一种替诺福韦及其对映异构体的高效液相色谱分析检测方法技术

本发明专利技术公开了一种替诺福韦及其对映异构体的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：1、用流动相配制替诺福韦待测品溶液；所述的流动相的配制方法为：配制磷酸二氢铵溶液，且用磷酸调节pH值至3.0～5.0，最终磷酸二氢铵浓度为10mmol/L～50mmol/L；2、先开启紫外光吸收检测器，使用波长为258～262nm的紫外光进行检测，然后将替诺福韦待测品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，所述的手性色谱柱以a‑酸性糖蛋白键合硅胶为填充剂，再用流动相以0.4～0.8ml/min流速进行冲洗；3、根据色谱图算出诺福韦及其对映异构体的分离度以及采用峰面积归一化法计算替诺福韦及其对映异构体的含量。该方法简单，操作方便，并严格进行方法验证，科学严谨。

【技术实现步骤摘要】
一种替诺福韦及其对映异构体的高效液相色谱分析检测方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种替诺福韦(R-PMPA)及其对映异构体(S-PMPA)的高效液相色谱分析检测方法。
技术介绍
替诺福韦：化学名称为R-9-[2-(二乙氧膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤，分子量为287.2，简称R-PMPA，其化学结构式为：其对映异构体：化学名称为S-9-[2-(二乙氧膦酰甲氧基)丙基]腺嘌呤，分子量为287.2，简称S-PMPA，其化学结构式为：富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)是一种新型核苷酸类逆转录酶抑制剂，由吉利德公司研究开发，美国FDA分别于2001年和2008年批准其用于治疗艾滋病(HIV)和成人的慢性乙型肝炎(chronichepatitisB，CHB)。国内外的多项研究显示，TDF具有强大的抗HBV作用及低耐药性，对多种NAs治疗失败的CHB患者均有效，被美国肝病学会及欧洲肝病学会指南等国内外众多指南推荐为一线治疗药物。替诺福韦是富马酸替诺福韦二吡呋酯合成过程中的关键中间体，它经过酯化和成盐两步后即可得到富马酸替诺福韦二吡呋酯。对于富马酸替诺福韦二吡呋酯，目前进口注册标准中规定其对映异构体的含量不得超过1.0％，所以在合成过程中，开发具有专属性的方法来检测控制中间体替诺福韦的对映异构体含量，并制定合理可行的对映异构体杂质限度，是替诺福韦中间体质量控制的重要部分，也是保证富马酸替诺福韦二吡呋酯及其制剂产品质量的重要部分。通过查阅大量中外文献及专利，目前还没有发现有通过类似液相色谱的方法来控制替诺福韦及其对映异构体含量的文献报道，不利于企业对产品质量的把控，所以目前亟需一种对替诺福韦及其对映异构体的分离分析常规方法。
技术实现思路
基于上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供了一种替诺福韦及其对映异构体的高效液相色谱分析检测方法，该方法简单，操作方便，满足了研发和生产的需求。实现本专利技术上述目的所采用的技术方案为：一种替诺福韦R-PMPA及其对映异构体S-PMPA的高效液相色谱分析检测方法，包括如下步骤：1、取替诺福韦待测品，用流动相配制成替诺福韦待测品溶液；所述的流动相的配制方法为：配制磷酸二氢铵溶液，然后用磷酸调节pH值至3.0～5.0，得流动相，所述流动相中磷酸二氢铵浓度为10mmol/L～50mmol/L；2、先开启紫外光吸收检测器，使用波长为258～262nm的紫外光进行检测，然后将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，所述的手性色谱柱以a-酸性糖蛋白键合硅胶为填充剂，再用流动相以0.4～0.8ml/min流速进行冲洗；3、根据色谱图算出诺福韦及其对映异构体对照品的分离度以及采用峰面积归一化法计算替诺福韦待测品中替诺福韦及其对映异构体的含量。进一步，所述的手性色谱柱的型号为DAICELCHIRALPAKAGP，长度为150mm，填充剂粒径为5μm。进一步，所述的流动相中磷酸二氢铵的浓度为30mmol/L，pH值为4.0。进一步，所述的流动相的流速为0.6ml/min。进一步，所述的紫外检测波长为260nm。进一步，流动相冲洗时间为15min。所述替诺福韦待测品可以为替诺福韦原料药。与现有技术相比，本专利技术的有益效果和优点在于：1、本专利技术实现了替诺福韦及其对映异构体的有效分离和检测，能够更好地实现对中间体替诺福韦和成品富马酸替诺福韦二吡呋酯的质量控制，提高最终产品的品质，保证了其临床用药的安全有效。2、本专利技术的检测分析方法准确度高、灵敏度高、操作简便、成本低和分析时间短，为产品的研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。附图说明图1为S-PMPA对照品溶液在实施例1检测条件下的HPLC分析图。图2为R-PMPA对照品溶液在实施例1检测条件下的HPLC分析图。