分散的子囊孢子也能耐受58℃热处理条件,因此传统分离酿酒酵母单倍体的方法存在耗时耗力、分离效率低等问题。
技术实现思路
为了解决上述问题,本专利技术建立了一种超高通量分离酵母单倍体的方法,所述方法基于流式细胞术,可在短时间内高效分离大量酵母单倍体菌株。在本专利技术的一种实施方式中,所述方法包括如下步骤:(1)制备酿酒酵母孢子悬液;(2)利用PI和FDA染料对步骤(1)的孢子悬液进行染色;(3)使用流式细胞仪检测孢子活性;(4)利用流式细胞仪分选有活性的孢子,直接将单个活性孢子分选到装有固体培养基的高通量孔板中。在本专利技术的一种实施 ...
【技术保护点】
1.一种超高通量分离酵母单倍体的方法,其特征在于,基于流式细胞术进行分离,所述方法包括如下步骤:(1)采用蜗牛酶和/或玻璃珠振荡处理孢子悬液;(2)利用PI和FDA染料对步骤(1)的孢子悬液进行染色;(3)使用流式细胞仪检测孢子活性;(4)利用流式细胞仪分选有活性的孢子,直接将单个活性孢子分选到装有固体培养基的高通量孔板中。
【技术特征摘要】
1.一种超高通量分离酵母单倍体的方法,其特征在于,基于流式细胞术进行分离,所述方法包括如下步骤:(1)采用蜗牛酶和/或玻璃珠振荡处理孢子悬液;(2)利用PI和FDA染料对步骤(1)的孢子悬液进行染色;(3)使用流式细胞仪检测孢子活性;(4)利用流式细胞仪分选有活性的孢子,直接将单个活性孢子分选到装有固体培养基的高通量孔板中。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中是向产孢样品中加入样品质量2~3%的蜗牛酶,28~30℃振荡孵育25~35min。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中的孢子悬液是通过蜗牛酶处理产孢样品后,添加玻璃珠振荡后得到的;所述玻璃珠振荡具体是:加入占孢子悬液体积35~45%的粒径425~600nm玻璃珠,振荡45~90s,离心去除玻璃珠,收集细胞。4.根据权利要求1~3任一所述的方法,其特征在于,孢子悬液包括二倍体营养细胞、子囊孢子、不同活性的分生孢子。5.根据权利要求1~4任一所...
【专利技术属性】
技术研发人员:周景文,陈坚,曾伟主,方芳,堵国成,夏小乐,张伟平,
申请(专利权)人:江南大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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