一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析领域，具体公开了一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物对映异构体的HPLC检测方法，该方法使用以纤维素‑三(3,5‑二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，并以烷烃和醇类混合溶液作为流动相，柱温为20～40℃，流速为1.0～1.5ml/min，波长为250～260nm。本发明专利技术实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种异构体的有效分离，检测结果准确性好、灵敏度高、操作简便、成本低，分析时间短，为盐酸缬更昔洛韦中间体水解物的质量控制提供了保障。

HPLC detection method for hydrolysate isomers of valganciclovir hydrochloride

The invention belongs to the field of drug analysis, in particular a method for the HPLC detection of an enantiomer of the hydrolysate of valeniclovir intermediate. The method uses a chiral chromatographic column with a cellulose acetate three (3,5 chlorophenyl carbamate) bonded silica gel as a filling agent, and a mixed solution of alkanes and alcohols as a mobile phase, The column temperature is 20~40 degrees, the flow rate is 1 ~ 1.5ml/min, and the wavelength is 250 ~ 260nm. The invention has realized the effective separation of four isomers of valeniclovir intermediate hydrolysate, with good accuracy, high sensitivity, simple operation, low cost and short analysis time, which provides a guarantee for the quality control of the hydrolysate of valeniclovir hydrochloride intermediate.

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法。
技术介绍
盐酸缬更昔洛韦是一种疱疹病毒DNA的合成抑制剂，由瑞士Roche公司研发，2010年在瑞典和芬兰作为处方药首次上市，用于治疗获得性免疫缺陷综合症(AIDS)患者的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎及预防高危实体器官移植患者的CMV感染。2001年3月获准美国FDA许可，2001年5月首次在美国上市销售。国内外的多项研究显示，盐酸缬更昔洛韦片药理作用明显，作用机制较新颖，毒性低，不良反应少，临床疗效显著，患者顺应性高，应用安全。中间体水解物是盐酸缬更昔洛韦合成过程中的关键中间体，化学名称为(S)-2-苄氧羰氨基-3-甲基丁酸(R,S)-2-[(2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]-3-羟基丙酯，分子量为287.2，结构式见表1。它经过氢化成盐后即可得到盐酸缬更昔洛韦，对于盐酸缬更昔洛韦，目前进口注册标准中规定其非对映异构体比例范围为45:55～55:45，其对映异构体的含量不得超过3.0％，所以在合成过程中，开发具有专属性的方法来检测中间体水解物四种异构体构型的纯度，并制定合理可行的非对映异构体比例范围和对映异构体杂质限度，是中间体水解物质量控制的重要部分，也是保证盐酸缬更昔洛韦及其制剂产品质量的重要部分。表1中间体水解物及其对映异构体结构式：通过查阅大量中外文献及专利，目前还没有通过高效液相色谱的方法来检测中间体水解物四种异构体纯度的文献报道，不利于企业对产品质量的把控。专利技术内容为了解决目前技术问题，本专利技术通过大量实验探索提供了一种分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种手性构型的方法，从而更好地控制盐酸缬更昔洛韦产品质量。本专利技术提供的技术方案是：一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法：采用以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，以烷烃和醇的混合溶液为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下任选的色谱条件：流动相流速为1.0～1.5ml/min，色谱柱温度为20～40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250～260nm。优选地，所述流动相中，烷烃占流动相总体积的50～75％，最佳为70％。优选地，所述烷烃为正己烷和/或正庚烷；所述醇为乙醇和/或异丙醇。进一步优选地，所述烷烃为正己烷；所述醇为乙醇。优选地，所述色谱柱温度为35℃。优选地，所述检测波长为254nm。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的方法实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种异构体的有效分离和检测，因此本专利技术能够更好的实现对中间体水解物和成品盐酸缬更昔洛韦的质量控制，提高最终产品的品质，保证了其临床用药的安全有效。2.本专利技术的检测方法准确度高、灵敏度高、操作简便、成本低、分析时间短，为产品的研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。附图说明图1为采用硅胶表面涂敷有手性冠醚手性柱，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图2为采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性柱，得到的D-水解物、L-水解物溶液的HPLC色谱图；图3为采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性柱，得到的D-水解物、L-水解物溶液的HPLC色谱图；图4为采用纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性柱，得到的D-水解物对照品溶液的HPLC色谱图；图5为采用纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性柱，得到的L-水解物对照品溶液的HPLC色谱图；图6为采用纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性柱，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图7为以正庚烷-乙醇(70:30)为流动相，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图8为以正己烷-异丙醇(50:50)为流动相，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图9为以正己烷-正丁醇(50:50)为流动相，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图10为以正己烷-乙醇(75:25)为流动相，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图11为以正己烷-乙醇(65:35)为流动相，得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图12为UV-250检测波长得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图13为UV-260检测波长得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图14为UV-254检测波长得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图15为1.0ml/min流速得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图16为20℃柱温得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图17为40℃柱温得到的D-水解物和L-水解物混合溶液的HPLC色谱图；图18为实施例7中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图19为实施例7中水解物中间体样品检测的HPLC色谱图。具体实施方式为便于本领域技术人员理解本
技术实现思路
，下面结合具体实施例进一步描述本专利技术的技术方案，但以下内容不应以任何方式限制本专利技术权利要求书请求保护的范围。以下诸实施例中，所用仪器与试剂如下：仪器：Agilent1200高效液相色谱仪。试剂：正己烷、正庚烷、乙醇、异丙醇均为色谱级L-水解物对照品和D-水解物对照品为申请人根据常规技术自制。实施例1不同手性柱的分离效果试验(1)固定相：硅胶表面涂敷有手性冠醚色谱柱：CR(+)4.6*150mm，5um色谱仪器：Agilent1200高效液相色谱仪检测器及波长：UV-254流动相：pH1.0的高氯酸水溶液流速：0.8ml/min进样量：5ul柱温：25℃供试品溶液制备：L-水解物和D-水解物混合对照品溶液：精密称取D-水解物对照品约5mg、L-水解物对照品约5mg，置于同一10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得。取上述溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如图1所示。L-水解物和D-水解物混合对照品溶液只能分离出两个异构体峰，无法分离出水解物4种构型。(2)固定相：硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)色谱柱：AD-RH4.6*150mm，5um色谱仪器：Agilent1200高效液相色谱仪检测器及波长：UV-254流动相：乙腈-水(30:70，v/v)流速：0.7ml/min进样量：5ul柱温：30℃供试品溶液制备：D-水解物对照品溶液：精密称取D-水解物对照品约25mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得。L-水解物对照品溶液：精密称取L-水解物对照品约25mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得。分别取上述两种对照品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如图2所示。L-水解物和D-水解物保留时间基本一致，无法分离出水解物4种构型。(3)固定相：硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)色谱柱：OJ-RH4.6*150mm，5um色谱仪器：Agilent12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：采用以纤维素‑三(3,5‑二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，以烷烃和醇的混合溶液为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下任选的色谱条件：流动相流速为1.0～1.5ml/min，色谱柱温度为20～40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250～260nm。

【技术特征摘要】
1.一种盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：采用以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，以烷烃和醇的混合溶液为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体水解物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下任选的色谱条件：流动相流速为1.0～1.5ml/min，色谱柱温度为20～40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250～260nm。2.如权利要求1所述盐酸缬更昔洛韦中间体水解物异构...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳旭，余再丹，刘俊，邓亚萍，邵振，周震，刘欣，
申请(专利权)人：湖北丽益医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42