工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法技术

本发明专利技术公开一种工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤：制备体积浓度在10‑90%有机溶剂的水溶液的流动相；制备钩吻素子样品的溶液；选用正相或反相硅胶用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实正相或反相硅胶色谱填料；将钩吻素子样品溶液注入平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；将收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。采用本发明专利技术分离纯化钩吻素子，获得高效液相色谱法检测纯度在99%以上的单体，样品得率95%以上。

【技术实现步骤摘要】
工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法
本专利技术涉及钩吻素子的产业化制备方法，具体是涉及工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法。
技术介绍
钩吻（GelsemiumelegansBenth.）为马钱科胡蔓藤属常绿木质藤本植物，全株入药。可用于治疗各类疼痛，尤其慢性神经性疼痛与癌性疼痛。钩吻的主要有效成分为吲哚类生物碱，其中含量最高的为钩吻素子，钩吻素子具有显著的镇痛、抗焦虑等功效，有望开发成具有自主知识产权的1类新药。目前分离纯化钩吻素子的技术主要有硅胶柱层析法（专利号：201110081565.3，公开日2012年10月17日）和高效逆流色谱法（专利号：200810071469.9，公开日2008年12月17日）。硅胶柱层析法采用氯仿-甲醇梯度洗脱，对设备性能要求高，溶剂用量大、毒性强，样品回收率低，所得钩吻素子的纯度仅为96%；高速逆流色谱法虽可以得到98.5%以上纯度的钩吻素子，但单次制备量仅为克级。工业制备液相色谱是大规模分离和制备中药活性成分的重要方法，按操作方式的不同分为连续色谱和间隙色谱。间隙色谱技术目前广泛使用的是动态轴向压缩柱系统（DynamicAxialCompression，简称DAC）。DAC法填装的色谱柱可以得到几乎接近分析柱的柱效，同时还具有操作简便、分离量大、周期短以及重现性好、质量可控等特点，易形成自动化生产，被广泛应用于生物、医药等领域的物质分离纯化。现有文献中未见有DAC分离纯化钩吻素子单体的报道。
技术实现思路
针对上述现有分离纯化技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的是提供一种制备过程简单，便于规模化生产，产品纯度高的钩吻素子的工业制备液相色谱分离方法。本专利技术的目的是这样实现的，所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤（1）制备流动相：流动相溶剂体系为有机溶剂的水溶液，体积浓度在10-90%；（2）制备样品的溶液：将钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解，采用有机滤膜对样品溶液过滤；（3）选用色谱填料：正相或反相硅胶；（4）填装动态轴向压缩柱：将色谱填料用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱填料，用步骤（1）配制的流动相冲洗2~3个柱体积，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态，完成动态轴向压缩柱的填装；（5）洗脱分离钩吻素子：将步骤（2）的样品注入步骤（4）平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；（6）浓缩钩吻素子：将步骤（5）收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。上述步骤（1）所述的洗脱溶剂系统的有机溶剂包括但不仅是甲醇或乙腈。上述步骤（2）所述的钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解后，采用有机滤膜对样品溶液过滤。所述的钩吻素子经适合的酸溶液酸化处理，重结晶可得相应的钩吻素子盐。其中所述钩吻素子盐选自盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐，优选是盐酸盐。上述步骤（3）中的动态轴向压缩柱的色谱系统。上述有机溶剂优选甲醇。上述流动相为甲醇-水。具体地说，本专利技术采用的技术方案是：本专利技术所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤（1）制备流动相：流动相溶剂体系为有机溶剂的水溶液，有机溶剂包括但不限于甲醇、乙腈等，浓度在10-90%，优选甲醇。（2）制备样品的溶液：将钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解，优选甲醇溶剂体系，采用0.45µm有机滤膜对样品溶液过滤。（3）选用色谱填料：正相或反相硅胶；正相硅胶粒径200-600目；反相硅胶粒径5µm~50µm，优选粒径8~12µm。（4）填装动态轴向压缩柱：将色谱填料用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱填料。用步骤（1）配制的流动相冲洗2~3个柱体积，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态，完成动态轴向压缩柱的填装。（5）洗脱分离钩吻素子：将步骤（2）的样品注入步骤（4）平衡后的动态轴向压缩柱，流动相梯度洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间。（6）浓缩钩吻素子：将步骤（5）收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体。钩吻素子经适合的酸溶液酸化处理，重结晶可得相应的钩吻素子盐。步骤（2）所述钩吻素子粗品为钩吻总生物碱或较低纯度的钩吻素子。本方法可以直接从钩吻总生物碱或较低纯度的钩吻素子经一步制备获得高纯度钩吻素子，也可和其他分离方法相结合，作为最后的纯化精制步骤，获得高纯度钩吻素子。本专利技术的有益效果：采用动态轴向压缩柱系统分离纯化钩吻素子，可以获得高效液相色谱法检测纯度在99%以上的单体，样品得率95%以上；洗脱有机试剂价格便宜、可回收利用，经济环保；制备工艺简单，周期短，制备量大，一次分离纯化可获得百克级钩吻素子，且产品质量可控。纯化所得钩吻素子与酸成盐扩大适用范围。本方法可作为钩吻素子及其可接受的盐在制备药品、保健品和饲料等方面应用时的产业化制备方法。附图说明图1是实施例1的钩吻素子粗品高效液相色谱图。图2是实施例1的检测样品分离色谱图。图3是实施例1的收集分离纯化钩吻素子的高效液相色谱图。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1钩吻药材粉末1.0kg，用体积浓度为95%乙醇加热回流提取后，大孔吸附树脂分离纯化，得纯度为26%的钩吻素子粗品。取800mg配制成浓度为200mg/mL的溶液，过滤除去不溶物，其高效液相色谱图见图1；将钩吻素子溶液泵入动态轴向压缩柱色谱系统（江苏汉邦，DAC-HB-50），柱尺寸为Φ50×250mm，十八烷基反相硅胶填料粒径为8µm，流动相为甲醇-水，甲醇-水的体积比为50:50，流速为60mL/min，洗脱时间40min。采用的紫外光检测波长为256nm，收集保留时间在30~36min的洗脱液，其样品检测分离色谱图见图2。经HPLC分析纯度为99.2%，收率为96.0%，其高效液相色谱图见图3。钩吻素子纯品加1mol/L盐酸溶解，旋干，加少量甲醇加热溶解，放置冷却析晶，得钩吻素子盐酸盐。实施例2钩吻药材粉末10.0kg，用体积浓度为95%乙醇加热回流提取后，过硅胶柱层析分离纯化，得纯度为41%的钩吻素子粗品。取1.0g配制成浓度为200mg/mL的溶液，过滤除去不溶物；将钩吻素子溶液泵入动态轴向压缩柱色谱系统（江苏汉邦，DAC-HB-50），柱尺寸为Φ50×250mm，十八烷基反相硅胶填料粒径为8µm，流动相为甲醇-水，甲醇-水的比例为50:50，流速为60mL/min，洗脱时间40min。采用的紫外光检测波长为256nm，收集保留时间在30~36min的洗脱液。经HPLC分析纯度为99.4%，收率为9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤（1）制备流动相：流动相溶剂体系为有机溶剂的水溶液，体积浓度在10‑90%；（2）制备样品的溶液：将钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂‑水溶液溶解，采用有机滤膜对样品溶液过滤；（3）选用色谱填料：正相或反相硅胶；（4）填装动态轴向压缩柱：将色谱填料用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱填料，用步骤（1）配制的流动相冲洗2~3个柱体积，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态，完成动态轴向压缩柱的填装；（5）洗脱分离钩吻素子：将步骤（2）的样品注入步骤（4）平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；（6）浓缩钩吻素子：将步骤（5）收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。