图3为实施例1中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图4为实施例2中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图5为实施例3中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图6为实施例4中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图7为实施例5中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图8为实施例6中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图9为实施例7中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图10为实施例8中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图11为实施例9中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图12为实施例10中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图13为实施例11中S-PMPA和R-PMPA混合对照品溶液的HPLC分析图。图14为实施例12中替诺福韦待测品溶液的HPLC分析图。图15为实施例13中替诺福韦待测品溶液的HPLC分析图。图16为实施例14中替诺福韦待测品溶液的HPLC分析图。图17为实施例15中替诺福韦待测品溶液的HPLC分析图。具体实施方式以下实施例中，所用的仪器和试剂如下：仪器：DIONEXUltimate3000高效液相色谱仪，采用DAICELCHIRALPAKAGP型手性色谱柱，内径为4.0mm，长度为150mm，该手性色谱柱以a-酸性糖蛋白键合硅胶为填充剂，填充剂粒径为5μm。试剂：磷酸二氢铵和磷酸均为分析级纯；R-替诺福韦对照品和S-替诺福韦对照品为申请人根据常规技术自制；流动相的配制方法如下：将磷酸二氢铵用去离子水配制成磷酸二氢铵溶液，然后用磷酸溶液调节pH值至3.0～5.0，且使磷酸二氢铵的浓度为10mmol/L～50mmol/L；混合对照品溶液的配制方法如下：1、替诺福韦对映异构体(S-PMPA)对照品贮备液的配制：精密称取S-PMPA对照品10.05mg，置于10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得；2、混合对照品溶液的配制：精密称取R-PMPA对照品9.02mg置100ml量瓶中，再精密量取1mlS-PMPA对照品贮备液置于所述的100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得。实施例11、开启紫外光吸收检测器，将混合对照品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，再用流动相进行冲洗，具体色谱条件如下：检测波长：UV-260nm流动相：pH4.0、磷酸二氢铵浓度30mmol/L流速：0.6ml/min冲洗时间：15min进样量：10μl柱温：20℃；2、所得HPLC如图3所示，根据色谱峰算出替诺福韦及其对映异构体对照品的分离度以及采用峰面积归一化法计算替诺福韦及其对映异构体的含量。3、结果如下：R-PMPA对照品的保留时间为5.150min，含量为90.05％；S-PMPA对照品的保留时间为6.237min，含量为9.95％，二者之间的分离度为2.86。按照上述检测方法分别分析检测100μg/ml替诺福韦(R-PMPA)对照品和10μg/ml替诺福韦对映异构体(S-PMPA)对照品，结果如图1和图2所示，R-PMPA的保留时间为5.220min，S-PMPA的保留时间为6.277min。实施例21、开启紫外光吸收检测器，将混合对照品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，再用流本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种替诺福韦R‑PMPA及其对映异构体S‑PMPA的高效液相色谱分析检测方法，其特征在于包括如下步骤：1.1、取替诺福韦待测品，用流动相配制成替诺福韦待测品溶液；所述的流动相的配制方法为：配制磷酸二氢铵溶液，然后用磷酸调节其pH值至3.0～5.0，得流动相；所述流动相中磷酸二氢铵浓度为10mmol/L～50mmol/L；1.2、先开启紫外光吸收检测器，使用波长为258～262nm的紫外光进行检测，然后将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，所述的手性色谱柱以a‑酸性糖蛋白键合硅胶为填充剂，再用流动相以0.4～0.8ml/min流速冲洗；1.3、根据色谱图，采用峰面积归一化法计算替诺福韦待测品中替诺福韦及其对映异构体的含量。

【技术特征摘要】
1.一种替诺福韦R-PMPA及其对映异构体S-PMPA的高效液相色谱分析检测方法，其特征在于包括如下步骤：1.1、取替诺福韦待测品，用流动相配制成替诺福韦待测品溶液；所述的流动相的配制方法为：配制磷酸二氢铵溶液，然后用磷酸调节其pH值至3.0～5.0，得流动相；所述流动相中磷酸二氢铵浓度为10mmol/L～50mmol/L；1.2、先开启紫外光吸收检测器，使用波长为258～262nm的紫外光进行检测，然后将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效色谱仪中的手性色谱柱中，所述的手性色谱柱以a-酸性糖蛋白键合硅胶为填充剂，再用流动相以0.4～0.8ml/min流速冲洗；1.3、根据色谱图，采用峰面积归一化法计算替诺福韦待测品中替诺福韦及...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤进，张茂，李霞，郑艳，戴正琳，王改改，史自东，
申请(专利权)人：湖北丽益医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42