【技术特征摘要】
1.一种工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，包括以下步骤（1）制备流动相：流动相溶剂体系为有机溶剂的水溶液，体积浓度在10-90%；（2）制备样品的溶液：将钩吻素子粗品用有机溶剂或有机溶剂-水溶液溶解，采用有机滤膜对样品溶液过滤；（3）选用色谱填料：正相或反相硅胶；（4）填装动态轴向压缩柱：将色谱填料用异丙醇匀浆得匀浆液，将匀浆液倒入动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱填料，用步骤（1）配制的流动相冲洗2~3个柱体积，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态，完成动态轴向压缩柱的填装；（5）洗脱分离钩吻素子：将步骤（2）的样品注入步骤（4）平衡后的动态轴向压缩柱，流动相洗脱；用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备钩吻素子的收集起止时间；（6）浓缩钩吻素子：将步骤（5）收集到的钩吻素子单体溶液减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的钩吻素子单体；钩吻素子单体酸化成盐后扩大适用范围。2.根据权利要求1所述的工业制备液相色谱分离纯化钩吻素子的方法，其特征是步骤（1）所述的洗脱溶剂系统的有机溶剂包括但不仅是甲醇或乙腈。3.根据权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞昌喜，石冬梅，许盈，苏燕评，何灿强，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：福建,35